LA MICROSCOPIE :

LA MICROSCOPIE :
Méthode d’étude
des cellules et tissus
I. Introduction :
 Taille cellule : 10 à 100 µm  non visible à l’œil nu
 Besoin d’appareils grossissant  le microscope.
 Existe différents microscopes : optique et électronique
II. Principe du
microscope optique
à fond clair
Oculaire
Objectif
Préparation
Condenseur
Image virtuelle
inversée
Source de
lumière
www.labscientific.com
III. Caractéristiques du MO
- Le pouvoir séparateur ou résolution:
- La distance de travail:
Grossisse
-ment
X4
X10
X40
X100
Distance
de travail
mm
17-20
4-8
0.5-0.7
0.1
Pouvoir de
résolution
2.3
0.95
0.30
0.18
Caractéristiques (suite)
 Le grandissement G :
Comment calculer la taille réelle d’un
objet observé au microscope ?
Retrouvez la bonne équation en utilisant ces termes :
Taille de l’image observée ; taille réelle ; grandissement
 le grossissement total :
IV. Les autres microscopes optiques.
1. Le microscope à fond noir
http://colmic.free.fr/galerie/pissenlit.jpg
http://www.svt.ac-aix-arseille.fr/pistpeda/micro/images/fondnoir.jpg
2. Le microscope à contraste de phase
AVEC
Sédiments urinaires avec et sans contraste de phase.
SANS
www.acorata.ch/.../hematurie1.jpg
3. Le microscope à fluorescence
Cellule en mitose : stade anaphase
Actine marquée
à la phalloïdine
fluorescente
Chromosomes
marqués au DAPI
Microtubules
marqués par la GFP
V. Le microscope électronique
 Étude de l’ultrastructure cellulaire
 Source = faisceaux d’électrons
 2 types de M.E :
• M.E à Transmission (MET)
• M.E à Balayage (MEB)
1. Principe du MET
Cellule eucaryote au MET
microscopies.med.univ-tours.fr/.../ex-met-1.png
www.ac-nancy-metz.fr/.../fich2/cellule/sem.gif
2. Principe du MEB
Érythrocytes vus au MEB
www.molecularstation.com/molecular-biology-im...
www.ac-nancy-metz.fr/.../fich2/cellule/sem.gif
2. Pour la microscopie électronique
 Que des cellules fixées donc mortes
 Observation sous vide  préparation particulière des organes à observer :
• Organes fixés, déshydratés, inclus dans de la paraffine puis coupés en coupes
ultra-fines.
 Colorations par des sels de métaux lourds opaques aux électrons : Pb, U.
• Crées un contraste facilitant l’observation.
VIII. Comparaison M.O et M.E.
.
Document 2
Microscopes
Grandissement
Source
Lentilles
Caractéristiques
Image reçue
Préparation
Colorants
Avantages
Inconvénients
Unités
Optique
De 40 à 1500
Électronique
Jusqu’à 1 000 000
Lampe à photons
Canon à électrons
De verre
Magnétiques
Lumière non déviée par l’air : Électrons dispersés par
pas besoin de mettre sous vide l’air : mettre sous vide
Par l’œil directement
États frais ou frottis puis
coloration
L’œil différencie les
couleurs visibles.
Sur un écran fluorescent
Pas d’états frais ni colorants.
Coupes ultra-fines.
Contraste par dépôts de
sels de métaux lourds.
Peu encombrant, emploi facile.
États frais OK. Couleurs.
Ultra-structure des cellules
Pas d’analyses très poussées
Encombrant, pas d’états
frais. Très cher.
µm ou mm
Angstrom = 0,1 nm