/. Embryol. exp. Morph. Vol. 34, 2, pp. 339-354, 1975 339 Printed in Great Britain Neuralation et migration nucleaire intercinetique chez des embryons de poulet ParPAUL-EMIL MESSIER1 ET C. AUCLAIR Department d'Anatomie, Universite de Montreal SUMMARY Neurulation and interkinetic nuclear migration in the chick embryo Neurulation and interkinetic nuclear migration were studied in cells of the forming neural tube of chick embryos submitted to a variety of treatments. Our results show that cytochalasin B (5 /tg/ml) does not protect microtubules against disruption occurring after 3h at 2°C nor does it prevent their repolymerization once they are cold-disrupted. However, db-cAMP protects microtubules against such cold disruption. We indicate that the inhibitory effect of cytochalasin B on interkinetic nuclear migration cannot be ascribed to an effect on microtubules. INTRODUCTION Dans plusieurs epitheliums embryonnaires (e.g. placodes nasales, placodes optiques, fosses nasales, tubules mesonephrotiques, segment epais de la paroi de coelome, etc. (Sauer, 1936, 1937)) les noyaux interphasiques sont animes d'un mouvement migratoire. Sauer, en 1936, decrivait deja ce processus de la migration nucleaire intercinetique dans le tube neural chez l'embryon de poulet. Le processus fut definitivement confirme par les etudes de Langman, Guerrant & Freeman en 1966. Selon Langman, Guerrant & Freeman (1966) 97,5 % des cellules nouvellement formees dans le tube neural chez l'embryon de poulet presentent leurs regions apicales reliees entre elles par des complexes de jonction (elles forment le feuillet neuro-epithelial proprement dit) alors que seulement 2,5 % des jeunes cellules sont libres dans l'epithelium et pourraient etre a l'origine des neuroblastes. De plus, dans ces cellules attachees par leur apex en un edifice tissulaire coherent, la phase S qui est la plus longue du cycle cellulaire (5 h), produit une accumulation de noyaux qui tous se retrouvent a la base de l'epithelium neural. Nous avons deja etudie le phenomene de la migration nucleaire intercinetique chez des embryons de poulet en voie de neurulation et fait ressortir l'importance du role joue par les microtubules dans ces mouvements (Messier, 1972; Messier & Auclair, 1973). D'autre part, recemment, nous avons montre (Messier & Auclair, 1974) que la cytochalasine B, que Ton sait etre un inhibiteur de la 1 Adresse de Vauteur: Departement d'Anatomie, Faculte de Medecine, Universite de Montreal, C.P. 6128, Montreal, P.Q. Canada. 340 P-E. MESSIER ET C. AUCLAIR neurulation (Karfunkel, 1972) s'avere aussi etre un puissant inhibiteur de la migration nucleaire intercinetique. La suggestion que les microtubules sont lies a la migration nucleaire intercinetique et les donnees qui indiquent que ces organites interviennent dans d'autres deplacements de structures (Watterson, 1965; Dahlstrom, 1968; Holmes & Choppin, 1968; Schliwa & Bereiter-Han, 1974) imposent que soit poussee plus loin l'etude des effets de la cytochalasine B et que soit apportee une attention particuliere a la possibilite de son action sur les microtubules. A cette fin, nous avons utilise la cytochalasine B dans des conditions qui bloquent la migration nucleaire intercinetique et avons tache de repondre aux questions suivantes: (1) la cytochalasine B est-elle une drogue stabilisatrice, protege-t-elle les microtubules contre les effets degradants du froid, (2) la drogue empeche-t-elle la repolymerisation des microtubules deja degrades par le froid, (3) Faction d'un agent stabilisateur ou protecteur des microtubules (i.e. qui empeche leur degradation a 2 °C) peut-elle faire echec a l'actioninhibitrice de la cytochalasine B sur la migration nucleaire intercinetique ? MATERIEL ET METHODES Tous les embryons de poulet, Gallus domesticus, ont ete incubes in ovo a 38 °C jusqu'aux stades 1 a 7 paires de somites; stades 7 a 9 selon la table de Hamburger & Hamilton (1951). Ensuite, tous furent explantes sur des milieux de culture prepares selon la methode de Spratt (1950) de facon a ce que leur feuillet ectodermique repose sur le milieu. Des embryons servant de temoins ont ete incubes in vitro a 38 °C pour une duree maximale de 6 