Journée de la Recherche Médicale 2013 Développement et

Sommaire
Posters Walk ..................................................... 7
Recherche Clinique ....................................................... 9
Etude du nerf facial intraparotidien en tenseur de diffusion à 3T sur sujets sains et
sur patients opérés de tumeurs parotidiennes bénignes ....................................... 11 Stress Thallium-201/Rest Technetium-99m Sequential Dual Isotope High-Speed
Myocardial Perfusion Imaging First Validation Versus Invasive Coronary
Angiography. ................................................................................................. 12 Etude de la connectivité cérébrale fonctionnelle au repos chez les patients bipolaires
euthymiques.................................................................................................. 13 Evaluation de l’assistant électronique INRPlus d’aide à la prescription de
la fluindione................................................................................................... 14 Corrélation radio-anatomique dans les carcinomes hépatocellulaires traités par
transplantation hépatique et impact de la chimioembolisation néoadjuvante ........... 15 Alfentanil versus Sufentanil avant les aspirations trachéales en Réanimation
Pédiatrique .................................................................................................... 16 Utilisation de la VAC–thérapie (vacuum assisted closure) en chirurgie néonatale
abdominale complexe (grand prématuré) ........................................................... 17 Validation des critères RECIST chez des patients porteurs d’un cancer bronchique
traités par chimiothérapie (étude Pharmacogenoscan) ........................................ 18 Caractéristiques et impact pronostique des différents types d’immunodépression
chez les patients admis en réanimation pour sepsis sévère ou choc septique ........... 19 Facteurs prédictifs des variations du flux d’activité d’un centre 15 : est-il possible de
prévoir les pics d’activité ? ............................................................................... 20 Recherche Fondamentale .......................................... 21
L’effet de la phospholipase A2 murine de groupe X sur la fécondation in vitro n
dépend pas du taux de réaction acrosomique. ................................................... 23 Une réaction inflammatoire exubérante est responsable de l’arthrite réactionnelle à
Chlamydia muridarum chez la souris SKG : Rôle du contrôle de la charge bactérienne
et des lymphocytes T régulateurs dans un modèle murin du syndrome de Reiter ..... 24 Unraveling secrets of the epigenome using mass spectrometry and structural
biology ......................................................................................................... 25 VEGF165b : un marqueur de réponse aux thérapies anti-angiogéniques dan
les cancers du poumon ? ................................................................................ 26 Le rôle des dérivés du tryptophane dans le dialogue inter-règne entre Pseudomonas
aeruginosa et les cellules de l’immunité. A la recherche d’une nouvelle cible
thérapeutique. ............................................................................................... 27 Page|1
Etude du rôle joué par la porine Omp-Pst1 dans le phénotype de résistance aux
antibiotiques de Providencia stuartii. ................................................................. 28 Couplage de la NADPH oxydase et de la glycolyse dans les neutrophiles activés
Rôle de la phosphofructokinase-2 ..................................................................... 29 Cellular iron homeostasis in leukemia: experimental and modeling approaches ....... 30 Ingénierie moléculaire d’un Facteur Xa activé pour le traitement de l’hémophilie ..... 31 Docosahexaenoic acid supplementation in Apolipoprotein-E deficient mice exposed
to intermittent hypoxia: effect on atherogenesis prevention................................. 32
Recherche Translationnelle ........................................ 33
Protein Transfert induced Pluripotent Stem Cells ................................................. 35 SUCCESSFUL MODELISATION OF X-LINKED CHRONIC GRANULOMATOUS DISEASE
(X-CGD) BY USING PATIENT-SPECIFIC INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS
(iPSCs) ......................................................................................................... 36 Nouveaux agents antibactériens : dérivés de structure bis-indolique ou pyrrolique ... 37 Développement et évaluation d’un environnement virtuel d’apprentissage des
biopsies prostatiques ...................................................................................... 38 Highly variable plasma concentrations of voriconazole in adult recipients of allogeneic
hematopoietic stem cell transplantation ............................................................. 39 Caractérisation de l’expression du gène de la protéine neuro-inflammatoire MSRV-Env
ex vivo et in vitro dans les cellules du sang périphérique et dans les lignées
lymphoblastoïdes immortalisées par l’EBV issues de patients atteints de sclérose
en plaques .................................................................................................... 40 Étude du réseau lacuno-canaliculaire de l'os par optique non linéaire ..................... 41 GeniusVac-Mel4 : a new immunotherapeutic strategy for the treatment of
melanoma ..................................................................................................... 42 Analyse de l’effet anticancéreux d’un inhibiteur de la LIM Kinase, « Liminib », et
compréhension du mécanisme d’action .............................................................. 43 Apport de la navigation par imagerie 3D per opératoire dans les cimentoplasties
vertébrales percutanées. ................................................................................. 44 Intérêt de l’évaluation de l’expression des protéines en immunohistochimie dans les
cancers bronchiques non à petites cellules (étude Pharmacogenoscan)................... 45
Les résumés .................................................... 47
Cortical reorganization in speech areas after intra-oral surgery ............................. 49 Intérêt pronostique de marqueurs biologiques devant une dyspnée aigue sévère ..... 50 Optimisation d’un modèle animal pour les cancers des VADS et apport de l’imagerie
en fluorescence dans l’exérèse tumorale ............................................................ 51 Intérêt de la séquence Flair-Vista 4 heures après injection dans la maladie
de Ménière .................................................................................................... 52 Page|2
Profil de Participation au dépistage organisé du cancer du sein des femmes de l’Isère
entre 2002 et 2011......................................................................................... 53 Intérêts de la toxicocinétique et de l’ajustement à la créatinine urinaire pour la
surveillance biologique de l’exposition aux Hydrocarbures Aromatiques
Polycycliques ................................................................................................. 54 Implication du noyau sous thalamique de patients parkinsoniens dans l'inhibition
