Dosage immunologique par électrochimiluminescence
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Elecsys® HE4 Dosage immunologique par électrochimiluminescence (ECLIA) pour la détermination quantitative de la protéine épididymaire humaine de type 4 (human epididymal protein 4 -HE4) dans le sérum et le plasma Indication Le cancer de l’ovaire est la quatrième cause de décès par cancer chez la femme dans le monde. Les régions les plus avancées sur le plan économique, dont l’Amérique du Nord, l’Europe, l’Australie et la Nouvelle-Zélande, enregistrent la plus forte incidence. Le cancer de l’ovaire, forme la plus mortelle de cancer gynécologique, est potentiellement curable s’il est diagnostiqué précocement 1 et pris en charge par des chirurgiens ayant l’expérience du traitement de cette maladie.2, 3 Toutefois, les symptômes du cancer ovarien sont liés à la présence de masses annexielles et sont souvent vagues et non spécifiques. Par conséquent, 70 à 75 % des cancers de l’ovaire sont dépistés à un stade avancé. D’après le Centre international de recherche sur le cancer, le taux de survie à cinq ans des patientes atteintes d’un cancer ovarien est de 46%. Or, lorsque la maladie est diagnostiquée plus tôt, ce taux augmente jusqu’à atteindre 94%. La protéine HE4 fait partie de la famille des protéines acides du lactosérum à quatre ponts disulfures (whey acidic four-disulfide core WFDC) qui aurait des propriétés inhibitrices de la trypsine.4 Elle a d’abord été déterminée dans l’épithélium de l’épididyme distal. Ce biomarqueur n’est que faiblement exprimé dans l’épithélium des tissus des appareils respiratoire et reproducteur, y compris ceux de l’ovaire, mais il l’est fortement dans les tissus des tumeurs ovariennes. En outre, on retrouve des taux élevés de HE4 dans le sérum des patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire. Nouveau marqueur tumoral, la protéine HE4 devrait faciliter l’évaluation du risque lié au cancer épithélial de l’ovaire. Principe du test: dosage en technique sandwich en une étape Anticorps monoclonal anti-protéine HE4 humaine marqué à la biotine Anticorps monoclonal anti-protéine HE4 humaine marqué au ruthénium Ru 9 min Molécule tapissée de streptavidine Ru 9 min Ru HE4 dans l’échantillon Mesure Technologie Elecsys L’ECL (électrochimiluminescence) est la technologie utilisée par Roche pour la détection par dosage immunologique. Reposant sur cette technologie et associé à des dosages immunologiques sensibles, spécifiques et bien conçus, le système Elecsys offre des résultats fiables. Le développement des dosages immunologiques par ECL s’appuie sur l’utilisation de ruthénium et de tripropylamine (TPA). La réaction par chimiluminescence qui permet la détection du complexe réactionnel est déclenchée en appliquant une tension électrique dans la solution de test, ce qui génère une réaction précisément contrôlée. La technologie ECL s’adapte au principe de nombreux dosages immunologiques tout en offrant un niveau de performance supérieur. Marqueur précoce de sensibilité accrue pour le diagnostic du cancer de l’ovaire •En tant que marqueur tumoral unique, HE4 présente la sensibilité la plus élevée pour détecter le cancer de l’ovaire, en particulier au stade I, phase précoce et non symptomatique.5,6 •En outre, HE4 montre une sensibilité accrue par rapport à CA125 dans la détection du cancer de l’endomètre de stade précoce.7,8 •Un taux sérique élevé de HE4 associé à un taux normal de CA125 suggère la présence d’un cancer de l’ovaire ou d’autre nature, par exemple un cancer de l’endomètre.8 Bonne discrimination entre masses ou kystes ovariens bénins et cancer de l’ovaire •L’association des biomarqueurs HE4 et CA125 peut permettre de déterminer si une masse pelvienne est bénigne ou maligne chez la femme ménopausée ou non (voir la fiche technique ROMA). •Le duo CA125 et HE4 est un indicateur de malignité plus précis que ne l’est chaque