h. D'autres subirent les traitements suivants. Traitements (1) Apres 1 h d'incubation a 38 °C (recuperation apres l'explanation) 25 embryons, explantes sur des milieux normaux, ont ete portes dans une chambre refrigeree a 2 °C et maintenus au froid pendant 3 h. Leur fixation a eu lieu a cette temperature avec des produits froids. (2) Dix embryons, explantes sur des milieux contenant 5 /tg/ml de cytochalasine B, ont ete incubes pendant 2 h a 38 °C pour permettre a la drogue de bien diffuser dans les specimens. Us furent ensuite portes a 2 °C pendant 3 h et fixes a cette temperature. (3) Seize embryons ont ete places sur des milieux contenant 5/tg/ml de cytochalasine B et incubes 2 h a 38 °C. Par la suite, ils furent portes a 2 °C pendant 3 h et finalement reportes a 38 °C pour 1 h. (4) Plus de 35 embryons ont ete explantes sur des milieux enrichis de N6,O2dibutyryle adenosine 3',5' cyclique monophosphate (db-cAMP) aux concentrations de 0-01, 0-1, 0-5, 1, 2, 10, 25 mM et 1 M. TOUS furent incubes a 38 °C pour une duree allant de 4 a 6 h. (5) Quarante-six embryons ont ete explantes sur des milieux de culture Neurulation et migration nucleaire chez le poulet 341 contenant du db-cAMP a des concentrations variant de 0,1 a 25 mM et furent incubes 1 h a 38 °C. Par la suite, ils ont ete portes dans une chambre refrigeree a 2 °C, maintenus au froid pendant 3 h et fixes a cette temperature. Nous avons realise ici qu'une concentration de 0,5 HIM en db-cAMP suffisait a proteger les microtubules des effets nocifs du froid. Cette concentration est done la seule qui fut utilisee par la suite. (6) Finalement, 23 embryons ont ete explantes sur des milieux contenant a la fois de la cytochalasine B (5 /*g/ml) et du db-cAMP (0,5 mM) et ils furent incubes a 38 °C pendant 3 h. Suite aux differents traitements, les embryons ont ete fixes au glutaraldehyde 1,25 % dans un tampon phosphate pendant 60 min et surfixes pendant 1 h au tetroxyde d'osmium 1 % dans le meme tampon. Une fois la deshydratation dans les alcools completee, les specimens ont ete enrobes dans l'Epon. Les coupes fines ont ete confectionnees a l'Ultrotome LKB et colorees dans une solution aqueuse d'acetate d'uranyle 1 % pendant 20 min puis au citrate de plomb. Les tissus ont ete examines avec un microscope electronique Siemens 1A et un appareil Philips 200. Pour la microscopie photonique, des sections d'un /im d'epaisseur ont ete confectionnees et colorees au bleu de toluidine 1 % en solution aqueuse. RESULTATS Le present travail confirme nos resultats publies recemment (Messier & Auclair, 1974) a l'effet que la cytochalasine B inhibe la neurulation chezl'embryon de poulet et qu'elle bloque la migration nucleaire intercinetique dans les cellules de 1'epithelium neural. Cet arret du deplacement des noyaux, leur accumulation desordonnee dans l'epaisseur du feuillet neuro-epithelial et le largage de nombreuses cellules dans la neurocoele provoquent des changements d'importance variable dans Failure generale du neuroepithelium (Fig. 3B). Exposition a 2 °C Nous avons deja decrit les effets de l'exposition d'embryons a 2 °C (Auclair & Messier, 1974). Nous ne rappelons ici que ce qui a trait au present titre a savoir qu'apres 3 h d'exposition a cette basse temperature (1) les cellules de 1'epithelium neural des embryons sont depourvues de microtubules (Fig. 1 A) et (2) ces cellules, qui normalement sont de forme asymetrique, prennent, dans ces conditions, une forme arrondie. Lors de ce traitement, la forme generale du tube neural comme elle apparait sur des sections transversales en fin de traitement, est fort variable. Chez certains embryons les perturbations physiologiques causees par le froid et l'arrondissement provoque des cellules laissent le tube neural inchange alors que chez d'autres, on observe une deterioration plus ou moins poussee de Failure generale du neuroepithelium. P-E. MESSIER ET C. AUCLAIR FIGURE 1 (A) Portions des cellules provenant d'un embryon expose a 2°C pendant 3 h. On y remarque que les microtubuies ne sont plus visibles dans le cytoplasme. x 60000. (B) Portion de deux cellules provenant d'un embryon d'abord place sur un milieu contenant de la cytochalasine B (5 /^g/ml) et