proactive et réactive. ...................................................................................... 55 Aging and Mental-Cognitive State modulate Cortical Excitability (TMS) ................... 56 Neuroprotection par effets modulateur de l’érythropoïétine carbamylée sur
l’aquaporine-4 dans un modèle d’œdème cérébral diffus post-traumatique.............. 57 Le transfert d’embryon unique : EG-VEGF, bio-marqueur de l’implantation
embryonnaire ? .............................................................................................. 58 Rôle du facteur HSF1 dans la réponse des carcinoses péritonéales au traitement
par chimio-hyperthermie ................................................................................. 59 Prédicteurs de dysfonction rénale persistante à 1 an des patients encore dialysés en
sortie de réanimation ...................................................................................... 60 Exploration comportementale des déficits de mise à jour égocentrée dans la maladie
d’Alzheimer ................................................................................................... 61 La Neurostimulation Vagale à visée anti-inflammatoire : une nouvelle approche
thérapeutique de la maladie de Crohn ............................................................... 62 Dysfonction myocardique induite par le sepsis : exploration fonctionnelle in vivo du
système nerveux sympathique cardiaque ........................................................... 63 Quelles mesures tomodensitométriques quantitatives et qualitatives pour le suivi d’un
nodule pulmonaire en verre dépoli ?.................................................................. 64 Involvement of cytochrome epoxygenase metabolites in cutaneous postocclusive
hyperemia in humans ..................................................................................... 65 Prévalence et caractéristiques étiologiques des enfants avec déficience intellectuelle
légère dans le département de l’Isère................................................................ 66 Mécanismes moléculaires de la virulence du pneumocoque ................................... 67 L’endopeptidase ECEL1 est associée à l’arthrogrypose distale autosomique récessive 68 Influence du taux de PSA et de son temps de doublement sur les performances de
la TEP à la 18Fluoro-choline dans la recherche du site de rechute du cancer
de prostate.................................................................................................... 69 Etude organisationnelle et structurale des protéines Murs, impliquées dans la synthèse
de la paroi bactérienne .................................................................................... 70 Implication du facteur de transcription HIF-1 et de l’endothéline-1 dans l’apparition de
l’inflammation systémique et du remodelage vasculaire induits par l’hypoxie
intermittente chronique ................................................................................... 71 Evaluation des modifications Vocales précoces après Chirurgie endocrinienne
cervicale ....................................................................................................... 72 Antagonist effects of selenium supplementation as a function of chemical form and dose:
anti-photoageing versus toxic effects. ............................................................... 73 Page|3
Etude de la mémoire de travail chez l’enfant opéré d’un médulloblastome du cervelet
résultats préliminaires en IRM fonctionnelle........................................................ 74 Apport de la biologie structurale pour le développement de nouvelles stratégies
thérapeutiques contre le cancer ........................................................................ 75 Anticorps anti-HLA et déterminisme du TRALI (Transfusion-Related Acute Lung Injury) :
évaluation de l’immunité innée dans le conflit immunologique ............................... 76 Anodal iontophoresis of a soluble guanylate cyclase stimulator induces a sustained
increase in skin blood flow in rats ..................................................................... 77 IRMf BOLD de la réserve cérébro-vasculaire chez les patients porteurs d’une sténose
artérielle intracrânienne sévère ........................................................................ 78 Comparison between Two Generic Questionnaires to Assess Satisfaction with Medication
in Chronic Diseases ........................................................................................ 79 Evolution de la prise en charge des MICI après les résultats de l’étude SONIC ......... 80 Prélèvement respiratoire à Aspergillus chez les patients immunocompétents de
réanimation ................................................................................................... 81 Taux d’aneuploïdies spermatiques lors du lymphome et au décours des traitements :
quand vaut-il mieux envisager un projet d’enfant? .............................................. 82 Intérêt de la fluxmétrie laser Doppler pour l’étude comparée du flux sanguin oculaire
chez l’homme et l’animal soumis à l’hyperoxie .................................................... 83 De nouveaux outils théranostiques pour le diagnostic des réarrangements ROS1
dans les adénocarcinomes pulmonaires ............................................................. 84 Sugar-sweetened beverages and body weight in children and adolescents :
a systematic review and meta-analysis of randomized trials ................................. 85 Biological diagnosis of Thrombotic Thrombocytopenic Purpura: nothing but eyes? .... 86 Absolute perfusion measurements and associated iodinated contrast agent time
course in brain metastasis: a study for synchrotron stereotactic radiotherapy clinical trials
................................................................................................................... 87 Mécanismes de synthèse de la paroi du pneumocoque et résistance aux
β-lactamines .................................................................................................. 89 Bases neurales de la verticale visuelle après AVC hémisphérique ........................... 90 The Cancer Biomarkers problem: surfactant soluble properties reveal promising
improvement for protein detection in human serum ............................................ 91 Impact de la ventilation mécanique sur la fonction ventriculaire droite.
Apport du Speckle tracking imaging .................................................................. 92 Ortheses plantaires et talalgie : effet sur la distribution des pressions plantaires ..... 93 Oculo Cerebro Renal of Lowe Exon skipping gene therapy: Application to the
c.238+4701 A>G mutation .............................................................................. 94 Surveillance observationnelle des Problèmes de Santé au Travail ......................... 95 Origine et trajet des artères systémiques vascularisant les malformations bronchopulmonaires congénitales : témoin chronologique de leur origin
embryopathogénique ...................................................................................... 96 Page|4
Détermination topologique de la NADPH oxydase Nox4 par la méthode ToDUFA
« Topological Determination by Ubiquitin Fusion Assay » ...................................... 97 Phosphodiesterase-5 inhibitors for the treatment of secondary Raynaud’s Phenomenon:
