Dosage de la Thyroxine (T4) DRI

Dosage de la Thyroxine (T4) DRI®
À utiliser pour des diagnostics in vitro
0454 (kit de 100 ml)
10013070 (kit 500 ml)
Utilisation prévue
La thyroxine est photosensible. Stocker tous les réactifs contenant de la thyroxine (conjugué
d’enzymes, étalonneurs, contrôles ou échantillons de patients) de façon à minimiser l’exposition
à la lumière directe du soleil.
Résumé et explication du test
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d’assistance technique.
Cet immunodosage homogène de l’enzyme thyroxine est destiné à des fins de détermination
quantitative de la thyroxine totale dans du sérum ou du plasma humain.
La thyroxine (T4) est synthétisée à l’intérieur des follicules de la glande thyroïde et est excrétée
dans la circulation sanguine au moyen d’un système de rétroaction complexe1. La glande thyroïde
est régulée par l’hormone thyréostimuline (TSH) qui est produite et sécrétée par l’hypophyse. La
production et la sécrétion de la TSH par l’hypophyse se réalise via la stimulation par l’hormone
thyréotrope (TRH) qui est sécrétée par l’hypothalamus.
La plupart de la thyroxine de la circulation sanguine est majoritairement liée à la globuline
liant la thyroxine (TBG) et, dans une moindre mesure, à l’albumine et la préalbumine liant la
thyroxine2,3. Moins d’1 % de la thyroxine circule librement dans le sang sous forme de T4 libre. Une
augmentation des taux de thyroxine totale a été associée à l’hyperthyroïdisme, une pathologie
présentant une quantité excessive d’hormones thyroïdiennes en circulation. Une réduction
des taux de thyroxine totale a été associée à l’hypothyroïdisme, une pathologie présentant des
niveaux insuffisants de concentration de thyroxine. Le dysfonctionnement primaire de la glande
thyroïde ou toute maladie affectant le système thyroïde-hypophyse-hypothalamus peut entraîner
une concentration anormale de la thyroxine dans le sang. La mesure de la concentration de la
thyroxine totale (libre plus liée aux protéines) a été l’une des méthodes les plus couramment
utilisées pour évaluer l’état thyroïdien d’un individu4.
Le dosage de la thyroxine DRI® est un immunodosage enzymatique homogène utilisant des
réactifs liquides prêts à l’emploi. Le dosage utilise l’acide sulfonique 8-anilino-1-naphthalène
(ANS) pour dissocier la thyroxine des protéines se liant au plasma. La thyroxine dissociée dans
l’échantillon entre en concurrence avec une thyroxine marquée à l’enzyme glucose-6-phosphate
déshydrogénase (G6PDH) pour une quantité fixe de sites de liaison des anticorps spécifiques à
l’anti-thyroxine dans la solution. En l’absence de thyroxine dans l’échantillon, la thyroxine marquée
à la G6PDH est fixée par l’anticorps spécifique et l’activité enzymatique est inhibée. Ce phénomène
crée une relation entre la concentration de thyroxine dans l’échantillon et l’activité enzymatique.
L’activité enzymatique de la G6PDH est déterminée par spectrophotométrie à 340 nm en mesurant
sa capacité à convertir le nicotinamide adénine dinucléotide (NAD) en NADH.
Matériaux fournis
Réactif anticorps/substrat. Contient de l’anticorps anti-thyroxine monoclonal, de l’acide sulfonique
8-anilino-naphthalène (ANS), du glucose-6-phosphate (G6P) et du nicotinamide adénine
dinucléotide (NAD) dans du tampon Tris avec de l’azoture de sodium comme conservateur.
Réactif conjugué enzymatique. Contient de la thyroxine marquée avec du glucose-6-phosphate
déshydrogénase (G6PDH) dans du tampon Tris avec de l’azoture de sodium comme conservateur.
Étalons (vendus séparément)
Kit d’étalons de la thyroxine (réf. 0476) : Contient 2 ml chacun d’étalons de thyroxine négatifs, en
2 µg/dl, 4 µg/dl, 8 µg/dl, 12 µg/dl et 20 µg/dl dans du sérum humain avec de l’azoture de sodium
comme conservateur.
Précautions d’emploi et avertissement
Ce test est réservé aux diagnostics in vitro. Les réactifs sont dangereux en cas d’ingestion.
DANGER : Le dosage de la thyroxine (T4) DRI contient ≤ 0,1 % d’albumine bovine (AB).
H317 - Peut provoquer une allergie cutanée.
H334 - Peut provoquer des symptômes allergiques ou d’asthme ou des difficultés respiratoires
par inhalation.
Éviter de respirer les gaz ou vapeurs. Les vêtements de travail contaminés ne devraient pas
sortir du lieu de travail. Porter des gants de protection/un équipement de protection des yeux/
du visage. Lorsque la ventilation du local est insuffisante, porter un équipement de protection
respiratoire. En cas de contact avec la peau : laver abondamment à l’eau et au savon. EN CAS
D’INHALATION : s’il y a difficulté à respirer, transporter la victime à l’extérieur et la maintenir au
repos dans une position où elle peut confortablement respirer. En cas d’irritation ou d’éruption
cutanée : consulter un médecin. En cas de symptômes respiratoires : appeler un CENTRE
ANTIPOISON ou un médecin. Laver les vêtements contaminés avant réutilisation. Éliminer
le contenu/contenant dans un endroit conforme aux réglementations locales/régionales/
nationales/internationales.