incube 2 h a 38 °C et ensuite porte a 2°C pendant 3 h et fixe a cette temperature. On y remarque que la cytochalasine n'a pas empeche la degradation des microtubuies. x 43 000. Neurulation et migration nucleaire chez le poulet 343 Exposition a 2 °C sur milieux contenant de la cytochalasine B Nous avons voulu savoir si la cytochalasine pouvait stabiliser, proteger les microtubules contre la degradation qui s'effectue lorsque les embryons sont portes au froid. A cette fin, des embryons ont ete places sur des milieux contenant de la cytochalasine et incubes pendant 2 h a 38 °C. Par la suite, les specimens furent portes a 2 °C pendant 3 h et fixes a cette temperature. Dans ces conditions on assiste, tout comme si la cytochalasine etait absente des milieux, a la disparition des microtubules (Fig. 1B). Apres cetraitement, Failure generale de l'epithelium neural affiche des modifications qui sont en tout point comparables a celles observees apres une simple exposition a 2 °C. Exposition a 2°C et report a 38 °C sur milieux contenant de la cytochalasine B Pour voir si la cytochalasine pouvait empecher le retour des microtubules depolymerises par les basses temperatures, des embryons ont ete places sur des milieux contenant de la cytochalasine, incubes 2 h a 38 °C, portes a 2 °C pendant 3 h et ramenes ensuite a 38 °C pour 1 h. Dans les cellules du tube neural de ces embryons, on a toujours releve la presence de microtubules normalement constitues (Fig. 2 A). II en decoule que la drogue n'empeche pas la repolymerisation des microtubules qui ont ete degrades lors de l'exposition au froid. Ce traitement perturbe l'aspect general de l'epithelium. En effet, tout comme si la cytochalasine B avait ete utilisee seule et a la meme concentration, l'induction du largage des cellules dans la neurocoele et l'arret des mouvements nucleaires contribuent a deteriorer, mais d'une facon erratique, l'image habituelle de l'epithelium neural. Incubation sur milieux riches en db-cAMP Aux concentrations les plus faibles (0,01 a 0,5 mM) le db-cAMP n'a pas montre d'effet detectable sur le rythme de la croissance des jeunes embryons mis en experience. La morphologie generale des embryons etait comparable a celle des temoins (Fig. 2B) et les caracteres histologiques de leur tube neural etaient identiques a ceux releves chez les specimens normaux. L'activite mitotique a semble normale et la migration nucleaire intercinetique n'a pas ete affectee comme en temoignaient les noyaux en division qui n'etaient observes qu'a l'apex des cellules. Par contre, a la concentration de 25 mM, le db-cAMP a retarde la segmentation du mesoderme en somites. En effet, dans ces conditions, on ne comptait plus que deux nouvelles paires de somites acquises en 4 h d'incubation alors que chez les temoins, mis en experience au meme moment, on comptait regulierement quatre nouvelles paires de somites apres le meme temps d'incubation. Macroscopiquement ces specimens affichaient des defauts de neurogenese et de somitogenese (Fig. 2C). Chez ces embryons traites a la plus forte concentration, on a toujours eu l'impression d'observer plus de 22 EMB 34 344 P-E. MESSIER ET C. AUCLAIR Neurulation et migration nucleaire chez le poulet 345 microtubules (Fig. 2D), mais ces impressions n'ont pas encore ete controlees par une analyse objective. Exposition a 2 °C sur milieux riches en db-cAMP Pour verifier si l'AMP cyclique pouvait avoir quelqu'effet protecteur sur les microtubules, un certain nombre de specimens ont ete places sur des milieux contenant du db-cAMP. Ces embryons subirent une incubation d'une heure a 38 °C et furent ensuite portes, sur la meme milieu, a 2 °C pendant 3 h. Nous avons experiments avec plusieurs concentrations allant de 0,01 a 25 IHM. A la plus faible concentration le db-cAMP commence deja a montrer un effet protecteur de la degradation des microtubules. Aux concentrations les plus fortes, on observait quelquefois de la cytolyse. Cependant, a la concentration de 0,5 mM, le db-cAMP n'a montre aucun effet nefaste sur l'ensemble des ultrastructures cellulaires et cette dose suffisait a empecher la depolymerisation des microtubules (Fig. 3 A) qui normalement aurait due etre