BIOCHIMIE P16 INHIBITION NON COMPETITIVE Pas de changement d’affinité enz-substrat ( même Km) mais le fonctionnement de l’enzyme est altéré (Vm différente). P17 4-3 cinétique non michaëlienne On observe différentes structures quaternaires, les sous unités sont associées entre elles par des liaisons non covalentes hydrophobes et ioniques. Le comportement cinétique devient alors différent. P18 Courbe : Pour une structure quaternaire on observe un comportement de type sigmoïde. Ex : hémoglobine et sa capacité à lier l oxygène Schéma Lorsqu’on a plusieurs sous unités elles interagissent entre elles : changement de conformation peu adapté à lier le substrat et donc de faible affinité. Un monomère a une plus gde affinité. En augmentant la concentration en substrat, on arrive à lier une molécule de substrat à au moins une sous unité, un changement de conformation accompagne la liaison et se transmet à l ‘ensemble de la molécule : plus gde affinité pour le substrat. Analyse de la courbe Au départ, zone de fable affinité puis changement de conformation donc augmentation rapide de l’activité, atteinte d’un maximum. Au point d’inflexion correspond la vitesse maximale/2 et Km. On peut déterminer une concentration physiologique définie entre deux limites correspondant à l’activité maximale et minimale. Ce qui n’est pas de même pour la courbe hyperbolique pour laquelle l’activité sera similaire dans cette même zone. P19 ALLOSTERIE : Intervention d’un régulateur qui se fixe sur un autre site de chaque sous unité, il peut être -activateur : il modifie la conformation des sous unités de façon à ce qu’elles deviennent plus affines. La liaison du substrat à faible concentration se fait donc plus facilement. -inhibiteur : effet inverse courbes : comportement cinétique courbe sigmoïde donc enzyme à structure quaternaire avec effets coopératifs en comparaison a la courbe de contrôle, on observe un déplacement de la courbe vers la droite, donc une augmentation de Km. on en déduit l’action d’un inhibiteur allostérique un déplacement de la courbe vers la gauche, donc une diminution de KM on en déduit l’action d’un activateur allostérique Une enzyme peut donc être soit subitement accélérée ou subitement inhibée. Ex : E1 E2 E3 E4 E5 A B C D E F Généralement, l’enzyme allostérique qui intervient dans la régulation est la première(E1) car -cela permet de limiter la consommation d’énergie -les produits intermédiaires ne servent pas à grand chose L’inhibiteur de cette voie est le plus souvent le produit final (F) Il exerce un rétrocontrôle négatif sur E1 (feed back) Différents moyens de moduler l’activité d’un enzyme ALLOSTERIE Permet de comprendre comment les composés formés effectuent un rétrocontrôle négatif. Action instantanée. PHOSPHORYLATION Activation ou inhibition d’une voie métabolique, activation ou blocage d’une protéine.3 Environ quelques secondes (cascade d’informations) EXPRESSION d’un gène Transcription, post transcription, traduction Modification de la quantité de l’enzyme Quelques heures Ces 3 mécanismes interviennent de façon complémentaire mais différente. P20 5) RELATION STRUCTURE/FONCTION DES PROTEINES ENZYMATIQUES tous les types de protéines peuvent correspondre à des enzymes : protéines globulaires solubles, protéines à structure quaternaire, protéines membranaires… notion d’isoformes : 2 protéines différentes ayant la même activité enzymatique soit produits de 2 gènes différents, soit produits du même gène (épissage alternatif, modification post traductionnelle, glycosylation…) structure tridimensionnelle des enzymes. notion de site actif différents repliements qui définissent une protéine globulaire avec des espaces définis pour fixer le substrat. P21 MODE DE FONCTIONNEMENT DE LA CHYMOTRYPSINE 1er et 2ème schéma : ligne pointillée : poche hydrophobe riche en acides aminés R : cycle aromatique appartenant à un AA ( Phe, Tyr, Try ) Par une réaction en chaîne, 3 acides aminés de la chymotrypsine ( Asp 102, His 57 Ser 195 ) se mettent à proximité l’un de l’autre formant ainsi une « triade catalytique ». Par des phénomènes de délocalisation électronique, cette triade se fixe via la serine sur la poche hydrophobe. 3ème schéma : formation d’une liaison acyl ester : acylation du site actif. On passe donc par une acyl enzyme Libération de l’extrémité NH2 4ème schéma : mécanisme en chaîne. fixation d’une molécule d’eau. liaison peptidique qui engage le COOH de l’AA hydrophobe.