biomarqueur employé seul. Huhtinen et al. font état d’une sensibilité de 78,6 % à un taux de spécificité de 95 % dans la différenciation du cancer de l’ovaire par rapport aux kystes endométriaux.8 Meilleure gestion du traitement du cancer de l’ovaire : HE4 renforce le potentiel de CA125 pour un meilleur suivi du cancer de l’ovaire •La protéine HE4 peut être utilisée pour surveiller l’évolution de la maladie chez les patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire. Le taux de HE4 reflète la réponse clinique au traitement ou une récidive chez des femmes dont la maladie a été diagnostiquée par tomodensitométrie9. La protéine HE4 pourrait donc être un précieux indicateur précoce de récidive.10-12 •Chez la plupart des patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire, les deux marqueurs sont exprimés dans des proportions significatives. Certaines femmes cependant ne sont positives qu’à l’un des deux, HE4 ou CA125. L’utilisation conjointe de CA125 et HE4 pourrait ainsi faciliter la détection d’une maladie récidivante en réduisant le nombre de patientes négatives à l’un des deux biomarqueurs, pour une plus grande précision de diagnostic. Caractéristiques du dosage Elecsys® HE4: Durée du test Principe Calibration Traçabilité Échantillons Volume d’échantillon Limite de détection (LdD) Domaine de mesure (valeur minimale définie par la LdD) Variation intermédiaire Répétabilité 18 min. Dosage en technique sandwich en une étape HE4 EIA de Fujirebio Diagnostics, Inc. Préparation internationale de référence, code NIBSC 98/574 • Sérum recueilli dans des tubes à essai standard ou contenant un gel séparateur • Plasma Li héparine, plasma EDTA K 2 - et EDTA K3 10 µL 15 pmol/L 15 – 1500 pmol/L Analyseur cobas e 411, analyseur Elecsys® 2010: 2,7 – 4,3 % cobas e 601 / e 602 modules, E170: 2,6 – 3,4 % Analyseur cobas e 411, analyseur Elecsys® 2010: 1,3 – 1,8 % Modules cobas e 601 / e 602, E170: 1,5 – 1,9 % Valeurs de référence Une étude conduite dans une clinique allemande sur la réalisation du dosage Elecsys HE4 sur le sérum de 358 femmes apparemment en bonne santé a fourni les résultats suivants : HE4 (pmol/L) Age (en années) < 40 40-49 50-59 60-69 ≥ 70 n 127 65 60 60 46 Médiane 42,0 44,3 47,9 55,0 62,1 95 e percentile 60,5 76,2 74,3 82,9 104,0 La répartition des valeurs du dosage HE4 déterminées chez 896 femmes dans deux cliniques, l’une en Espagne l’autre en Allemagne, est synthétisée dans le tableau ci-après: Valeurs obtenues avec Elecsys HE4 (pmol/L) 0,0 – 70,0 70,1 – 140,0 140,1 – 500,0 500,1 – 1500,0 > 1500,0 n (répartition en pourcentage) Apparemment en bonne santé Pré-ménopausées 90 Ménopausées 106 76 (84,4 %) 63 (59,4 %) 13 (14,4 %) 40 (37,7 %) 1 (1,1 %) 3 (2,8 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) Affections bénignes Pré-ménopausées Ménopausées Grossesse Maladie non gynécologique ICC a 177 102 50 35 160 (90,4 %) 62 (60,8 %) 50 (100 %) 16 (45,7 %) 16 (9,0 %) 31 (30,4 %) 0 (0,0 %) 6 (17,1 %) 1 (0,6 %) 9 (8,8 %) 0 (0,0 %) 6 (17,1 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) 7 (20,0 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) 23 9 (39,1 %) 11 (47,8 %) 3 (13,0 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) Cancer CaOv b, préménopausique CaOv, postménopausique C. endométrial C. mammaire C. gastro-intestinal C. pulmonaire C. vésical 39 97 49 47 46 23 12 12 (30,8 %) 10 (10,3 %) 8 (36,7 %) 22 (46,8 %) 9 (41,3 %) 5 (21,7 %) 3 (25,0 %) 7 (17,9 %) 19 (19,6 %) 20 (40,8 %) 19 (40,4 %) 20 (43,5 %) 7 (30,0 %) 4 (33,3 %) 13 (33,3 %) 34 (35,1 %) 9 (18,4 %) 5 (10,6 %) 6 (13,0 %) 10 (43,5 %) 4 (33,3 %) 5 (12,8 %) 28 (28,9 %) 1 (2,0 %) 1 (2,1 %) 1 (2,0 %) 1 (4,3 %) 1 (8,3 %) 2 (5,1 %) 6 (6,2 %) 1 (2,0 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) 0 (0,0 %) a b CHF = insuffisance cardiaque congestive Cancer de l’ovaire Dans cette étude, des valeurs égales ou inférieures à 140 pmol/l ont été relevées chez 98 % des femmes