complete apres 3 h a 2 °C. Dans ces conditions, les cellules conservent leur forme asymetrique, mais l'aspect general de 1'epithelium nous est toujours apparu comparable a ce que Ton observait lorsque les embryons n'etaient traites qu'au froid. Incubation a 38 °C sur milieux contenant cytochalasine B (5 jug I ml) et db-cAMP (0,5 mm) Les embryons incubes pendant 3 h a 38 °C sur des milieux contenant a la fois la cytochalasine B et le db-cAMP presentaient des cellules a peine differentes de celles qu'on observe chez des specimens traites pour la meme duree a la cytochalasine B seulement. Les microtubules cytoplasmiques etaient bien evidents (Fig. 4B). Souvent, on a eu l'impression que la cytochalasine B n'alterait que fort peu les microfilaments apicaux et leur arrangement en faisceau (Fig. 4A). Chez ces embryons, la cytochalasine B jouait comme a l'accoutumee son role d'inhibiteur de la migration nucleaire intercinetique comme en temoigne FIGURE 2 (A) Portion de 1'epithelium neural d'un embryon explante sur un milieu enrichi de cytochalasine B, expose a 2°C puis reporte a 38 °C sur un milieu identique. On y voit que la presence de la cytochalasine B dans le milieu n'a pas empeche la repolymerisation des microtubules degrades par le froid. x 60000. (B) Image d'un embryon de poulet entier cultive in vitro sur un milieu additionne de db-cAMP a la concentration de 0-5 mM. La morphologie de cet embryon est en tout point comparable a celle de nos temoins. x 75. (C) Image d'un embryon de poulet entier cultive in vitro sur un milieu contenant du db-cAMP a la concentration de 25 mM. Tous les embryons ainsi traites affichaient des defauts de neurogenese et de somitogenese. x 75. (D) Portions de cellules provenant du tissu neural d'un embryon explante sur un milieu de culture contenant du db-cAMP a la concentration de 25 mM. Dans ces conditions, nous observons une plus grande abondance de microtubules. x 44000. 346 P-E. MESSIER ET C. AUCLAIR Neuruiation et migration nucleaire chez le poulet 347 la presence de noyau en division dans les parties medianes et externes de repithelium neural (Fig. 4C), ce qui est contraire a ce qui s'observe chez des embryons normaux (Fig. 3C). Suite a ce type de traitement, Failure generale du neuroepithelium a toujours ete comparable a ce qui fut observe apres des traitements a la cytochalasine B seule. DISCUSSION Nos resultats indiquent (Tableau 1) que le db-cAMP protege efficacement les microtubules des cellules de repithelium neural contre une depolymerisation qui devrait normalement se realiser lors de l'exposition d'embryons au froid. Cependant le db-cAMP, administre seul, ne semble pas affecter les fonctions microtubulaires car il n'a jamais empeche le phenomene de la migration nucleaire intercinetique de s'exercer normalement. Des resultats, accordant des proprietes stabilisatrices au db-cAMP, ont deja ete obtenus avec des cultures de neuroblasteme de souris par Kirkland & Burton (1972). De plus, notre observation, pour subjective qu'elle soit, d'une plus grande abondance de microtubules dans les cellules d'embryons traites au db-cAMP (25 mM) est en accord avec les donnees de Roisen, Murphy & Braden (1972) qui montrent que le db-cAMP induit l'assemblage des microtubules a partir d'un pool de sous-unites dans des cellules ganglionnaires d'embryons de poulet ages de 8,5 jours. De tous les traitements que nous avons pratiques, seule l'addition de dbcAMP couple a la cytochalasine B semble avoir uneffet sur les microfilaments. En effet, en presence de db-cAMP (0,5 mM) la cytochalasine B n'est pas toujours parvenue a deteriorer entierement l'association en faisceau de ces microfilaments, association qui, normalement, est detruite lorsque la cytochalasine B est administree seule (Messier & Auclair, 1974). Dans ce sens, d'ailleurs, nous avons remarque, de fac.on toute incidente, qu'une concentration de 5 /^g/ml de cytochalasine B, qui a elle seule inhibe totalement la segmentation du mesoderme en somites, permettait de voir, chez un certain nombre d'embryons traites, FIGURE 3 (A) Portion de l'epithelium neural d'un embryon explante sur un milieu de culture additionne de db-cAMP (0-5 ITIM) et porte a 2°C pendant 