PREPARATIONS GALENIQUES DU SANG OU

HEMOTHERAPIE: LES
PREPARATIONS DU SANG
Partie I
Dr AKA ANY-GRAH Sandrine
Pharmacotechnie
[email protected]
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OBJECTIFS PEDAGOGIQUES
1. Définir l’hémothérapie
2. Connaître les éléments constitutifs du sang
3. Définir les préparations du sang (produits labiles, stables et
substituts du sang)
4. Décrire les méthodes d’obtention des préparations du sang
5. Connaître les usages, les avantages et les inconvénients
d’utilisation des préparations du sang
6. Citer les contrôles à réaliser sur les préparations du sang
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PLAN
I.
Généralités
II.
Méthodes d’obtention des préparations du sang
III. Les produits sanguins labiles
IV. Les produits sanguins stables
V.
Les substituts sanguins
VI. Conclusion
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I.
GENERALITES
HÉMOTHÉRAPIE :
Apporter au patient les éléments sanguins
qui lui font défaut.
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I. GENERALITES
LE DON DE SANG
• Le don de sang standard:
Plasma, Globules rouges (GR), plaquettes (PQ)
Hommes : 5/an
Femmes: 3/an
• Le don de sang spécifique:
Don spécifique en élélments sanguins
Rq: Plasma
SÉLECTION DES DONNEURS DE SANG
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I. GENERALITES
SELECTION DES DONNEURS
2 types de contrôles:
Contrôle pré transfusionnel
Contrôle sur les poches
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I. GENERALITES
SELECTION DES DONNEURS (suite)
CONTRÔLE PRETRANSFUSIONNEL OBLIGATOIRE
POUR TOUT DON DE SANG
• Effectué sur des prélèvements directs au bras
du donneur
• Tests effectués = tests sanguins systématiques
chez le donneur de sang
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TABLEAU DES TESTS SANGUINS SYSTEMATIQUES CHEZ LE DONNEUR DE SANG
Groupage sanguin Tests de dépistage Tests spécifiques
Groupe ABO
Hb,Hte
RAI
Anti A, anti B
Sérologie
syphilitique
Sérologie VIH
Sérologie VHC
Sérologie HTLVI /II
Ag HBs, Ac antiHBc,
Ac
antipaludéen si
séjour à risque < 3
ans.
Diagnostic
génomique
par
PCR du VIH et
VHC (recherche
d’ARN)
Recherche
d’anticorps
irréguliers dirigés
contre les GR
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I.
GENERALITES
COMPOSITION DU SANG TOTAL
Après centrifugation réfrigérée:
Plasma
Plaquettes
Globules rouges
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II. METHODES D’OBTENTION DES
PREPARATIONS DU SANG
II.1 La centrifugation
• METHODE STANDARD
ETAPE 1:Prélèvement du sang total
ETAPE 2: Centrifugation-Décantation: 3 couches
d’éléments sanguins
Presse manuelle: séparation des couches
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COMPOSITION DU SANG APRES CENTRIFUGATION
PLASMA
PLAQUETTES, LEUCOCYTES
CULOT GLOBULAIRE: ELEMENTS FIGURES
DU SANG (érythrocytes, plaquettes, leucocytes)
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II. METHODES D’OBTENTION DES
PREPARATIONS DU SANG
II.1 La centrifugation (suite)
• METHODE STERILE (Fractionnement de Cohn)
Principe:
précipitations successives des diverses protéines par
un apport à froid d'alcool éthylique et la variation
du pH. Fondée sur les différences de propriétés
physico-chimiques des éléments constitutifs du
sang.
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II. METHODES D’OBTENTION DES
PREPARATIONS DU SANG
II.1 La centrifugation (suite)
• METHODE STERILE (Fractionnement de Cohn)
Mode opératoire
1/précipitation progressive des fractions du sang en
fonction de divers facteurs (force ionique, pH,
concentration en solvant organique, T°)
2/obtention de 3 couches (plasma, zone plaquettaire,
culot globulaire)
3/obtention après fractionnement du plasma de
protéines (albumine, Ig…), éléments dissous (ions,
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urée, glucose, créatinine), l’eau.
