MISE AU POINT DU BIOFILM IN VITRO DE LACTOBACILLUS CRISPATUS POUR L’EVALUATION DES FORMULATIONS CONTRE LES VAGINOSES BRISSY D.C.a, BONI CISSE C.b, YEO ALAINb, ABOUNA A.D.c N’GUESSAN GNAMAN K.a., FAYE-KETTE H.b, KOFFI A.A.a a. Laboratoire de Pharmacie Galénique, Cosmétologie et Législation pharmaceutique, UFR Sciences Pharmaceutiques et Biologiques d’Abidjan, Université Félix Houphouët-Boigny, 01 BP V 34 Abidjan 01, Côte d’Ivoire. b.Institut pasteur de côte d’ivoire. c.Laboratoire d’Anatomie et Cytologique Pathologique, UFR Sciences médicales, Université Félix Houphouët-Boigny, 23 BP 427 Abidjan 23, Côte d’Ivoire. Introduction Les lactobacilles en occurrence Lactobacilles crispatus plus nombreux, forment un biofilm tapissant la muqueuse vaginale qui la protègent contre l’agression de micro-organismes responsables d’infections diverses qui sont Neisseria gonorrhoeae, Trichomomas vaginalis, Candidas albicans… Le but de cette étude est de réaliser le biofilm de Lactobacillus crispatus in vitro. Les objectifs étaient de déterminer la phase stationnaire, de mettre la bactérie en condition de biofilm, et de visualiser le biofilm ainsi formé. Méthodologie L’étude a été réalisée d’octobre 2015 en novembre 2016 au laboratoire de microbiologie à l’Institut Pasteur de Cote d’Ivoire. La souche utilisée était la souche CIP 103 603 Lactobacilles crispatus. La phase stationnaire a été déterminée par la technique en milieu liquide non renouvelé. Puis nous avons réalisé un dénombrement en boite de pétri et une lecture de DO au densitomètre afin d’évaluer la viabilité de la souche. Après 24 H d’incubation des plaques, le biofilm a été visualisé par coloration au cristal violet et quantifié au lecteur de plaque. Résultats La phase stationnaire est de 16 heures. Les cultures sur lames ont montrées des lactobacilles qui s’agglomèrent et formaient des amas qui s’agrandissaient au cours du temps et une augmentation de la DO lue au densitomètre de 0,14 à 1,3 pour l’inoculum 1/100 et 0,18 à 1,4 pour l’inoculum 1/50. Le biofilm se forme à partir de 8 H. Pour les deux dilutions, nous avons constaté une augmentation des bactéries jusqu’à 24h et une diminution progressive jusqu’à s’annuler à 72h. Les lactobacilles sont viables pendant 48 heures dans le BCC. La DO des microplaques en valeur absolue montre une augmentation jusqu’à 48 heures et une stagnation à 72 heures. La formation du biofilm s’arrêtent après 48 H. Conclusion Cette étude nous a permis de déterminer les meilleures conditions de formation de biofilm de Lactobacilles crispatus dans le bouillon BCC en microplaque. Les résultats de cette étude permettront d’étudier la résistance in vitro aux antibiotiques de lactobacillus en condition de biofilm et les interactions du biofilm avec les germes responsables d’infections génitales. Mots –clés Biofilm, Lactobacillus crispatus, densité optique, phase stationnaire