3 h. La presence des microtubules (fleches) indique que le db-cAMP les a proteges contre la degradation par le froid. x 60000. (B) Trois heures d'exposition a la cytochalasine B (5 /*g/ml) inhibe la migration nucleaire intercinetique. Les figures mitotiques s'accumulent (fleches) dans l'epaisseur de Fepithelium et plusieurs cellules sont larguees dans la neurocoele. Ce traitement, qui toujours altere profondement l'allure generale du neuroepithelium, l'affecte a des degres divers quel que soit l'age du specimen, x 900. (C) Microphotographie d'une coupe transversale au grand axe d'un embryon normal. On y voit la forme asymetrique des cellules de meme que des figures mitotiques (fleches) typiquement localisees pres de la neurocoele. x 900. 348 P-E. MESSIER ET C. AUCLAIR Neurulation et migration nucleaire chez le poulet 349 Tableau 1. Tableau recapitulatifdes divers traitements Migration nucleaire Jntercinetique Microtubules J. 38°C + + 2. 3. 4. 5. 6. 7. + - + + + + Traitements 38 + 2°C CB(38 + 2°C) CB(38 + 2 + 38°C) db-cAMP38°C db-cAMP(38 + 2°C) CB + db-cAMP38°C La cytochalasine B (CB) qui n'empeche pas la depolymerisation des microtubules (3) ni leur repolymerisation apres exposition a 2°C (4) inhibe la migration nucleaire intercinetique malgre la presence du db-cAMP (7), qui lui est un agent protecteur des microtubules (6). 1'addition d'une paire de somites en une heure d'incubation et ceci lorsque les specimens etaient incubes sur des milieux contenant a la fois la cytochalasine (5 /'g/ml) et le db-cAMP (0,5 mM). Ces observations sont a rapprocher des travaux de Miranda, Godman, Deitch & Tanenbaum (1974) qui suggerent que les effets de la cytochalasine D sur la contraction cytoplasmique pourrait etre conditionnes par la teneur en AMP cyclique cellulaire et rapprocher aussi de ceux de Puck, Waldren & Hsie (1972) qui ont montre que le db-cAMP diminuait sensiblement le pouvoir qu'a la cytochalasine B d'induire des petites cloches (zeiotic blebs) a la surface des cellules. Nos observations, qui suggerent une correlation inverse entre la reponse a la cytochalasine et le taux intracellulaire d'AMP cyclique (Miranda et ah 1974), font presentement Pobjet d'une analyse specifique. Au cours des cinquante dernieres annees, l'etude souvent repetee de la plaque medullaire a donne naissance a un certain nombre d'hypotheses liees au meca- FIGURE 4 (A) Fort grossissement des regions apicales de cellules de l'epithelium neural d'un embryon explante sur un milieu contenant a la fois de la cytochalasine B et du db-cAMP. Dans ces conditions, on a souvent remarque la presence de filaments encore associes en faisceau. Faisceau de filaments (grandesfleches),filamentsintacts (petites fleches). x 80000. (B) Dans les cellules du tube neural d'embryons traites a la fois a la cytochalasine B et au db-cAMP les microtubules sont toujours presents, x 44000. (C) Microphotographie d'une coupe transversale au grand axe d'un embryon ou Ton apercoit des mitoses (fleches) situees a la base et dans les regions medianes de l'epithelium neural. Chez cet embryon traite a la fois a la cytochalasine B et au dbcAMP, il y a inhibition de la migration nucleaire intercinetique. Cet arret des deplacements nucleaires et le largage excessif des cellules dans la neurocoele contribuent a modifier Pallure generale de Fepithelium lui conferant ici un aspect en V. x900. 350 P-E. MESSIER ET C. AUCLAIR nisme de son invagination. Deja, en 1924, Giersberg rejetait la possibility qu'interviennent mecaniquement (par des poussees) les tissus voisins de repithelium neural. Toutefois, une etude plus recente de Schroeder (1970) indique qu'au nombre des forces en jeu au moment de la neurulation chez Xenopus laevis, il faut compter avec les poussees des myotomes et de l'ectoderme epidermique. D'autre part, on n'evoque plus aujourd'hui la question des gradiants d'hydratation (Brown, Hamburger & Schmitt, 1941) et Ton doit a Gillette (1944) d'avoir montre qu'a elle seule Pactivite mitotique ne pouvait expliquer les mouvements qui entrainent la neurulation. En fait, aujourd'hui, c'est a la cellule de repithelium neural que Ton accorde l'essentiel du role qui doit etre joue aftn que s'invagine