Séminaire: Surveillance et lutte contre le virus West Nile en Tunisie ONMNE, 4 – 5 Avril 2013 Le virus West Nile Aspects biologiques Pr Henda TRIKI Laboratoire de Virologie Clinique Institut Pasteur de Tunis Arbovirus: ARthropod BOrne VIRUS Vecteur Cycle naturel Réservoir (Virémie) Infections accidentelles • La zone intertropicale accueille la plupart des arboviroses • On connaît plus de 600 arbovirus dont 50 environ pathogènes pour l’Homme • Virus à ARN monocaténaire enveloppés • Deux familles – Togaviridae: ARN (+) - capside icosaédrique – Bunyaviridae: ARN (-) segmenté - capside hélicoïdale Arbovirus Togaviridae • Pestivirus Virus de la peste bovine • Rubivirus Virus de la rubéole • Aalphavirus Virus Sindbis • Flavivirus Virus de la fièvre jaune Virus de la dengue Virus West Nile Bunyaviridae • Ortho-bunyavirus • Phlebovirus Virus de la fièvre de la vallée du Rift • Nairovirus Virus de la fièvre hémorragique de Crimée Congo • Hantavirus • Tospovirus Physiopathologie des arboviroses • Piqûre par un arthropode • Xion l’épithélium vasculaire et le SRE (ganglions lymphatiques, rate • virémie • Infection asymptomatique +++ • Parfois, le virus gagne divers organes symptômes spécifiques (encéphalite, hépatonéphrite, hémorragies) Virus West Nile Historique - Découvert en 1937, en Ouganda - Province de l’ouest du Nil - Femme – Syndrôme fébrile bénin - Années 1950: - Ecologie virale et Formes cliniques étudiées en Egypte - Epidémies de méningo-encéphalite en Israel 1951-1954 -1957 - Durant les 2 dernières décades: - Plusieurs épidémies – Pays jusque là indemnes - Europe: Roumanie (1996) - France (2000) – Italie (1998) – Russie (1999) - Afrique du nord: Algérie (1994) - Maroc (1996) - Tunisie (1997-2003) - Amérique: USA (1999) Actuellement • Exemple type d’infection virale émergente • Problème de santé humaine – Gravité de certaines formes cliniques – Formes épidémiques • Impact économique – Atteinte d’animaux d’élevage – Atteinte d’équidés (Chevaux+++) Structure de la particule virale 60nm Le génome viral Protéines Non structurales Protéines 5’ NC structurales C M E Capside Membrane Envelope 1 2A 2B 3 Serine protease NTPase ARN helicase 4A 4B 3’ NC 5 ARN Polymerase Epidémiologie Moustique vecteur Oiseau réservoir Hôtes accidentels Arthropodes vecteurs: • Moustiques ornithophiles • Plusieurs espèces peuvent jouer le rôle de vecteur - Le plus souvent Genre « Culex » • Afrique sub saharienne: Culex univittatus • Europe et USA: Culex pipiens • Asie: Culex quinquefasciatus • Autres arthropodes vecteurs possible: puces et tiques du genre Argasidés Oiseaux réservoirs Hôtes accidentels : • Homme +++ • Cheval +++ • Autres hôtes possibles: chats, lapins, mouffettes, écureuils, chauves souris, chiens, loups • Tous sont des culs de sacs épidémiologiques AUTRES MODES DE TRANSMISSION POSSIBLES Zone d’endémie Transmission parentérale et don de sang Transplantation d’organes Transmission Intra-utérine Allaitement Maternel Diagnostic au laboratoire de l’infection à VWN chez l’Homme CINÉTIQUE DES MARQUEURS Infection Début fièvre Maladie 3 – 7jours 2-4mois > 1an Diagnostic au laboratoire de l’infection à VWN chez l’Homme • Sérologie ++++ – – – – – Principale technique pour la confirmation des cas La plus sensible Une sérologie négative permet d’écarter l’infection à VWN Cas positif si IgM+ et IgG+ IgG et IgM présents dans le sang +++, LCR+ • Recherche du génome viral par PCR • Sang - LCR – pvts nécropsiques • Sensibilité insuffisante: Sang (14%), LCR (57%) Techniques sérologiques • Méthodologies – ELISA Indirect (IgG) – ELISA immunocapture (IgM) • Plusieurs kits commerciaux actuellement disponibles • Possibibilités de résultats faussement positifs – Réactions croisées avec d’autres arboviroses • Régions endémiques • En cas d’épidémie , tester les premiers cas vis-à-vis d’autres flavivirus – Qualité des kits Détection du génome viral RT – PCR (simple, nichée) PCR en temps réel Sensibilité faible quelque soit la technique sauf pour les prélèvements ncropsiques Détection du génome viral ECHANTILLON SENSIBILITÉ Sérum 0 – 14% LCR 30 – 57% Biopsie cérébrale 80 – 100% COMMENTAIRES Virémie brève Charge virale élevée Formes sévères Sensibilité+++ Détection du génome viral - INTÉRÊTS DANS CERTAINES SITUATIONS Prélèvements très précoces Sujets immunodéprimés Epidémiologie Moléculaire +++ Séquençage Origine des épidémiques souches circulantes ou Phylogeny of WNV isolates Additional lineages proposed: Lineage 3 (Central Europe), Lineage 4 (Southern Russia), Lineage 5 (India), Lineage 6 (Spain) Isolement viral sur cellules en culture • Peu utilisé en routine diagnostique • Limites: – Prélèvements très précoces, bien conservés – Laboratoire à haut niveau de sécurité (BSL3-4) • Cellules utilisées: Vero, Cellules de moustiques • ECP discret Détection du virus par IF ou PCR Surveillance l’infection à VWN de chez l’animal et les moustiques • Très importante pour • La détection précoce des épidémies • Estimer l’ampleur de la circulation du virus • l’impact socio-économique de l’infection WNV Surveillance Totals, 2000 Reported to CDC through January 25, 2001 • • • • • • Dead birds Mosquito pools Horses Other mammals *Humans Sentinel chickens * Confirmed & Probable cases 4312 480 63 25 21 13 USA Bird Map USA Veterinary Map USA Human Map USA Mosquitos Map Conclusion • Progrès récents très importants dans la connaissance de la biologie du VWN et la mise en place de tests de laboratoire fiable pour le diagnostic et la surveillance • Efforts sont encore nécessaires pour mettre en place: – des systèmes de surveillance adéquats – une bonne prise en charge des cas – des moyens de prévention et de contrôle adaptés