FRACTIONNEMENT CLASSIQUE DE COHN (schéma simplifié)
D‘après Chassaigne, Transfusion Pratique, Doin Ed., 1984
PLASMA
FRACTION I
Fibrinogène
FRACTIONS II + III
Immunoglobulines
PPSB
Ethanol 8% pH 7,3 à -2°C
Ethanol 25% pH 6,8 à -6°C
Ethanol 40% pH 6 à -6°C
FRACTION IV
Immunoglobulines
FRACTION V
Albumine
Ethanol 40% pH 4,8 à -6°C
SURNAGEANT V
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II. METHODES D’OBTENTION DES
PREPARATIONS DU SANG
II-2 L’aphérèse
APHERESE = EXTRACTION
CYTAPHERESE: extraction sélective de cellules
sanguines (érythrocytes, leucocytes, plaquettes..) du
donneur.
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Cytaphérèse
Plasma
Plasmaphérèse
Thrombocytes
Leucocytes
Thrombaphérèse
Leucaphérèse
Erythrocytes
Erythrocytaphérèse
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II. METHODES D’OBTENTION DES
PREPARATIONS DU SANG
Cytaphérèse
Mode opératoire
Prélèvement du sang total par un automate
Séparation par force centrifuge
Conservation de la partie désirée
Réinjection de ce dont on n’a pas besoin
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Schéma de la cytaphérèse
Réinjection
des autres
cellules
Séparation
Conservation
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II. METHODES D’OBTENTION DES
PREPARATIONS DU SANG
II.3 Préparations du sang: Définitions
Produits sanguins labiles:
- issus du sang du donneur
- destinés à être transfusés: sang total, plasma,
cellules sanguines d’origine humaine
- autologues, homologues
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II. METHODES D’OBTENTION DES
PREPARATIONS DU SANG
II.3 Préparations du sang: Définitions
Produits sanguins stables ou « médicaments
dérivés du sang » (MDS):
- dérivés de pools de plasma
- caractéristiques communes: conservation longue ;
inactivation virale
- Albumine, Immunoglobulines (Ig), Facteurs de la
coagulation dont le fibrinogène
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II. METHODES D’OBTENTION DES
PREPARATIONS DU SANG
II.3 Préparations du sang: Définitions
Substituts sanguins
- Solutions de compensation en perte sanguine
(hémorragie)
- Origine naturelle ou synthétique
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III. LES PRODUITS SANGUINS
LABILES
III-1 Sang total reconstitué
CGR + PLASMA
Très peu d’indications:
Ex: exsanguino-transfusion
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III. LES PRODUITS SANGUINS
LABILES
•
•
•
•
III-2 Concentrés de globules rouges (CGR)
standard
Fractionnement d’un don de sang total.
Volume: 250 mL, Hématocrite (Ht): 60 à 70%
Conservation 4°C , 35 jours maximum
Elève en moyenne le taux d’Hb de 1g/dL et Ht
de 2%.
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III. LES PRODUITS SANGUINS
LABILES
III-2 Concentrés de globules rouges (CGR)
standard
• Indication: Anémie
• Déleucocytation par filtration .
Intérêt de la déleucocytation:
Prévenir les réactions de frissons-hyperthermie
Réduire le risque de transmission de virus
contenus dans les leucocytes (CMV, HTLV-I)
Respecter seulement la compatibilité ABO et D
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III-2-1LES DIFFÉRENTES TYPES DE
CGR
6 types:
CGR phénotypé
CGR irradié
CGR déplasmatisé
CGR congelé
CGR « CMV » négatif
CGR pédiatrique
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III-2-1LES DIFFÉRENTES TYPES DE
CGR
CGR phénotypé
• Système Rh ( Ag C , E , c , e) et le système
Kell (Ag K) .
