Genome editing

Vecteurs viraux
Qu’est-ce qu’un virus?
Machine pour le transfert d’information
génétique
Pas de métabolisme,
techniquement non-vivant!
Les virus peuvent avoir
différents types
de génomes
Et différentes formes
Pourquoi?
Les virus on la capacité d’exprimer des gène dans
un organisme déjà existant
Cette expression peux être de plus ou moins longue durée
et elle n’est pas héritable
Avantages
Sélectivité spatiale et temporelle
Pas besoin de maintenir de lignées
Utilisable chez plusieurs espèces
Rapide (pas de gestation)
Potentiellement thérapeutique chez l’humain
Limites
Non permanent
Seulement surexpression
Infection limitée
Mosaïque
Taille des gènes
Transformer
un poison en un outils
Le vecteur viral conserve la capacité d’infecter une cellule
mais ne peux plus générer de nouveaux virus
Il existe plusieurs types de vecteurs viraux
Ceux-ci ont différents avantages et limites.
Caractéristiques des vecteurs viraux
Capacité de chargement
Tropisme (cellules infectées)
Expression (promoteur)
Stabilité d’expression (intégration au génome)
Sécurité
Tropisme
Capacité d’infecter un certains type de cellule
C’est une caractéristique de la capside (sérotype)
Expression
Cela dépend du promoteur utilisé
Retrovirus
Virus à génome d’ARN
Virus enveloppé
Principalement ce sont des virus de souris
Capacité de 8Kb
Infecte des cellules en division
Lentivirus
Une variante de rétrovirus
Exemple: VIH
Infecte aussi des cellules non mitotique (ex: neurones)
Adenovirus
Virus de différentes espèces
Principalement infections respiratoires et conjonctivites chez l’humain
Virus à ADN
Capside nue
Capacité: 7.5 Kb
Bon tropisme neuronal
Réponse inflammatoire dépend du type de virus
Expression transitoire
Adeno-associated virus
(AAV)
Virus humain et primates
Infectieux mais non pathogène
Peu ou pas inflammatoire
Virus à ADN simple brins
Capside nue
Capacité: 4.5 Kb
Bon tropisme neuronal selon le sérotype
Réponse inflammatoire dépend du type de virus
Expression transitoire et faible intégration
Expression lente (2-3 semaines)
Herpes
Virus humain
Infectieux et pathogène
Virus à ADN double brins
Capside enveloppée
Capacité: 30 Kb
Bon tropisme neuronal
Non intégré mais peux être exprimer pour de longues périodes
Autres Virus
Vaccinia
-Virus bovin peu pathogène chez l’humain
-Apparenté au virus de la variole
-Rarement utilisé mais très grande capacité de cargo
(25Kb)
Rhabdovirus
-Virus de la rage
-Très bon tropisme neuronal
-Peux passer d’un neurone à un autre
-Rarement utilisé
Utilisation des vecteurs viraux
Transgénèse
Optogénétique
Récepteurs Artificiels
Designer Receptors Exclusively Activated by Designer Drugs
(DREADD)
Cre recombinase
Ou encore faire un virus activé par Cre
pour exprimer seulement dans certaines cellules …
siRNA/RNAi
Une méthode pour réduire l’expression génétique en forçant la
destruction de l’ARNm
Knockout somatique
CRISPR/Cas9
Genome editing
Hsu 2014
How CRISPR/Cas9 works
Ann Ran 2013
Lukasz Swiech et al 2014
Merci