systematic review and meta-analysis of randomized trials .................................... 98 Iontophoresis of treprostinil: a pharmacokinetic and pharmacodynamic study ......... 99 Effet différentiel de l'anticipation incertaine versus certaine de la douleur viscérale
chez le volontaire sain - étude IRMf .................................................................100 Le risque infectieux des cathéters veineux fémoraux est-il supérieur à celui des cathéters
jugulaires internes ? utilisation d’un modèle longitudinal structurel marginal ..........101 Cinétique de la dyspnée au cours du test de marche de 6 minutes chez des patients
porteurs d’obésité et d’un syndrome d'apnées obstructives du sommeil (SAOS) ..... 102 Pratique de la FIV-ICSI avec et sans cryoconservation de spermatozoïdes chez les
patients oligozoospermiques sévères et cryptozoospermiques au CHU de Grenoble
de 2004 à 2011.............................................................................................103 Structure-activity studies on the microtubule based motor protein Eg5 mutants
associated with drug resistance .......................................................................104 Plasma proteome of Acute Myeloid Leukemia .....................................................105 Transcriptional leukotriene pathway activation in Apolipoprotein-E deficient mice
exposed to intermittent hypoxia : role in atherosclerosis .....................................106 Medico-economic assessment of multiplex real-time PCR assays for emergency
diagnosis and prophylaxis of selected infectious diseases ....................................107 Evaluation de la sensibilité aux antibiotiques de 31 souches de Francisella tularensis
isolées en France...........................................................................................108 Targeted therapy improves overall survival in metastatic renal clear cell carcinoma:
Monocentric review since 2000 ........................................................................109 Evaluation prospective des éléments décisionnels conduisant à admettre en réanimation
des patients porteurs d’un cancer bronchique (étude CBP-DO) ............................110 Neuroprotection induite par l’érythropoïétine carbamylée : Effets sur la perméabilité
mitochondriale et l’apoptose ...........................................................................111 Gestion et communication des données manquantes dans les études cliniques en
réanimation ..................................................................................................112 Le polymorphisme de l’IL28B n’affecte pas l’activité lymphocytaire des cellules
immunitaires intra-hépatiques en cas d’hépatite chronique virale B....................... 113
Page|5
Les résumés EDCSV & EDISCE sélectionnés
pour communications orales ............................. 115
Isolation of several scFv of non-human primate origin, neutralizing type E botulinum
toxin by targeting its light chain ......................................................................117 BMP9 et BMP10, Deux nouvelles protéines impliquées dans la fermeture du canal artériel
..................................................................................................................118 Pharmacoepidemiological approach to assess long-term benefits of inhaled corticosteroids
in asthma .....................................................................................................119 Cellular iron homeostasis in leukemia: experimental and modeling approaches ......120 Page|6
Journée de la Recherche Médicale 2013
Posters Wal k Page|7
Journée de la Recherche Médicale 2013
Recherche Cl inique (RC 01 à RC 10) Page|9
Poster n°
RC 01
Journée de la Recherche Médicale 2013
Etude du nerf facial intraparotidien en tenseur
de diffusion à 3T sur sujets sains et
sur patients opérés de tumeurs
parotidiennes bénignes
Arnaud Attyé
1-2
1
3
4
3
, Irène Troprés , Alexandre Karkas , Georges Bettega , Christian Righini ,
3
1-2
Emile Reyt , Alexandre Krainik
1-UMS IRMaGe
2-Clinique Universitaire de Neuroradiologie et d’IRM – CHU Grenoble
3-Clinique Universitaire d’ORL – CHU Grenoble
4-Clinique Universitaire de Chirurgie Maxillo-faciale – CHU Grenoble
Objectif
Nous présentons 2 études de faisabilité de tracking du nerf facial (VII) à partir du foramen
stylo-mastoïdien jusqu’à sa division dans la parotide en tenseur de diffusion sur une IRM 3T.
La première sur sujet sain, avec étude de reproductibilité et corrélation aux atlas anatomiques
et la seconde sur patients avec corrélation aux données du monitoring du nerf facial réalisé in
vivo par le chirurgien lors de l’exérèse d’une lésion parotidienne bénigne.
Matériels et Méthodes
Etude 1: Les sujets sains ont pu bénéficier de 2 séquences de tenseur de diffusion à 15 et 32
directions (DTI 15 et DTI 32) superposées sur une séquence anatomique pondérée en T2. Les
séquences de DTI sont réalisées sur une machine Philips ACHIEVA 3T TX avec un facteur
b=1000 et une antenne 32 canaux. L’acquisition des voxels est isotropique à 2mm pour les 2
séquences. La séquence DTI15 dure 3’51’’, la DTI32 7’58’’.
La tractographie est ensuite réalisée sur la console Philips avec le logiciel FiberTrack® avec la
méthode des régions d’intérêt (single ROI). La fraction d’anisotropie utilisée pour
l’identification des branches de division proximale est FA=0.05 et l’angle maximal=80°.
Etude 2 : Les patients avec suspicion de tumeurs parotidiennes bénignes ont bénéficié lors de
leur bilan IRM initial morphologique d’une séquence DTI15 ou DTI32. Les lésions étaient
positionnées de part et d’autre de la division du nerf facial dans la portion profonde ou
superficielle de la parotide et les données de la tractographie adressées aux chirurgiens.
La corrélation per-opératoire a été réalisé par le chirurgien au bloc opératoire par analyse
visuelle et monitoring du nerf facial (dispositif Avalanche®).
Résultats
Etude 1 : Le tronc du nerf facial et la branche cervicofaciale sont identifiés pour les 12
parotides. La branche temporofaciale n’est identifiée que pour 9 parotides sur 12.
La longueur moyenne des branches du nerf facial est plus importante sur le DTI32
(50,4±4.5mm) que sur le DTI15 (48,1±2,9) mais la durée de la séquence DTI32 accroit les
artéfacts de mouvements.
Etude 2 :8 patients (Âge moyen : 46,6 ans ; 1 femme) ont bénéficié de la séquence DTI en
préopératoire. 5 patients ont eu une séquence DTI15 et 3 patients une séquence DTI32.
Les lésions parotidiennes opérées comportent 4 cystadénolymphomes, 2 adénomes
pléiomorphes, 1 kyste du 1 er arc branchial et 1 abcès.
Les séquences DTI ont permis dans les 8 cas de localiser la lésion de part ou d’autre de la
division du nerf facial intraparotidien et le rapport avec les branches de division est corrélé
aux données du monitoring.
Conclusion
La tractographie du nerf facial intra-parotidien est faisable à 3T et constitue une aide
appréciable pour le chirurgien pour la cartographie lésionnelle pré-opératoire. La séquence
DTI32 pour le tracking des branches du nerf facial à distance du foramen stylo-mastoïdien
semble plus fiable mais accroit significativement la durée de l’IRM et le risque d’artéfacts de
mouvements.
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Poster n°
RC 02
Journée de la Recherche Médicale 2013
Stress Thallium-201/Rest Technetium-99m
Sequential Dual Isotope High-Speed
Myocardial Perfusion Imaging First Validation
Versus Invasive Coronary Angiography.
