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Caractérisation d’un mutant
Non pathogène de Botrytis cinerea
UMR 217, Laboratoire de Pathologie Végétale
INA / PG - INRA - Paris VI
Projet B. cinerea
Martine Boccara (Prof Paris VI)
Marie-Christine Soulié (MC Paris VI)
Caroline Kunz (MC Paris VI)
Collaborations :
A. PUGIN, INRA Dijon
C. LEVIS, INRA Versailles
Obtention de mutants altérés
dans leur pouvoir pathogène
Méthode :
Mutagénèse insertionnelle aléatoire
(plasmide pAN7-1)
Résultats :
Collection de 1577 transformants
19 transformants altérés dans
leur agressivité (913 testés)
Un seul transformant
non-pathogène A336
Caractérisation du mutant A336
1. Phénotype in planta
Non pathogène
Provoque des mini-nécroses
2. Croissance in vitro
Idem Bd90 (souche sauvage) sur
différents milieux à pH 5
Réduite à pH > 6
Pas de conidie ni de sclérote
Caractérisation du mutant A336 (suite)
3. Analyse moléculaire et génétique
La mutation est monogénique
La mutation n’est pas étiquetée
4. Analyse biochimique
A336 produit peu ou pas d’acide oxalique
Co-ségrégation entre le caractère NP et
l ’incapacité à acidifier le milieu
5. Analyse d ’expression de gènes
Comparaison des EST entre A336 et Bd90
Collaboration avec C. LEVIS,
INRA Versailles
Analyse moléculaire et génétique
de la mutation de A336
1. Southern blot :
Mise en évidence d’une seule insertion
du plasmide pAN7-1
2. Analyse génétique de la mutation :
croisement A336 X SAS405 et
analyse de cinq asques
Ségrégation 1:1 du PP
Ségrégation 1:1 de l ’insertion de
pAN7-1
A336 est un mutant :
- non-pathogène
- mini-nécroses
- pousse mal à pH élevé
- acide oxalique
Clonage du gène pléiotrope non étiqueté
clonage par complémentation
clonage positionnel
Séquençage du génome de B. cinerea
Pourquoi A336 est-il non pathogène?
A336 provoque des mini-nécroses
HR?
Bd90 provoque une zone fluorescente
à l’interface partie saine - macération
HR?
Govrin et Levine 2000 :
B. cinerea déclenche une réaction d’hypersensibilité
(mort cellulaire) ce qui facilite la colonisation de la plante.
Le champignon nécrotrophe se sert du
mécanisme de défense de la plante pour être pathogène.
Hypothèse :
La HR produite lors de l’interaction entre A336
et son hôte est efficace pour stopper la maladie
A336 ne peut plus se
protéger contre les AOS
(à vérifier)
HR
in vitro A336 produit une activité
élicitrice comme Bd90
en collaboration avec A. PUGIN
et B. POINSSOT, INRA Dijon
Acide oxalique supprime le burst
oxydatif