apparemment en bonne santé. Il est recommandé à chaque laboratoire de définir sa propre valeur de référence applicable à la population d’intérêt. Suivi de l’évolution de la maladie chez les patientes atteintes du cancer de l’ovaire L’efficacité du dosage Elecsys HE4 en tant qu’outil de suivi de l’évolution de la maladie chez les patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire a été déterminée en évaluant les variations du taux de HE4 par rapport à celles de l’état pathologique sur des séries d’échantillons de sérum prélevés chez 100 patientes. Cette étude de suivi a rassemblé au total 375 échantillons à raison d’au moins trois échantillons par patiente. Il a été établi qu’une variation positive de la protéine HE4 correspondait à une augmentation de son taux d’au moins 20 % par rapport au dosage précédent. Ce niveau de variation prend en compte la variabilité du dosage ainsi que la variabilité biologique. 58,0 % (soit 29 sur 50) des échantillons patientes montrant une variation positive ont coïncidé avec une progression de la maladie alors que 84,0 % (273 sur 325) des séries d’échantillons ne montrant aucune variation significative du taux de HE4 ont corroboré une absence d’évolution. Le taux de concordance totale a été de 80,5 % (302 sur 375). Le tableau suivant présente les données selon un schéma de classification de 2 x 2. Variation de l’état pathologique par paire séquentielle Augmentation de la concentration de HE4 Progression ≥ 20% 29 < 20% 21 Total 50 Références des réactifs: Matériel Elecsys HE4 Elecsys HE4 CalSet PreciControl HE4 Diluent Universal Configuration produit 100 Tests 4 x 1 mL 2 x 1 mL 2 x 16 mL diluant pour échantillon ou 2 x 36 mL diluant pour échantillon Références: 1 Pickle, L.W., et al. A new method of estimating United States and state-level cancer incidence counts for the current calendar year. Cancer J. Clin. 2007; 57:30–42. 2 Earle, C.C., et al. Effect of surgeon specialty on processes of care and outcomes for ovarian cancer patients. J. Natl. Cancer Ins.t 2006; 93: 172–80. 3 Engelen, M.J., et al. Surgery by consultant gynecologic oncologists improves survival in patients with ovarian carcinoma. Cancer 2006; 106: 589–98. 4 Kirchhoff, C. Molecular characterization of epididymal proteins. Rev. Reprod. 1998;3:86-95. 5 Moore, R.G. et al. The use of multiple novel tumor biomarkers for the detection of ovarian carcinoma in patients with a pelvic mass. Gynecologic Oncology, 2008; 108, 402-408. 6 Moore, R.G. et al. A novel multiple marker bioassay utilizing HE4 and CA125 for the prediction of ovarian cancer in patients with a pelvic mass. Gynecologic Oncology, 2009; 11: 40-46. COBAS, COBAS E, Elecsys et LIFE NEEDS ANSWERS sont des marques de Roche. ©2011 Roche Roche Diagnostics (Suisse) SA CH-6343 Rotkreuz www.roche-diagnostics.ch Absence de progression 52 273 325 Total 81 294 375 Numéro de matériel 05950929 190 05950945 190 05950953 190 11732277 122 ou 03183971 122 7 Moore, R.G. et al. Utility of a novel serum tumor biomarker HE4 in patients with endometrial adenocarcinoma of the uterus. Gynecologic oncology, 2008; 110: 196-201. 8 Huhtinen, K. et al. Serum HE4 concentration differentiates malignant ovarian tumours from ovarian endometriotic cysts. British J. Cancer, 2009; 100: 1315-1319. 9 Allard et al. HE4 and CA125 combined for the improved management ovarian cancer. Oncology 2009; 3: 20-21. 10Havrilesky, L. et al. Evaluation of biomarker panels for early stage ovarian cancer detection and monitoring for disease recurrence. Gynecologic oncology 2008; 110: 374-382. 11 Allard, W.J., Somers, E., Theil, R., Moore, R.G. Use of a novel biomarker HE4 for monitoring patients with epithelial ovarian cancer. J Clin Oncol 2009; 26 (May 20 suppl; abstr 5535). 12 Anastasi, E., Marchei, G.G., Viggiani, V., Gennarini, G. et al. HE4: a new potential early biomarker for the recurrence of ovarian cancer. Tumor Biol., 2010; 31:113-119.