Gilles Barone-Rochette 1,2, Melanie Leclerc 1, Alex Calizzano 3, Catherine Ghezzi 2 , Jean
Philippe Baguet1,2, Jacques Machecourt1,2, Gérald Vanzetto1,2 , Daniel Fagret 2,3
1
2
Department of Cardiology, University Hospital, Grenoble, France
INSERM U1039, Bioclinic Radiopharmaceutics Laboratory, Grenoble, France
3
Department of Nuclear medicine, University Hospital, Grenoble, France
Background
Recent advances in nuclear myocardial perfusion imaging (MPI) have provided possibility to
use dual isotope protocol for high speed acquisition (DI-HS-MPI) with image quality and
radiation dosimetry similar to those observed with a conventional single isotope protocol. So
far, no study compares the results of DI-HS-MPI to invasive coronary angiography.
Methods
Over 1-year period (May 2011 to April 2012), A total of 1366 patients received DI-HS-MPI.
Patients with invasive coronary angiography (ICA) within 3 months and patients with low
likelihood of coronary artery disease (CAD) to assess normalcy rate were included. The global
summed stress score (SSS), summed rest score (SRS) were calculated and ICA were analyzed
in a blinded to the results of MPI. The main outcome was the evaluation of patient based
diagnostic performance of DI-HS-MPI to detect or rule out significant CAD (>70% luminal
diameter reduction).
Results
Criteria were fulfilled by 216 patients (73 men, age 65 ± 12 years; ICA, n = 104; normalcy
rate, n = 112). Exercise-test was performed in 36% of patients, pharmacological stress with
dipyridamole in 48%, and dobutamine in 16%. Prevalence of angiography CAD was 72%.
Average exam duration was 20 ± 5 min. Sensitivity was 94%, normalcy rate was 91%, and
accuracy was 83% for detecting obstructive CAD.
Conclusion
In this first comparison of DI-HS-MPI with ICA, we show a high accuracy for detection of
angiographically documented CAD for this new camera technology and new high speed
protocol.
Key words: Myocardial perfusion imaging / dual isotope/ coronary artery disease
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Poster n°
RC 03
Journée de la Recherche Médicale 2013
Etude de la connectivité cérébrale fonctionnelle
au repos chez les patients bipolaires
euthymiques
P. Favre 1, M. Polosan 2, C. Pichat 1, T. Bougerol 2 & M. Baciu 1
Laboratoire de Psychologie et de NeuroCognition, CNRS UMR 5105, Bâtiment sciences de
l'homme et des mathématiques, BP 47, 38040, Grenoble Cedex 9 - Université Grenoble Alpes
2
Centre Hospitalier Universitaire de Grenoble, Pôle Psychiatrie et neurologie,
Université Joseph Fourier
1
Introduction
Le trouble bipolaire (BP) se caractérise par l'alternance de périodes d'euphorie marquée
(maniaques) et de dépression. Ces épisodes aigus de la maladie sont accompagnés de
troubles émotionnels et cognitifs significatifs, perdurant lors des périodes de stabilisation,
même si euthymiques, et pouvant ainsi constituer des anomalies traits de la maladie. La
dysconnectivité des réseaux fronto-limbiques pourrait expliquer ces déficits, mais peu
d'études l'ont exploré chez les patients BP euthymiques. Ce travail a pour but d'étudier la
connectivité cérébrale fonctionnelle au repos chez les patients BP euthymiques afin d'identifier
des anomalies traits de la maladie, non dépendantes de l'état dépressif ou maniaque.
Méthodes
Dans cette étude d’imagerie par résonnance magnétique fonctionnelle (IRMf) 20 patients BP
euthymiques et 20 sujets sains ont été inclus. Une méthode seed-analysis a été employée en
prenant le cortex préfrontal médial (mPFC) comme région source. Les cartes de connectivité
fonctionnelles entre le mPFC et le reste du cerveau ont été établies pour chaque participant,
puis utilisées dans une comparaison inter-groupes (patients vs. sujets sains). De plus, une
analyse par région d'intérêt (ROI) focalisée sur la connectivité fonctionnelle du mPFC et des
amygdales a été effectuée. Enfin, le lien entre les caractéristiques cliniques des patients et
leur profil de connectivité fonctionnelle a été exploré.
Résultats
La connectivité du mPFC et du cortex préfrontal dorsolatéral (dlPFC) droit différait
significativement entre sujets sains et patients BP euthymiques. L'activité du mPFC et du
dlPFC était anti-corrélée (corrélation négative) chez les sujets sains alors que l'activité de ces
deux régions n’était pas significativement corrélée chez les patients BP. L'analyse par ROI a
montré une hyper-connectivité du mPFC et de l'amygdale droite chez les patients BP par
rapport aux sujets sains. Enfin, la connectivité mPFC-amygdale droite chez les patients BP
corrélait significativement avec la durée de la maladie.
Conclusions
La connectivité au sein du réseau par défaut (DMN) semble être préservée chez les patients
BP euthymiques mais le déficit d'anti-corrélation entre le mPFC (région centrale du DMN) et
du dlPFC (région centrale du réseau activé lors de tâches cognitives) suggère une difficulté de
flexibilité entre l'attention portée vers les stimuli internes et l'attention portée vers le monde
extérieur. Par ailleurs, l'hyper-connectivité entre le mPFC et le système limbique (amygdale)
suggère une implication émotionnelle excessive au repos chez les patients BP, qui serait, de
plus, accentuée par la durée de la maladie, en cohérence avec l’hypothèse de kindling
avancée par Post (2007).
P a g e | 13
Poster n°
RC 04
Journée de la Recherche Médicale 2013
Evaluation de l’assistant électronique INRPlus
d’aide à la prescription de la fluindione
P Imbert 1, JP Jacquet 1, C Bailly 2,S. Laporte 3, G Pernod 4, M Lièvre5
1 Département de médecine générale, Faculté de médecine de Grenoble, 2 Merck Serono*
S.A.S. Lyon, 3 Unité de recherche clinique et pharmacologique, CHU ST Etienne, Université
Jean Monnet, St Etienne, 4 Service de médecine vasculaire, CHU de Grenoble, 5 UMR CNRS
5558/EMET site Laennec, Lyon 8ème
Plan
Intérêt et cadre de la recherche scientifique
Malgré un Service Médical Rendu important, les AVK sont responsables par leur iatrogénie
d’environ 17000 hospitalisations par an. L’amélioration du temps passé dans la zone
thérapeutique (TTR), basé sur l’INR permet de diminuer les accidents hémorragiques ou les
récidives de thrombose.