la plaque medullaire (Burnside, 1973). Et, c'est au sein meme de cette cellule qu'on cherche a deceler les forces qui sont capables d'induire les deformations cellulaires observees au cours de la neurulation. Deux series d'observations supportent l'idee que ces cellules possedent en elles la capacite de changer de forme, de s'allonger. Premierement, Holtfreter (1947) a montre que des cellules isolees de la plaque neurale de salamandre conservaient leur forme etiree et meme qu'elles continuaient a s'allonger lorsque mises en culture. Deuxiemement, Adler (1971) a montre que des cellules neuroepitheliales dissociees et mises en culture commencent par former des agregats de cellules de formes irregulieres, mais que bientot apparaissent des formations en placodes constitutes de cellules allongees dont certaines presentent l'aspect classique en col de bouteille. L'observation de ces masses de cellules dissociees, isolees des tissus avoisinants et qui se rassemblent ensuite en un tissu qui s'invagine, porte logiquement a considerer comme intrinseque aux cellules cette capacite de deformation. La question done qui se pose maintenant est de savoir quels sont les agents cytoplasmiques de la deformation cellulaire. Pour la majorite des auteurs les microtubules (Messier, 1969; Schroeder, 1970; Karfunkel, 1971; Burnside, 1973) interviendraient pour forcer, ou maintenir, Pelongation cellulaire alors qu'un anneau de filaments apicaux (Baker & Schroeder, 1967; Schroeder, 1970; Karfunkel, 1972; Burnside, 1973) etranglerait les apex cellulaires donnant origine a des cellules a long col etroit. Or, cote microtubules, il est fort probable en effet (Auclair & Messier, 1974) qu'il existe une correlation entre la presence des microtubules et la forme allongee des cellules de l'epithelium neural tout comme ce type de correlation semble aussi exister dans bon nombre d'autres systemes (Byers & Porter, 1964; Tilney, 1968). Mais, ceci dit, il reste encore a savoir comment ces structures tubulaires en arrivent a allonger les cellules. Burnside (1973) offre trois interpretations possibles du mecanisme d'action des microtubules et favorise celle qui a trait au transport cytoplasmique coordonne qui tend a diriger les constituants cellulaires vers la base des cellules. Cependant, l'auteur neglige la question de la migration nucleaire intercinetique. En 1973, nous suggerions (Messier & Auclair, 1973) que le phenomene de la migration nucleaire intercinetique, qui provoque une accumulation de noyaux a la base ~Nemulation et migration nucleaire chez le poulet 351 de Pepithelium neural, pourrait fort bien, a cause des deformations des bases cellulaires qu'il entraine, etre une des forces determinantes dans l'induction de la forme cellulaire {bottle-shaped) qui force la plaque medullaire a s'invaginer (Messier, 1974). Or, ces mouvements nucleaires sont tributaires des microtubules (Messier & Auclair, 1973) et Phypothese que favorise Burnside (1973) sur le role des microtubules dans les cellules de Taricha est compatible avec ces mouvements migratoires. Du reste, Zwaan & Hendrix (1973) et Hendrix et Zwaan (1974) dans leurs etudes de Finvagination des placodes optiques chez Pembryon de poulet, mettent l'accent sur le role de la migration nucleaire intercinetique comme agent des deformations cellulaires qui entraine l'invagination dans cet epithelium. En resume, nous croyons que l'invagination de la plaque medullaire pourrait etre consequente a Pelargissement des bases cellulaires qu'occasionnent les noyaux qui s'accumulent dans les portions externes de l'epithelium. Cette accumulation de noyaux decoule directement de la migration nucleaire intercinetique, un phenomene qui nous semble lie a la presence des microtubules. Ces considerations n'excluent en rien la possibility qu'interviennent d'autres attributs des cellules. Par exemple, l'endocytose, ou la resorption de membrane du cote apical, aurait aussi pour effet d'augmenter Pasymetrie cellulaire (Lof berg, 1974) et l'ensemble des dispositifs d'attachements cellulaires pourrait, en plus d'assurer a l'epithelium sa cohesion, jouer un role actif dans la morphogenese neurale. Cette intervention des dispositifs