Biologie cellulaire Techniques générales : Culture de lignées

 Biologie cellulaire
Techniques générales : Culture de lignées (HepG2, CHO-K1, HEK293, Fu5AH, COS-7, MIN-6, INS1, A7r5, A-10),
culture primaires (macrophages péritonéaux, BMDM, cellules musculaires lisses d’aorte)
Méthodologie : Etudes de prolifération cellulaire, Etudes de l’efflux cellulaire de cholestérol, Cytométrie en
flux, Transfections transitoires et stables
 Biochimie
Protéines : Extraction, fractionnement cellulaire et dosages protéiques (totales, membranaires, nucléaires),
concentrations (filtration), Western-blotting, protéines recombinantes, ELISA
Lipides : Séparation des lipoprotéines par ultracentrifugation (gradient de densité, séquentielle), par gel
filtration, Dosages lipidiques (manuels ou sur analyseur de chimie clinique / Konelab –Thermo), extraction de
lipides (Folch, Bligh and Dyer)
 Biologie moléculaire
Extractions et dosages d’ARN et ADN (cellules, organes), Reverse-transcription, PCR, RT-PCR quantitative,
Retards sur gel, Footprints, Séquençage.
Microbiologie : Transformations bactériennes, purification d’ADN, clonage, transfections cellulaires stables et
transitoires, mutagenèse dirigée
 Histologie
Immuno-histochimie sur coupes d’organes au cryostat (inclusion en OCT – cœur, surrénales), au microtome
(inclusions en paraffine – pancréas, îlots de Langerhans), Détection par immunofluorescence (FITC) sur cellules
adhérentes, Colorations lipidiques sur coupes d’organes (crosse aortique, cœur) (Oil Red O)
 Manipulations sur animaux (Diplôme d’expérimentation animale niveau 1)
Entretien général (souris, rat, hamster) : reproduction, tags, génotypages. Préparation de régimes
Prélèvements : anesthésies (gazeuse, chimique par voie IP), prélèvements sanguins (voie rétro-orbitale,
ponction cardiaque, ponction aortique), euthanasie (injection létale, dislocation cervicale, asphyxie gazeuse),
prélèvements d’organes (foie, intestin, pancréas, tissu adipeux, surrénales, muscle squelettique, cœur, crosse
aortique, aorte descendante), ou de cellules (macrophages primaires, îlots de Langerhans).
Chirurgie : Cathétérisation de l’artère carotide et de la veine jugulaire (hamster), Pancréatectomie (rat).
COMPETENCES TECHNIQUES