Objectif
Démontrer que l’utilisation d’INRPlus, un assistant électronique autonome, transportable de
type calculette, doté d’un algorithme pour la gestion des doses quotidiennes de fluindione en
fonction de l’INR, peut améliorer le TTR par rapport à la gestion habituelle du traitement par
les médecins généralistes (MG).
Méthodes
Etude prospective randomisée ouverte, réalisée auprès de 111 médecins généralistes (MG)
organisés en 20 grappes (Cluster Trial) réparties sur l'ensemble du territoire français de
Septembre 2010 à Octobre 2011

Résultats
73,4% des patients du groupe INR plus ont passé plus de 60% du temps dans la zone
thérapeutique versus 67,12% des patients pour le groupe référence (p=NS) sans interaction
des facteurs sexe, âge, poids, niveau d’INR souhaité, période de traitement (initiation ou
entretien) et avis du médecin sur la difficulté d’équilibre du traitement.
Une analyse exploratoire réalisée sur le groupe de patients pour lesquels plus de 75% des
posologies prescrites respectaient la posologie indiquée par la calculette, a permis de montrer
après ajustement du score de propension (intégrant l’âge, le poids, le sexe, la période de
traitement, l’indication du traitement) que 82% des patients (91/111) de ce groupe passaient
plus de 60% du temps dans la zone thérapeutique versus 66,7% (98/147) pour ceux dont la
posologie était ajustée selon le médecin (p=0,0184)

Conclusions
Les résultats de cette étude ont mis en évidence un pourcentage de patients dans la zone
thérapeutique supérieur à celui attendu sans différence significative entre les 2 groupes.
L’attention particulière portée sur le traitement AVK par les MG, la qualité de la gestion du
traitement AVK par des médecins formés et l’accès aisé à un algorithme pourrait
probablement être à l’origine de l’optimisation de la prise en charge de la fluindione. P a g e | 14
Poster n°
RC 05
Journée de la Recherche Médicale 2013
Corrélation radio-anatomique dans les
carcinomes hépatocellulaires traités par
transplantation hépatique et impact de la
chimioembolisation néoadjuvante
Laetitia LECOQ ˡ, Jérôme GENDRE ˡ, Nathalie STURM ˡ, Christian LETOUBLON ˡ, Vincent LEROY ˡ ²
ˡ Clinique universitaire d’HépatoGastro-Entérologie BP 217 38043 CHU Grenoble Cedex 09
² IAPC INSERM U843 Institut Albert Boniot
[email protected]
La transplantation hépatique est aujourd’hui un des traitements majeurs du carcinome
hépatocellulaire. Un traitement néo-adjuvant principalement par chimio-embolisation est
réalisé dans la plupart des centres, soit comme « bridging therapy » afin d’éviter une
progression tumorale sur liste d’attente, soit comme « downstaging » afin de pouvoir
transplanter les patients ayant une bonne réponse tumorale même si leur tumeur sortait des
critères initialement. Le but de cette étude est de savoir s’il existe une bonne corrélation entre
l’imagerie sur laquelle sont basés les critères de transplantation et l’anatomopathologie et
d’évaluer la rentabilité de l’imagerie pour établir une réponse tumorale après chimioembolisation.
Méthodes
Il s’agit d’une étude rétrospective, unicentrique, incluant tous les patients transplantés
hépatiques à Grenoble entre janvier 2005 et août 2012 chez qui un carcinome hépatocelullaire
a été retrouvé en anatomopathologie. L’étude portait sur 100 patients et 322 nodules. 54
patients ont reçu un traitement néoadjuvant qui a été réalisé systématiquement si le score de
Child Pugh le permettait. 11 récidives ont été observées jusqu’en février 2013 et 28 décès.
Une comparaison a été faite entre la dernière imagerie réalisée avant la transplantation
hépatique (scanner ou IRM) et la pièce histologique de l’explant.
Résultats : Il existait une bonne corrélation entre l’imagerie et l’anatomopathologie pour le
diamètre cumulé total avec un index de corrélation à 0.7 (p=0,001). Pour les différents
critères de transplantation étudiés (Milan, UCSF, up to 7 et score alpha) le taux de
concordance était respectivement de 77%, 81%, 83% et 89%. Les critères étaient dépassés
essentiellement en raison du nombre de nodules (78%). En analysant plus précisément ces
nodules non vus à l’imagerie, ils étaient significativement plus petits que ceux détectés
(n=96, 11mm vs 21mm, p=0.001). Concernant la chimioembolisation néoadjuvante, elle a
permis de diviser par 2.52 le volume tumoral en imagerie (63 vs 25mm) et par 1.9 en
anatomopathologie (59 vs 31mm).Une réponse tumorale complète a été obtenue dans 44%
des cas en imagerie contre 28% en anatomopathologie. Il y avait une surestimation de la
réponse tumorale en imagerie chez 8 patients (33%). Il n’y a pas de différence significative
sur la récidive entre les patients ayant reçu un traitement néoadjuvant et ceux qui n’en ont
pas eu. De même, il n’y a pas de différence non plus entre les patients discordants à
l’imagerie et l’anatomopathologie et ceux concordants, que ce soit dans les critères ou en
dehors. Par contre, chez les patients ayant eu une chimioembolisation, il y a un risque accru
de récidive si les patients sortent des critères de Milan à l’anatomopathologie comparés à ceux
qui sont en dedans, que ce soit avant traitement néoadjuvant ou après downstaging.
Conclusion
Il existe une bonne corrélation entre l’imagerie et l’anatomopathologie, les nodules non vus
étant plus petits et n’impactant pas la survie et le risque de récidive.
Par contre, en cas de chimioembolisation, il existe un risque important de surestimer la
réponse tumorale en imagerie (33%). Les récidives étant peu nombreuses (11%), il y a un
manque de puissance pour pouvoir constater des différences significatives mais il y a quand
même une tendance qui montre que l’important serait d’être dans les critères à
l’anatomopathologie, pour n’importe quel critère utilisé.
