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Long-term Engraftment of Single
Genetically Modified Human
Epidermal Holoclones Enables
Safety Pre-assessment of
Cutaneous Gene Therapy
F Larcher, E Dellambra, L Rico, S Bondanza, R Murillas, C
Cattoglio, F Mavilio, JL Jorcano, G Zambruno, M Del Rio
Avant - propos
• Le DICS-X ou X-SCID
Le DICS (Déficit Immunitaire Combiné Sévère) est un
groupe de troubles génétiques rares caractérisé par des
anomalies profondes de l'évolution et de la fonction des
LT, LB et des cellules NK. La forme la plus courante est
le DICS lié à l'X (environ 50 % des cas). Par son
attachement au chromosome X, le DICS-X n'affecte que
les garçons. Il se caractérise par 1 anomalie du gène
codant la chaîne gamma courante (γc) commune aux
récepteurs de plusieurs interleukines (IL2, 4, 7, 9, 15),
conduisant à une absence totale de LT et de cellules
NK. Il touche en moyenne un bébé sur 200.000 à la
naissance (5 nvx-nés/an en France) .
Possibilités thérapeutiques
• Greffe de moelle osseuse
• Thérapie génique avec utilisation d’un
vecteur
• (Thérapie génique avec utilisation de méga
nucléase ?)
Rappels historiques
• 1990  premier essai de thérapie génique
sur une fillette ADA-SCID mené par WF
Anderson et RM Blaese avec un vecteur
rétroviral
• 1999 Vecteur rétroviral pour pallier la
déficience du gène IL2RG (récepteur)
responsable du X-SCID équipe du Pr Alain
Fischer, hôpital Necker (INSERM U768).
Rappels historiques
• 2002  suspension des essais
thérapeutiques : cas de leucémie chez deux
enfants traités par thérapie génique
• 2003  début d’explication insertion à
proximité d’un proto-oncogène LMO2 + les
2 enfants étaient les plus jeunes et avaient
reçues plus de cellules
Problématique
Volonté de pré-évaluer un isolat de cellules
souches (CS) modifiées génétiquement et de
leur progéniture.
Pas possible pour l’instant techniquement sur
CS hématopoïétiques donc tentées avec CS
épidermiques
But: Génerer une peau humaine à partir de CS
isolées, modifiées et pré-évaluées.
Les CS épidermiques
• Les CS épidermiques sont retrouvées sous
la forme de kératinocytes (90% des cellules
de l’épiderme)
• 3 types de CSE en fonction de leur
possibilité à former des colonies:
• Holoclones (potentiel le plus élevé)
• Méroclones
• Paraclones (potentiel le plus faible)
Résultats: Isolation des holoclones
et procédure de greffe
Résultats: détermination des
holoclones
Apparence
Macroscopique de
l’architecture de
l’épiderme
Résultats: Histologie
En m, expression de p63 marqueur d’une grande
capacité proliférative
Résultats: Stabilité et intégration
chromosomique
Résultats : Sites d’intégration
proviraux
Conclusion
• Nécessité technique rigoureuse de greffe et
culture organotypique
• Intérêt de développer et tester les cellules
modifiées avant transplantation
• Technique peu compatible avec le tissu
hématopoïétique
• Risques non négligeables de mutagénèse
Clinique
Intérêt de cette expérience chez les enfants atteints
de Xeroderma Pigmentosum mais aussi chez des
patients atteints de diverses génodermatoses.
Alternative thérapeutique
Une méganucléase est une protéine qui coupe l'ADN à
un endroit très précis sur un chromosome. Une fois
que l'ADN est coupé, il doit être réparé par les
systèmes endogènes naturels de maintenance de la
cellule. En fournissant une molécule d'ADN
fabriquée spécifiquement (appelée matrice de
réparation) qui sera utilisée comme matrice
nucléique pour réparer la cassure, on peut diriger le
mécanisme de réparation vers un processus
d'insertion, de suppression ou de correction.
Merci de votre attention