Analyse fonctionnelle d`un variant d`épissage de FANCL contenant

ANALYSE FONCTIONNELLE D’UN VARIANT
D’ÉPISSAGE DE FANCL CONTENANT UNE EXLUSION DE
L’EXON 4 SUR LA RÉPARATION DE L’ADN DANS LA
VOIE FANC-BRCA
Mémoire
Christopher St-Laurent Pedneault
Maîtrise en Physiologie Endocrinologie
Maître ès Sciences (M.Sc.)
Québec, Canada
© Christopher St-Laurent Pedneault, 2013

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RÉSUMÉ
L’anémie de Fanconi (FA) est une maladie congénitale rare résultant d’une mutation sur
chaque allèle parental d’un gène FANC. Nous avons récemment identifié un variant
d'épissage de FANCL contenant une exclusion de l'exon 4. Une analyse par minigène nous
a permis de démontrer que le polymorphisme de séquence (SNP) rs7958831 augmente
substantiellement le saut de l'exon 4 de FANCL, et que les porteurs de ce SNP ont une
quantité significativement plus élevée de transcrits FANCL∆4. L'étude de fractions
ribosomales nous a permis de confirmer que le transcrit alternatif est bel et bien traduit en
protéine. Toutefois, une protéine de fusion FANCL∆4-GFP ne migre pas au noyau comme
le fait FANCLwt-GFP. L'isoforme FANCL∆4 n'est pas en mesure d'accomplir la fonction
principale de FANCL, soit de monoubiquitiner FANCD2. De plus, des cellules EUFA868
déficientes en FANCL complémentées avec FANCL∆4 ne retrouvent pas leur phénotype
normal en test de survie et ont une proportion plus importante bloquée en phase G2/M. Ces
résultats nous permettent de penser que le SNP rs7958831 pourrait moduler le risque de
cancer du sein puisque l'isoforme FANCL∆4 ne semble pas fonctionnelle.

iv

v
TABLE DES MATIÈRES
RÉSUMÉ .......................................................................................................................................... iii
TABLE DES MATIÈRES ................................................................................................................. v
LISTE DES TABLEAUX ............................................................................................................... vii
LISTE DES FIGURES ..................................................................................................................... ix
LISTE DES ABRÉVIATIONS ........................................................................................................ xi
REMERCIEMENTS ....................................................................................................................... xv
AVANT-PROPOS ....................................................................................................................... xvii
CONTRIBUTION ........................................................................................................................ xvii
1 INTRODUCTION ......................................................................................................................... 1
1.1 Cancer .................................................................................................................................................. 1
1.1.1 Le cancer au Canada ................................................................................................................................ 1
1.1.2 Prédispositions génétiques au cancer .............................................................................................. 1
1.1.3 Épissage alternatif et cancer ................................................................................................................ 3
1.2 Réparation de l’ADN ....................................................................................................................... 5
1.2.1 Réparation directe .................................................................................................................................... 5
1.2.2 Réparation par excision de base ......................................................................................................... 6
1.2.3 Réparation par excision de nucléotides .......................................................................................... 7
1.2.4 Réparation par jonction des bouts non-homologues ................................................................. 7
1.2.5 La recombinaison homologue ............................................................................................................. 7
1.3 Anémie de Fanconi .......................................................................................................................... 9
1.3.1 Manifestations cliniques ..................................................................................................................... 12
1.3.2 Syndromes reliés ................................................................................................................................... 13
1.3.3 La voie FANC-BRCA............................................................................................................................... 14
1.3.4 Groupe 1: Le complexe cœur ............................................................................................................ 15
1.4 FANCL ................................................................................................................................................. 24
1.4.1 Les cas connus de FANCL ................................................................................................................... 27
1.4.2 Les études d’association sur FANCL .............................................................................................. 28
1.4.3 Les orthologues de FANCL ................................................................................................................. 32
1.4.4 Les trois domaines de FANCL ........................................................................................................... 34
1.4.5 L'ubiquitination ...................................................................................................................................... 39
1.5 Problématique ................................................................................................................................ 47
1.5.1 L’exemple du cancer du sein ............................................................................................................. 47
1.5.2 Gène à l'étude: FANCL .......................................................................................................................... 47
1.5.3 Objectif général de l’étude: le variant d'épissage FANCL∆4 ................................................ 48
1.5.4 Objectifs spécifiques de l'étude ........................................................................................................ 48
CHAPITRE 1 ................................................................................................................................. 49
Abbreviations ......................................................................................................................................... 52
Introduction ............................................................................................................................................ 53
Material and methods ......................................................................................................................... 55