P a g e | 15
Poster n°
RC 06
Journée de la Recherche Médicale 2013
Alfentanil versus Sufentanil avant
les aspirations trachéales en
Réanimation Pédiatrique
1
A. Millet ¹, I. Wroblewski ¹, S. David Tchouda ², C. Tournaire ¹, A. Desrumaux ¹,
V. Payen ¹, A. Gayot ¹, M. Cartal ³, J.-F. Payen ³, T. Debillon ¹
Département de Réanimation Pédiatrique, CHU Grenoble; ² CIC, CHU Grenoble; ³ Pôle
Anesthésie Réanimation, CHU Grenoble
Intérêt et cadre de la recherche
La douleur est une préoccupation des équipes de réanimation pédiatrique en raison de son
effet délétère sur certaines pathologies (patients cérébro lésés)1 mais également de la forte
prévalence de stress post traumatique2. Aucune recommandation n’existe sur la prise en
charge d’une douleur aigue et moins d’un tiers des enfants reçoivent une analgésie adéquate
au cours d’une procédure douloureuse3.
Objectif scientifique
Notre objectif a été de comparer l’effet de deux analogues morphiniques sur le confort de
l’enfant au cours d’une aspiration trachéale.
Matériels et méthodes
Le protocole a été accepté par le CPP et le consentement éclairé des parents a été recueilli. Il
s’agit d’une étude monocentrique prospective randomisée en double aveugle sur 2 groupes
parallèles : 40 enfants ont reçu un bolus intraveineux de 10µg/Kg d’Alfentanil ou de
0,15µg/Kg de Sufentanil 3 min avant une aspiration trachéale (H0). La même procédure a été
répétée à H4. Le critère de jugement principal a été le score de COMFORT B avec un objectif
de 11 à 22 pour une sédation analgésie adéquate. Nos critères de jugement secondaires ont
été les effets hémodynamiques et les variations de l’indice bispectral (BIS). Ces paramètres
ont été recueillis avant, 0, 5 et 15 min après chaque aspiration trachéale. Nous avons
également étudié les durées de ventilation mécanique et d’hospitalisation en réanimation. Les
données ont été exprimées par leur médiane (extrêmes) ou par leur moyenne (SD). L’analyse
statistique a comporté des tests de Mann Whitney, Student, Fisher et Chi 2. Un test de
Spearman a été utilisé pour l’étude des corrélations.
Résultats
Nous avons inclus 21 patients dans le groupe Sufentanil et 19 dans le groupe Alfentanil, pour la
plupart en post-opératoire d’une chirurgie viscérale lourde (N/40). L’âge moyen a été de 8,3 mois
[5,2-23,7]. Les scores de COMFORT B ont été comparables immédiatement après l’aspiration
trachéale dans les 2 groupes (10,5 [9; 13,5] et 11 [8; 16] dans le groupe Alfentanil versus 10,5
[9; 13,5] et 12 [7; 16] dans le groupe Sufentanil à H0 et H4 respectivement; p=0,7 et 0,8).
Davantage d’effets hémodynamiques ont été observés dans le groupe Sufentanil dans les 15 min
suivant l’aspiration trachéale, soit une baisse de plus de 10 mmHg de pression artérielle et/ou de
plus de 10 bat/min de fréquence cardiaque (15 versus 9 patients dans le groupe Alfentanil;
p=0,02). Aucune variation du BIS n’a été notée au cours des aspirations trachéales pour chacun
des groupes. Les durées de ventilation mécanique et de séjour en réanimation ont été similaires
entre les 2 groupes (2±2,8j et 3,1±4,8j de ventilation mécanique et 5,2±5,6j et 11,2±11,8j
d’hospitalisation pour les groupes Sufentanil et Alfentanil respectivement; p=0,12 et 0,18).
Conclusion
L’Alfentanil semble être une bonne alternative au Sufentanil concernant la prise en charge
d’une douleur aigue en réanimation pédiatrique, du fait de la moindre prévalence d’effets
secondaires pour un effet analgésique équivalent.
Références
1. Heart Lung. 1996 Aug;25(4):295–303 2. J Dev Behav Pediatr. 2002 Jun;23(3):133-44 3.
CMAJ. 2011 Apr 19;183(7):E403–410
P a g e | 16
Poster n°
RC 07
Journée de la Recherche Médicale 2013
Utilisation de la VAC–thérapie (vacuum assisted
closure) en chirurgie néonatale abdominale
complexe (grand prématuré)
Y ROBERT1,2, S BARBOIS1, C JACQUIER1, Y TEKLALI1, S ANTOINE1, S SIBAI1
C EPIARD3, C DIOUF1, F CAMARA1, C PIOLAT1
1
Clinique Universitaire de Chirurgie Pédiatrique, Responsable Pr Ch PIOLAT
LADAF Laboratoire d’Anatomie des Alpes Françaises responsable Pr Ph CHaffanjon
3
Clinique Universitaire de Médecine Néonatale et Réanimation Pédiatrique Responsable Pr Th
DEBILLON
Hôpital Couple Enfant, CHU de Grenoble, Université Joseph Fourier
2
Intérêt et cadre de la recherche.
La chirurgie néonatale comporte de grandes spécificités et expose le chirurgien pédiatre et
l’équipe de néonatalogie à des situations parfois très complexes. Parmi celles-ci, la survenue
d’entérocolites ulcéro-nécrosantes (ECUN) compliquées (perforations digestives sur nécrose
intestinale, sepsis non contrôlé par l’antibiothérapie) chez de grands prématurés représente
souvent un défi thérapeutique. Des complications intra-péritonéales et pariétales peuvent
accentuer encore la complexité de la prise en charge.
Objectif scientifique.
Evaluer localement au sein de notre institution la place de la VAC-thérapie comme aide au
traitement de complications pariétales et intra-péritonéales sévères d’ECUN graves chez les
enfants grands prématurés.
Méthodes.
Les auteurs rapportent deux observations de nouveau-nés grands prématurés (31 SA et 27 SA)
pris en charge respectivement en 2011 et 2012 pour ECUN grave multi-opérée. Trois
interventions successives par laparotomie médiane ont été nécessaires chez chaque enfant
(drainage, résections intestinales, entérostomies) avant que ne survienne dans les deux cas une
désunion complète de la paroi abdominale avec exposition des anses intestinales d’origine multifactorielle (suppuration, œdème viscéral, hyperpression abdominale,…). La désunion mesurait en
longueur 3 cm dans le premier cas et 8 cm dans le deuxième cas. Le premier enfant a également
présenté une fistule entéro-cutanée concomitante. L’état clinique des enfants était jugé sérieux.
L’équipe chirurgicale a opté en première intention pour la réalisation d’une VAC-thérapie.
Résultats.