d'accrochage dans la morphogenese a deja ete discutee par Weiss (1961) de meme que par Gustafson & Wolpert (1963) qui insistent sur leur importance pour l'invagination d'epitheliums et finalement par Adler (1971) qui en demontre experimentalement Pimportance dans l'invagination de tissu neural. Nos considerations, cependant, remettent en cause le mecanisme d'action des microfilaments. En effet, bien que dans nos specimens les microfilaments fussent morphologiquement intacts et meme si leur association en faisceau n'etait pas toujours alteree, la cytochalasine B parvenait chaque fois (meme en presence de db-cAMP) a bloquer la migration nucleaire intercinetique. Evidemment, malgre que dans ces conditions on obtienne encore des images de faisceaux intacts de microfilaments, il ne peut etre exclu qu'un nombre critique de faisceaux aient ete detruits. Au sujet des microfilaments, il faut souligner qu'il n'existe aucune preuve directe a Peffet que, dans nos specimens, ces microfilaments soient contractiles. Toutefois, il est permis d'entretenir la presomption qu'ils le soient (Huxley, 1973), compte tenu de la grande variete de types cellulaires ou Pon a reussi a 'decorer' specifiquement de semblables filaments a la meromyosine lourde (Spooner et al. 1973; revue dans Huxley, 1973). Par ailleurs, on n'a pas, non plus, de preuve directe de Paction de la cytochalasine B sur ces microfilaments. Nous demontrons ici que la cytochalasine B n'a pas d'effet direct sur les microtubules, qu'elle ne favorise ni leur degradation ni leur stabilisation. Par 352 P-E. MESSIER ET C. AUCLAIR contre, la drogue, que certains auteurs accusent de detruire les microfilaments (Wessells et al. 1971) bloque la migration nucleaire intercinetique. Or, meme si la cytochalasine B detruisait les microfilaments ou leur organisation en faisceau ou leur 'fonction' dans les cellules de nos specimens (ce qui n'est pas du tout evident) on aurait, compte tenu de leur position perpendiculaire a la direction des mouvements, grande peine a s'expliquer pourquoi les noyaux, qui sont refoules a la base des cellules n'obeissent pas a la tendance normale de remonter vers l'apex des cellules une fois la contrainte qu'imposent les microfilaments disparue. En fait, le raisonnement inverse semble plus facilement applicable. En effet, les travaux de Miranda et al. (1974) montrent que chez plusieurs types cellulaires la cytochalasine, loin de detruire les microfilaments, a pour effet d'induire une contraction tonique generate soutenue. Si la cytochalasine B produisait un effet semblable dans nos specimens elle pourrait alors, par la contrainte qu'elle impose sur l'ensemble du cytoplasme, rendre difficile ascension normale des noyaux. En definitive, la cytochalasine B dont les effets sont des plus controverses (Burnside, 1972; Miranda et al. 1974) inhibe la migration nucleaire intercinetique sans affecter morphologiquement les microtubules et elle exerce son action par une voie qui nous est encore inconnue. RESUME La neurulation et le phenomene de la migration nucleaire intercinetique ont ete etudie dans les cellules de l'epithelium neural d'embryons de poulet en voie de neurulation et soumis a une serie de conditions experimentales. Les resultats indiquent que la cytochalasine B (5 /*g/ml) ne protege pas les microtubules contre la degradation que produit une exposition de 3h a 2°C et qu'elle n'empeche pas la repolymerisation des microtubules lorsqu'ils ont ete degrades par le froid. Par contre le db-cAMP protege les microtubules contre la degradation par le froid. On demontre que l'action inhibitrice de la cytochalasine B sur la migration nucleaire intercinetique ne peut etre attribute a un effet de la drogue sur les microtubules. L'un des auteurs (PEM) est Scholar du Conseil de recherches medicales du Canada. Ce travail a ete subventionne par le Conseil de recherches medicales du Canada et par le Ministere de la Sante et du Bien-etre Social, section RODA. Nous remercions Mme G. Anglade et Mile Basset pour leur aide technique, M. Leveille pour son travail photographique et Mile Adolphe pour son travail secretarial. REFERENCES R. (1971). 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