• Indications :
- les femmes de moins de 45 ans (prévention de
l’alloimmunisation pour les grossesses à venir,
sans oublier les fillettes) ;
- Patients déjà allo-immunisés contre un de ces
antigènes ou préventivement chez des
polytransfusés ou des transfusés au long cours ;
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III-2-1LES DIFFÉRENTES TYPES DE CGR
CGR irradié
• Irradiation: 25 à 45 grays pour éviter la GVH
• Indications :
- Greffe de moelle
- Patients immunodéprimés (sauf SIDA), maladie de
Hodgkin
- Transfusion in utéro, prématurité
- Affections malignes
- Autotransfusion dans les maladies malignes
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III-2-1LES DIFFÉRENTES TYPES DE CGR
CGR déplasmatisé
• Soustraction de la majeure partie du plasma par
triple centrifugation, élimination du surnageant et
remise en suspension dans du sérum physiologique
isotonique.
• Indications :
- Déficit congénital en Ig A
- Hémophilie avec anticorps anti-facteur VIII acquis
- Réactions post-transfusionnelles non élucidées
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III-2-1LES DIFFÉRENTES TYPES DE
CGR
CGR congelé
• Conservation après prélèvement > 10 ans à
température < - 80°C, et > 20 ans à - 196°C
• Conservation possible au long cours (apport de
glycérol dans la poche comme cryoprotecteur).
• Indications :
- Groupes sanguins rares ;
- Phénotypes élargis des patients poly-allo-immunisés
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III-2-1LES DIFFÉRENTES TYPES DE
CGR
CGR « CMV » négatif
• Collecté auprès de donneurs séronégatifs pour
le CMV.
• Réservé aux patients immunodéprimés encore
séronégatifs et aux transfusions in utéro.
• Vérification sérologie lors du don
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III-2-1LES DIFFÉRENTES TYPES DE
CGR
CGR pédiatrique
Fractionnement de CGR pour adapter les volumes
à de petits gabarits.
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III-2-2MODE DE PRÉPARATION DES
CGR
• Prélèvement sur CPD (Citrate-Phosphatedextrose). 1 seul donneur
• Volume prélevé en fonction du taux d’Ht du
donneur:
- ≥ 140 ml de GR (Adulte) => ≥ 40 g d’Hb
- < 140 ml de GR(Enfant) => < 40 g d’Hb
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III-2-2 MODE DE PRÉPARATION
DES CGR (SUITE)
• Séparation des globules par centrifugation
douce
– Si Hématies: peut se faire au bout de 12 jours
– Si d’autres éléments: se fait après le prélèvement
• Transférer par pipetage dans un autre flacon
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III-2-2 MODE DE PRÉPARATION
DES CGR (SUITE)
Actuellement: Techniques modernes
• Prélèvement dans un système à 2 ou 3 poches
• Prélèvement dans la 1ère poche
• 1ère Centrifugation
• Séparation du plasma dans une autre poche
• 2e Centrifugation
• Séparation des plaquettes et des GB (
Leucocytes résiduels < 1. 106 )
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III-2-3 COMPOSITION
– Min 40 g d’hémoglobine (Pr Adulte)
– Anticoagulant
– Solution de conservation . + 100 ml SAGM (solution
de conservation : Adénine, Glucose et Mannitol en
suspension Saline isotonique).
• Volume d’environs 250 ml
• Durée de conservation: 42 jours à 5°C ± 3
(De +2 à +8°C)
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III- LES PRODUITS SANGUINS
LABILES
III-3 Concentrés plaquettaires (CP)
- CP standard
- CP d’aphérèse.
Plaquettes
Déleucocytation
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III-3-I DIFFERENTS TYPE DE CP
Concentré plaquettaire standard
- Résulte de la centrifugation d’un don de sang total - Contient environ 0,5.10-11 plaquettes.
-Posologie : une unité pour 7 à 10 kg de poids.
Concentré plaquettaire d’aphérèse.
-Obtenu auprès d’un donneur unique par cytaphérèse
- Réduction des risques immunologiques et
infectieux.