La réfection des pansements de VAC a pu être réalisée sans difficulté soit au bloc opératoire
soit dans la couveuse (anesthésie générale puis sédation) tous les 2-3 jours. La tolérance a
été bonne. Aucune complication n’est survenue. Une cicatrisation complète a été obtenue
dans un délai de 8 semaines avec ré-épithélialisation de la désunion. Aucun geste de
fermeture différée de la paroi abdominale n’a été nécessaire. Le premier enfant porteur d’une
fistule entéro-cutanée a également présenté une cicatrisation de cette fistule ; cet enfant est
décédé plusieurs mois plus tard dans les suites d’une transplantation multi-viscérale. Le 2ème
enfant a eu une évolution favorable permettant d’envisager une fermeture de son
entérostomie 3 mois après le début de la procédure VAC ; il est toujours hospitalisé pour
poursuite de la nutrition entérale et présente un petit défect pariétal abdominal avec
exposition d’une anse grêle (1 cm2).
Conclusions.
Bien documentée chez l’adulte et chez l’enfant depuis plus d’une dizaine d’années, le recours à la
VAC-thérapie chez le nouveau-né et le prématuré est plus récent (première publication en 2005).
Cette petite étude sur 2 observations permet de conclure à la faisabilité technique et à la grande
efficacité de la VAC-thérapie dans les contextes de complications pariétales majeures rencontrées
au cours des ECUN multi-opérées chez le grand prématuré. Son utilisation nécessite la formation
du personnel chirurgical et paramédical et l’accès au matériel dédié.
P a g e | 17
Poster n°
RC 08
Journée de la Recherche Médicale 2013
Validation des critères RECIST chez des patients
porteurs d’un cancer bronchique traités par
chimiothérapie
(étude Pharmacogenoscan)
Toffart Anne-Claire, Moro-Sibilot Denis, Souquet Pierre-Jean, Merle Patrick, Brambilla
Elisabeth, Brambilla Christian, Timsit Jean-François
Toffart Anne-Claire. [email protected].
Equipe 11 Institut Albert Bonniot. Rond-point de la Chantourne. 38706 La Tronche
Université Grenoble 1 U 823-Institut A Bonniot-Université J Fourier
Rond-point de la Chantourne. 38706 La Tronche Cedex
Responsable du laboratoire : Pr Christian Brambilla
Intérêt et cadre de la recherche : Pour évaluer la réponse à la chimiothérapie chez les
patients porteurs d’une tumeur solide, les critères RECIST (Response Evaluation Criteria in
Solid Tumors) sont utilisés. La réponse tumorale est catégorisée en réponse complète (RC) ou
partielle (RP), stable ou progression. Une RC correspond à une disparition complète de la
tumeur après chimiothérapie, une RP à une diminution de la somme des plus grands
diamètres des cibles tumorales de plus de 30%, stable à un changement de ces dimensions
entre -30% et +20% et progression à une augmentation d’au moins 20%. Les changements
d’option de prise en charge d’un patient porteur d’un cancer sont guidés par ces catégories.
Cependant ces critères ont été établis de façon empirique et il est envisagé qu’une autre
méthode, en particulier l’évolution linéaire des mesures tumorales, prédise mieux la survie.
Objectif scientifique : Notre étude compare la corrélation entre les critères RECIST ou la
variation linéaire de la réponse tumorale et la survie.
Méthodes : L’étude « Pharmacogenoscan » a inclus des patients porteurs d’un cancer
bronchique non à petites cellules (CBNPC) de tout stade et naifs de chimiothérapie entre 2005
et 2010 dans 6 hôpitaux de la région Rhône-Alpes-Auvergne. La réponse de 493 patients a
été étudiée. Pour les comparaisons de survie, nous n’avons pas évalué les patients décédés
précocement ou avec l’apparition de nouvelles lésions lors de la 1ère évaluation. Nous avons
réalisé un modèle de Cox avec les critères RECIST et un deuxième avec la variation linéaire de
la mesure tumorale pour les 405 patients restants. Le meilleur modèle a été défini comme
celui minimisant le critère d’Akaike.
Résultats : Parmi les 493 patients, la médiane de survie était de 389 jours (IQ, 343-446
jours). Selon les critères RECIST, 147 (30%) patients présentaient une réponse complète ou
partielle, 245 (50%) une stabilité de la maladie et 101 (20%) une progression. Afin de
respecter l'hypothèse des risques proportionnels, les modèles de Cox ont été réalisés dans 2
périodes : avant et après 6 mois de suivi. Pour la mortalité précoce jusqu’à 6 mois et tardive
après 6 mois, les critères RECIST améliorait la vraisemblance du modèle par rapport à la
variation linéaire de la mesure tumorale, mais de façon non significative.
Conclusion : Dans cette grande cohorte observationnelle, la variation continue de la réponse
tumorale ne prédit pas mieux la survie que les critères RECIST chez les patients porteurs d’un
CBNPC traités par chimiothérapie. La question reste ouverte pour l’évaluation de l’efficacité
des thérapies ciblées.
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Poster n°
RC 09
Journée de la Recherche Médicale 2013
Caractéristiques et impact pronostique des
différents types d’immunodépression chez les
patients admis en réanimation pour sepsis
sévère ou choc septique
V Tolsma, C Schwebel, E Azoulay, M Darmon, B Souweine, A Vésin, D Goldgran-Toledano, M
Lugosi, S Jamali, C Cheval, C Adrie, H Kallel, A Descorps-Declere, M Garrouste-Orgeas, L
Bouadma , JF Timsit groupe de recherche OUTCOMEREA
Clinique de Réanimation Médicale, CHU A.Michallon, BP 217, 38043 GRENOBLE CEDEX 9
Equipe 11 - Epidémiologie clinique des cancers des voies aériennes et des patients de réanimation,
Institut Albert Bonniot, U823, 38706 LA TRONCHE CEDEX
Responsable : JF. Timsit
Intérêt et cadre de la recherche : le sepsis est un syndrome hétérogène et les facteurs
pronostiques sont souvent séparés selon le concept PIRO (Prédisposition, Infection, Réponse
inflammatoire,
dysfonction
d’Organes).
Parmi
les
facteurs
de
prédisposition,
l’immunodépression est une comorbidité fréquente mais pour laquelle les données actuelles
sont limitées. En particulier, l’existence d’un impact pronostique dépendant du type
d’immunodépression chez les patients de réanimation avec un sepsis n’est pas connue.
