Gestion raisonnée des élevages

Gestion raisonnée des élevages
Expérimentation animale
Formation Niveau I
Philippe Ravassard CRICM
Hôpital de la Pitié Salpêtrière Paris
Objectif - méthodologie
Objectif
•
Produire pour expérimenter
Méthodologie
•
•
•
Définition des lots expérimentaux pertinents
Mise en oeuvre de la production
Contrôle de l’adéquation entre objectifs de
production, la production effective et
l’expérimentation
Définition des lots expérimentaux pertinents
Principe : définition de la taille et des caractéristiques des lots
expérimentaux afin de répondre à une question scientifique précise.
 Objectif de l’expérimentation
 Nombre d’animaux (le plus petit possible)
 Sexe, age, poids, génotype, fond génétique…
 Nature des contrôles
Pertinence : Les lots expérimentaux définis permettent-ils de répondre à
la question scientifique posée ?
 Simulation de puissance statistique
 Expérience pilote
Mise en oeuvre de la production
Objectif de production défini : taille et composition des lots expérimentaux
Liste des contraintes
 Caractéristiques zootechniques des animaux à produire
 Place dans l ’animalerie
 Type d’hébergement : portoirs traditionnels, portoirs ventilés, armoires
ventilées
 Durée
 Coût
 Disponibilité du personnel de l’animalerie
 Rapidité de la méthode de génotypage
Objectif / Contraintes
Mise en oeuvre
Caractéristiques zootechniques de l’élevage
Production
 Nombre d’animaux par portée
 Sexe ratio
 Génotype
 Transmission Mendélienne
 Pénétrance incomplète des caractères
 Cannibalisme
 Survie des animaux
Principes fondamentaux des élevages (1)
Biologie de la reproduction
 Cycle chez la souris femelles : 4 jours
 Ejaculat fertilisant : 3 jours
 Pic de fécondité post-partum
 Bouchon vaginal : marque de l’accouplement
 Gestation 19-21 jours
 Sevrage : fin de la 3ème semaine
 Maturité sexuelle : fin de la 6ème semaine
 Activité sexuelle
 Au moins 12 mois
 10-15 portée au maximum pour une femelle
Influence des phérormones
 Synchronisation
 Arrêt de l’ovulation
Principes fondamentaux des élevages (2)
Rendement
 Forte dépendance du fond génétique
 Femelles primipares :
 Taille des portées réduites
 Risque accru de cannibalisme
Comportement
 La souris un animal nocturne
 Agressivité des mâles
 Cannibalisme
 Fond génétique
 Taille des portées
 Environnement
Caractéristiques anatomiques
 Présence de cloison vaginale (C57Bl6/J)
Les méthodes utilisables pour la production
Entretien des lignées – production bas niveau
 Duos / Trios
 Accouplement post-partum
 Génotypage au sevrage
 Réduction des portées au sevrage après résultats du génotypage
Production accélérée : accouplements contrôlés
 Plusieurs mâles isolés
 3 à 4 pools de femelles (10 à 20 femelles par pool)
 Accouplement le soir en prenant les femelles au hasard dans les pools
 Tri des bouchons vaginaux le matin et répartition aléatoire des femelles non
« plugées » dans les pools.
Production intermédiaire accouplements contrôlés
Problèmes d’élevage : solutions
Rendement
 Cycle jour / nuit : 12h – 12h ou 10h -14h
 Sélection des mâles
 Passif : élimination des mauvais reproducteurs
 Actif : amélioration des caractères d’une lignée, sélection des meilleurs
reproducteurs (très grande consommation d’animaux et de place)
 Sélection des femelles
 Passif : élimination des mauvais reproducteurs
 Actif : jamais utilisé
 Utilisation de femelles multipares
Cannibalisme
 Alimentation / boisson
 Régime hyper-protéiné
 Eau de boisson acidifiée pH<4
 Environnement enrichi
 Adoption à la naissance
 Greffes d’ovaires
Contrôles
Adéquation entre :
 Les objectifs
 La production des lots expérimentaux
 Utilisation des lots expérimentaux
Ajustements !!!
Etude de cas n°1
Objectif :
Etude de la sensibilité d’une souris KO homozygote à l’induction d’une
pathologie neurodégénérative par injection d’une toxine.
Données :
 Injection de toxine chez des mâles de 7 semaines
 Taille des lots expérimentaux : 20 mâles KO homozygotes et 20 mâles
contrôles.
 KO fertile à l’état hétérozygote et homozygote
 Fond génétique C57Bl6
 En moyenne 8 petits par portée avec un sexe ratio normal
 20 cages disponibles dans l’animalerie
Etude de cas n°2
Objectif :
Production d’animaux transgéniques doubles mutants KO Mut-1 et Mut-2.
Etude chez l’embryon
Données :
Les deux mutations à l’état homozygotes sont létales à la naissance
(100% des cas). Pas de létalité embryonnaire.
Les animaux hétérozygotes sont viables et fertiles
Méthode :
 Génération d’animaux doubles hétérozygotes « Mut-1 +/- : Mut-2 +/- » par
simples croisement d’hétérozygotes Mut-1 +/- et Mut-2 +/ Génération d’embryons doubles homozygotes
croisements entre doubles hétérozygotes
mutants
à
partir
de
Etude de cas n°2
N°
embryon
Génotype
Mut-1
Génotype
Mut-2
N°
embryon
Génotype
Mut-1
Génotype
Mut-2
1
-/-
+/+
16
+/+
-/-
2
+/-
+/-
17
+/-
+/-
3
-/-
+/+
18
+/-
+/-
4
+/-
+/-
19
+/-
+/-
5
+/-
+/-
20
-/-
+/+
6
+/-
+/-
21
+/-
+/-
7
-/-
+/+
22
+/+
-/-
8
+/-
+/-
23
+/-
+/+
9
-/-
+/+
24
-/-
+/+
10
+/-
+/-
25
+/+
+/+
11
+/-
+/-
26
-/-
+/+
12
-/-
+/-
27
+/+
-/-
13
+/-
+/-
28
+/-
+/-
14
+/-
-/-
29
+/+
-/-
15
+/+
-/-
30
+/-
+/-