Les réactifs utilisés dans les composants du dosage contiennent ≤ 0,09 % d’azoture de sodium.
Éviter tout contact avec la peau et les muqueuses. En cas de contact, rincer abondamment
à l’eau claire. En cas de contact avec les yeux ou d’ingestion, consulter immédiatement un
médecin. L’azoture de sodium peut réagir au contact des canalisations en plomb ou en cuivre et
entraîner la formation d’azotures métalliques potentiellement explosifs. Lors de leur élimination,
ces réactifs doivent être abondamment rincés à l’eau pour éviter toute accumulation d’azoture.
Nettoyer les surfaces métalliques exposées avec de l’hydroxyde de sodium à 10 %.
Aucun réactif ne doit être utilisé au-delà de sa date de péremption.
Préparation et stockage des réactifs
Les réactifs sont prêts à l’emploi. Aucune préparation de réactif n’est nécessaire. Tous les
composants du dosage, lorsqu’ils sont stockés correctement entre 2°C et 8°C, sont stables
jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette.
Prélèvement et manipulation des échantillons
Soit du sérum, soit du plasma peut être utilisé avec le dosage. Les anticoagulants, tels que
l’héparine, les citrates, les oxalates et l’EDTA, ne montrent aucune interférence avec le
dosage. Un échantillon de sérum frais est à privilégier. Si l’échantillon ne peut pas être
analysé immédiatement, il peut être stocké au réfrigérateur pendant une semaine maximum
ou au congélateur pendant un mois maximum. Il faut éviter la congélation et la décongélation
répétées d’un échantillon. Il convient de veiller à éviter la présence de débris conséquents
dans les échantillons. Il est recommandé de centrifuger les échantillons à forte turbidité avant
leur analyse.
Manipuler tous les échantillons de sérum ou de plasma comme s’ils étaient potentiellement
infectieux.5
Instruments
Pour effectuer cet immunodosage enzymatique homogène, il est possible d’utiliser des
analyseurs de chimie clinique capables de maintenir une température constante, de pipeter
des échantillons, de mélanger des réactifs, de mesurer des vitesses de réaction enzymatique à
340 nm et de chronométrer la réaction avec précision.
Procédure du dosage
Les analyseurs chimiques dotés des spécifications indiquées conviennent à la réalisation
de cet immunodosage enzymatique homogène. Se reporter aux instructions spécifiques à
l’application pour chaque dosage et aux paramètres spécifiques utilisés pour chaque analyseur
avant la réalisation du dosage.
Contrôle de la qualité et étalonnage
Il est recommandé aux laboratoires d’utiliser des échantillons de contrôle pour valider
l’étalonnage et pour garantir les performances correctes du dosage. Divers contrôles multiniveaux sont disponibles dans le commerce à cet effet. S’assurer que les résultats des contrôles
s’inscrivent dans les plages spécifiées. Procéder à un nouvel étalonnage lorsque de nouveaux
réactifs sont utilisés ou que les valeurs des contrôles ne sont pas comprises dans les plages
spécifiées. Toutes les exigences de contrôle qualité doivent être appliquées conformément aux
réglementations locales, régionales et/ou nationales ou aux exigences d’accréditation.
Résultats et interprétation des données
Les résultats de la concentration de thyroxine de l’échantillon sont calculés automatiquement
par l’analyseur de chimie clinique. Aucune manipulation des données supplémentaire n’est
nécessaire.
Les échantillons dont la quantification est supérieure à 20 μg/dl peuvent être déclarés comme
> 20 μg/dl ou dilués à l’aide de l’étalon négatif. La valeur de l’échantillon dilué est obtenue en
multipliant le résultat par le facteur de dilution.
Divers facteurs peuvent affecter la relation entre la concentration de la thyroxine sérique
ou plasmatique et la réponse clinique. Ceux-ci comprennent l’âge du patient et son état de
santé, un traitement médicamenteux spécifique, une maladie non thyroïdienne, une grossesse,
l’utilisation d’œstrogènes ou de contraceptifs ainsi qu’une augmentation ou une baisse de la
concentration de la globuline liant la thyroxine (TBG). Dans les circonstances mentionnées
ci-dessus, la thyroxine totale doit être utilisée uniquement comme procédure d’analyse
préliminaire.1 Le diagnostic précis de l’état thyroïdien doit être complété avec d’autres tests
diagnostiques tels que l’indice de T4 libre (FTI), TSH, T3, TRH, etc., ainsi qu’une évaluation
clinique par un médecin.
