TP2 la duplication de l’ADN nécessite une réplication 1. Le problème : Le problème qui se posait à Meselson et Stahl était alors de comprendre comment se réalisait cette réplication : selon quelles modalités passe-t-on d'une molécule d'ADN formée de deux brins à deux molécules d'ADN bicaténaires identiques ? 2. Les hypothèses Pour expliquer la duplication d'un ADN bicaténaire, trois modèles ont été proposés. Ces modèles se basent tous sur l'utilisation de la molécule d'ADN "mère" comme matrice pour sa réplication, mais selon des modalités différentes : • Schématisez les 3 hypothèses en utilisant les couleurs indiquées Hypothèse 1: modèle conservatif Hypothèse 2: modèle semiHypothèse 3: modèle A partir d'une molécule d'ADN conservatif dispersif bicaténaire "mère", on forme une On dissocie les deux brins de la On ne conserve aucun brin nouvelle molécule d'ADN molécule d'ADN bicaténaire "mère". intact. bicaténaire. Chaque brin sert donc de matrice à la La copie se réalise par On garde donc ici une molécule synthèse d'un brin complémentaire, fragments dispersés dans "mère", non modifiée (elle est l'ensemble reformant une molécule l'ensemble de l'ADN, donc conservée), tout en "créant" d'ADN bicaténaire. Chaque nouvelle permettant de former les une nouvelle molécule ("fille"). molécule "fille" ne conserve donc que deux molécules d'ADN la moitié de la molécule "mère". bicaténaires "filles". Légendes : Couleur rouge : Molécule d'ADN "mère" et son devenir. Couleur bleue : ADN néo-formé. • Vérifiez à l’échelle de l’ADN: http://pedagogie.actoulouse.fr/svt/serveur/lycee/gueraut/stahl/3exphyp3d.htm • Vérifiez à l’échelle des nucléotides : http://pedagogie.ac-toulouse.fr/svt/serveur/lycee/gueraut/stahl/5exphypnucl.htm APPELEZ LE PROFESSEUR 3. L’expérience : http://www.conceptcours.fr/www/prem_s/genet/doc_gene/mesel_stahl_exp.swf Les expériences sont réalisées sur la bactérie E-Coli, qui se multiplie activement quand elle est cultivée sur un milieu favorable et réplique alors intensément son ADN. Les bactéries sont cultivées dans deux milieux différents : L’un contient des nucléotides « légers » intégrant de l’azote « léger » 14N. L’autre contient des nucléotides « lourds » intégrant de l’azote « lourd » 15N. Des bactéries, d’abord cultivées depuis de nombreuses générations sur un milieu contenant des nucléotides 15N, sont prélevées et transférées sur un milieu normal à nucléotides 14N. A chaque étape, l’ADN des bactéries en culture est extrait et centrifugé à grande vitesse dans un tube contenant une solution de densité appropriée. Après centrifugation, l’ADN se stabilise ainsi à un niveau correspondant à sa densité. • Comprendre l’expérience : Résultats Constitution de densité l’ADN 1,724 1,710 1,717 • • • 100% 15N Etapes de l’expérience 1. Culture sur 15N (n cycles cellulaires) 2. Culture sur 14N (1 cycle) 3. Culture sur N14 (2cycles) Résultats Déductions 100% 1,724 ADN est constitué de 100% de 15N ADN constitué de 50% 15N 50%14N (ADN hybride) 50% 1,710 à ADN constitué de 100% 14N 50% 15N 50% 1,717 à ADN constitué de 50% 15N 50%14N 50%14N (ADN hybride) Confronter le résultat 2 aux trois hypothèses. Laquelle pouvez-vous éliminer ? Confronter le résultat 3 aux hypothèses restantes. Laquelle pouvez-vous éliminer ? Vérifier : http://pedagogie.ac-toulouse.fr/svt/serveur/lycee/gueraut/stahl/6expcorr.html 100% 14N 100% 1,717 APPELEZ LE PROFESSEUR Meselson et Stahl ont complété leur travaux : http://www.conceptcours.fr/www/prem_s/genet/doc_gene/con20ani.swf NB : le centromère correspond à une zone du chromosome où la réplication est tardive et n’intervient qu’à l’anaphase. • Réalisez un schéma du devenir d’un molécule d’ADN au cours de la mitose (conservez les codes couleurs du début) Plan équatorial Phase G1 Chromosome : 1 Xide, décondensée Phase S Duplication par réplication Fin de phase S (G2) Chromosome : à 2 Xites décondensée Prophase Chromosome : à 2 Xides condensée Métaphase Chromosome : à 2 xides condensées, placé à l’équateur de la cellule Bilan : la duplication de l’ADN se fait par réplication. Chaque molécule d’ADN est fidèlement copié en phase S. A la fin de la phase S les chromosomes sont constitués de 2 chromatides jumelles (= 2 molécules d’ADN=) Lors de la mitose les 2 chromatides sont distribuées aux 2 futures celles filles qui contiennent donc : -la même quantité d’ADN -le même ADN la mitose est une division qui assure une reproduction conforme de la cellule en transmettant l’ADN de façon fidèle Anaphase télophase Chromosome à 2 Xides condensées, séparées Chromosome à 1 chromatide en décondensation