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III-3-2 PREPARATION DES
CONCENTRES PLAQUETTAIRES
Selon le type de concentrés plaquettaires
Concentrés Plaquettaires Standard (CPS)
- Prélèvements de sang total (pool de don: 2 à 12
donneurs)
- Centrifugation et recueil de la couche plaquettaire
- Mélange de 5 à 6 CPS issu du pool de dons
- Conservation (20 ± 4°C) cinq jours sous agitation
•Concentré de Plaquettes d’Aphérèse
- Provient d'un donneur unique
- Conservation (20 ± 4°C) cinq jours sous agitation
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III-3-3 CONTRÔLE DES
CONCENTRES PLAQUETTAIRES
pH
volume
numération de plaquettes
globules
résiduels
blancs
et
globules
rouges
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III- LES PRODUITS SANGUINS
LABILES
III-4 Le plasma
-Présentations
- Préparation des différents types de plasma
-Utilisation
-Contrôle
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III-4-1 Le plasma: différents types
Présentations du plasma:
Plasma liquide
Plasma congelé
Plasma desséché
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II-4-1-A Le plasma liquide
Peu ou pas utilisé
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III-4-1-B Le plasma frais congelé
Préparation (plasma frais congelé)
Pools de donneurs (10 à 12)
Plasma viro-atténué par procédé physicochimique
Plasma sécurisé par quarantaine de 120
jours, le donneur ayant à ce terme des
contrôles virologiques négatifs
Conservation:
1 an congelés
Maintenus au-dessous de –25°C.
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II-4-1B Le plasma frais congelé
(suite)
Plasma congelé obtenu par fractionnement:
Plasma de catégorie I (conservé au plus tard
6h après le prélèvement)
Plasma de catégorie II (conservé au plus
tard 24 h après le prélèvement)
Plasma de catégorie III (conservé au plus
tard 72h après le prélèvement)
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II-4-1-C Le plasma désséché
Préparation
- congélation en coquille verticalement ou
horizontalement.
- dessiccation sous un vide poussé ou
lyophilisation
- forme de paillettes
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III-4-1-C Le plasma désséché
Caractéristiques:
• Obtention d’un produit final poreux vol idem
vol de départ
• Se dissout très bien dans l’eau distillée
• Conditionné dans des flacons en matière
plastique non récupérable
• Aspect jaunâtre et se présente sous-forme de
paillettes
• Par dissolution dans l’eau , donne un soluté
opalescent.
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III-4-2 Le plasma: indications
Coagulopathie grave avec effondrement de
tous les facteurs de coagulation
Hémorragie aigue avec déficit global des
facteurs de coagulation
Déficits complexes rares en facteurs de
coagulation lorsque les fractions de
coagulation spécifique sont absentes
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III-4- 3 Le plasma: contrôle
Contrôle:
• Teneur en protéines
• Vérification de l’origine humaine
• Solubilité dans l’eau
• Détermination du taux de protéines totales par
la méthode de KJELDAHL
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III-4-3 Le plasma: contrôle (suite)
Contrôle (suite):
• Détermination de l’humidité par la méthode de
Karl Fischer sauf pour les protéines où on
effectue l’essai de la perte à la dessiccation
• Vérification de la stérilité par la recherche des
germes
• Recherche des pyrogènes
• Recherche des germes aérobies, anaérobies,
des organofongiques
• Détermination des hémagglutinines
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III- LES PRODUITS SANGUINS
LABILES
III-5 Concentrés granulocytaires
- Obtention par leucophérèse (ou leucaphérèse)
- Indications limitées: infections graves non
maitrisées par les antibiotiques chez un patient
profondément neutropénique
Globule blanc
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III-5 CG: PREPARATION
• aphérèse d’un donneur unique.
• conditionnement du donneur (corticostéroïdes
et/ou facteur de croissance comme le G-CSF).
• Minimum de 2.1010 granulocytes dans un volume
total de 200 à 650 mL
• Les concentrés doivent être irradiés et transfusés
dès que possible
• Conservation moins de 24h entre + 20 °C et + 24
°C.
Cas exceptionnels:
Donneurs = Leucémiques myéloïdes
10 000 à 200 000 GB/ mm3
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