Valeurs attendues
La plage des concentrations de T4 d’individus apparemment en bonne santé a été déterminée
comme se situant entre 4,5 et 12 μg/dl. Puisque les plages “normales” peuvent être affectées
par l’âge, le sexe, l’alimentation, la région géographique et d’autres facteurs, chaque laboratoire
doit établir ses propres valeurs attendues pour cette procédure.
Bibliographie
Limites
1. Ingbar SH, Woeber KA. The Thyroid Gland. In: Text Book of Endocrinology. Williams RH.
ed. Philadelphia, PA; WB Saunders Company, 95 (1974).
2. Robbins J. “Thyroxine-Binding Protein in Serum” In: Laborator Diagnosis of Endocrine
Disease. Saunderman and Saunderman eds., St. Louis, MO; Warren H. Green, Inc., 221
(1971).
3. Larsen PR, et al. “Immunoassay of Thyroxine in Unextracted Human Serum”, J. Clin.
Endocrinol. Metal., 37, 177 (1973).
4. Penney M, O’Sullivan J. Total or Free Thyroxine as a Primary Test of Thyroid Function.
Clin. Chem., 33, 170 (1987).
5.Centers for Disease Control/National Institutes of Health manual “Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories”. 1988.
La sensibilité, définie comme étant la plus faible concentration pouvant se différencier du sérum
négatif avec 95 % de confiance, est de 0,7 μg/dl. Ce dosage est optimisé pour la détermination
de la thyroxine uniquement dans du sérum ou du plasma et non pour la détermination de la
thyroxine dans le sang total. Dans de rares cas, les patients peuvent posséder un autoanticorps qui interfère avec le dosage et entraîne des résultats de test bas.
Caractéristiques de performances types
Les données de performances types suivantes ont été générées avec l’analyseur de chimie
clinique Hitachi 717 :
Précision
La précision en cours d’analyse et la précision de l’analyse totale ont été évaluées avec trois
niveaux de contrôles de sérum de T4. Suivant un protocole de précision CLSI modifié, les
échantillons ont été testés dans des échantillons subdivisés de 6 par cycle, deux fois par jour
pendant 5 jours, avec N total = 60.
Niveau
n=60
En cours d’analyse
Analyse totale
Moyenne (μg/dl)
SD (μg/dl)
% CV
SD (μg/dl)
% CV
1
4,1
0,14
3,4
0,28
6,9
2
11,0
0,41
3,7
0,81
7,4
3
16,2
0,62
3,8
1,05
6,5
Sensibilité
La sensibilité, définie comme étant la plus faible concentration pouvant se différencier du
sérum négatif avec 95 % de confiance, est de 0,7 μg/dl.
Précision
108 échantillons cliniques avec une plage de concentration de T4 allant de 1,3 μg/dl à 87,1 μg/
dl ont été dosés avec le dosage EIA de la thyroxine DRI et un dosage du T4 disponible dans le
commerce. Une corrélation avec une équation de régression de DRI (y) = 1,02 (x) - 0,63 et un
coefficient de corrélation (r) de 0,993 a été obtenue.
Spécificité
Les composés ayant une structure chimique similaire à celle de la thyroxine et quelques
composés utilisés simultanément ont été testés pour toute réactivité croisée possible dans le
dosage de la thyroxine. Le % de réactivité croisée a été déterminé comme le pourcentage de la
concentration de T4 équivalente observée lorsque la concentration testée du réactif croisé a
été ajoutée à un sérum négatif au T4.
Composé
Conc. testée (μg/dl)
% de réactivité croisée
Triiodothyronine (T3)
10
3,2*
Acide triiodothyroacétique
10
0,5*
Acide tétraiodothyroacétique
10 000
25,3*
3,5-diiodothyronine
10 000
0,0
3,5-diiodotyrosine
10 000
0,0
Iodotyrosine
10 000
0,0
Méthimazole
10 000
0,0
Phénylbutazone
10 000
0,0
Phénytoïne
10 000
0,0
Propylthiouracile
10 000
0,0
Tyrosine
10 000
0,0
Acétaminophène
100 000
0,0
Acide acétylsalicylique
100 000
0,0
Microgenics Corporation
46500 Kato Road
Fremont, CA 94538 États-Unis
Service clientèle et assistance
technique américains :
1-800-232-3342
* Les concentrations testées ont dépassé considérablement les concentrations sériques normales de ces composés. Par
conséquent, la réactivité croisée n’est pas significative sur le plan clinique.
Les échantillons hémolysés (jusqu’à 800 mg/dl d’hémoglobine), lipémiques (jusqu’à 1 000 mg/
dl de triglycérides ou 400 mg/dl de cholestérol) et ictériques (jusqu’à 30 mg/dl de bilirubine) ne
présentent aucune interférence cliniquement significative sur le dosage.
Microgenics GmbH
Spitalhofstrasse 94
D-94032 Passau, Allemagne
Tél. : +49 (0) 851 886 89 0
Fax : +49 (0) 851 886 89 10
Pour obtenir des mises à jour concernant cette notice, consulter le site Web :
www.thermoscientific.com/diagnostics
Autres pays :
Contacter votre représentant Thermo Fisher Scientific local.
0475-7
2015 09
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