Objectif scientifique : décrire les patients préalablement immunodéprimés admis en
réanimation pour sepsis sévère ou choc septique (pathologies et/ou traitements responsables,
caractéristiques ayant un impact pronostique) puis les comparer aux patients sans
immunodépression et évaluer l’impact pronostique respectif de chaque type d’immunodépression.
Méthodes : étude observationnelle de cohorte à partir d’une base de données de haute qualité
prospective nationale multicentrique utilisant les données de 11 services de réanimation
recueillies entre Janvier 1997 à Août 2011. Tous les patients admis pour sepsis sévère ou choc
septique ont été inclus. Les dossiers des patients immunodéprimés ont été relus pour préciser
l’étiologie et classer les patients en 6 profils d’immunodépression. L’analyse pronostique a utilisé
un modèle à risques compétitifs (Fine et Gray) où la sortie vivant du service de réanimation ou
de l’hôpital avant J28 est un évènement en compétition avec la survenue du décès.
Résultats : parmi les 14419 patients, 1981 (13.7%) présentent un sepsis sévère ou un choc
septique à l’admission ; parmi lesquels 607 (31%) ont une immunodépression préalable. La
cause de l’immunodépression est : cancer solide 164 (27%), hémopathie maligne 280 (46
%), SIDA 68 (11%) ; greffe d’organes 57 (9%), pathologie inflammatoire sous corticoïdes
et/ou immunosuppresseurs 80 (13%), déficit primitif ou congénital 6(1%). Deux ou 3 causes
sont associées dans 10% des cas.
Les patients immunodéprimés sont plus jeunes (âge médian 60 vs 68 ans) et ont moins de
comorbidités autres (diabète, hépatopathies ou maladie cardiovasculaire). Ils font moins de choc
septique initial (50.4% vs 57.4, p < .01), ont moins de procédures invasives et leur durée de
séjour est plus courte (médiane à 5 jours contre 7, p < .01). Les immunodéprimés ont plus
souvent une septicémie, des sites multiples, et des pathogènes différents. Le nombre
d’antibiotique reçu à J1 est supérieur mais la proportion d’adéquation initiale est similaire (55 vs
56%). Le taux de décès à J28 est de 31.3% contre 28.8% chez l’immunocompétent. Après
ajustement, sur les autres composantes du PIRO, l’immunodépression est un facteur de risque
indépendant de décès à J28 (sHR à 1.37 [1.12-1.67]). Analysées en classes, l’oncologie solide
sans agranulocytose (sHR=1.8), l’hématologie non agranulocytaire (sHR=1.4), l’agranulocytose
(sHR 1.7) et le SIDA (sHR 1.9) sont indépendamment associés au pronostic. Par contre la greffe
d’organe solide et la pathologie inflammatoire ne sont pas des paramètres pronostiques.
Conclusions : l’immunodépression est fréquente chez les patients présentant un sepsis sévère ou
un choc septique. La moindre fréquence de choc septique et la durée de séjour en réanimation
plus courte pourraient résulter d’une prise en charge plus précoce. L’analyse de survie, qui prend
en compte un grand nombre de facteurs de confusion, montre que certains profils
d’immunodépression, outre l’agranulocytose déjà décrite, sont associés à une augmentation du
risque de décès.
P a g e | 19
Poster n°
RC 10
Journée de la Recherche Médicale 2013
Facteurs prédictifs des variations du flux
d’activité d’un centre 15 : est-il possible de
prévoir les pics d’activité ?
VIGLINO Damien
1, 2
, 7 rue Louise MICHEL 38400 St Martin d’Hères
[email protected]
VESIN A. 1, MORELLI X. 1, DANEL V. 2, CARPENTIER F. 2, TIMSIT JF. 1
1
2
Institut Albert Bonniot, unité INSERM/UJF n° 823, Rond-point de la Chantourne 38706
La Tronche Cedex Grenoble France
Pôle Urgences – Samu – SMUR du Centre Hospitalier Universitaire de Grenoble, France
Introduction
L’activité des centres 15 et du SAMU, comme celle des Urgences, se caractérise par de fortes
variations journalières et saisonnières pouvant paraître peu prévisibles. Pourtant de nombreux
facteurs sont connus, relevant de variations saisonnières, calendaires, météorologiques ou
épidémiologiques. La prise en compte de ces données pourrait permettre de faire face à
l’activité en modifiant l’organisation interne des services et ainsi d’améliorer la qualité des
soins.
Objectif
Identifier les facteurs prévisibles influençant l’activité du centre 15 de l’Isère, afin de construire un
modèle statistique capable de prédire au mieux le niveau d’activité journalier du centre.
Méthodes
Les dossiers de régulation médicale (DRM) traités par le Samu 38 de 2005 à 2011 ont été
analysés en termes de nombre total de DRM par jour et de nombre d’intervention SMUR
(service mobile d’urgence et de réanimation) ou VSAB (véhicule de secours aux asphyxiés et
blessés) par jour. Chaque DRM correspondait à un appelant unique mais pouvait comporter
plusieurs appels successifs au centre 15 et plusieurs régulations. Un modèle linéaire additif
prenant en compte la saisonnalité de l’activité, les périodicités attribuables aux jours de la
semaine, aux vacances, aux jours fériés, le niveau d’épidémie grippale et les facteurs
météorologiques ont permis d’estimer le nombre de DRM supplémentaire attribuables à
chacun de ces facteurs.
Résultats
Le nombre moyen de DRM par jour sur la période était de 507 ±171 (min=286, max=1251),
le nombre moyen d’interventions par jour de 123±20 (min=64, max=195). Après prise en
compte des autres variables, les dimanche et lundi sont les jours à plus forte activité avec
respectivement +251±4.4 DRM attribuables (p<.0001) et +354±4.4 (p<.0001). De même
pour les jours fériés, avec +282±7.0 DRM (p<.0001). Les jours de vacances scolaires de Noël
(+128±5.6 p<.0001), de printemps (-21±5.7 p=.0002) et d’été (-10±3.3 p=0.0015) étaient
également significativement associées à des modifications de l’activité de régulation. Le taux
d’incidence régional des cas de grippe était quant-à lui lié à une augmentation de 11±0.5
dossiers par jour pour chaque augmentation de 100cas/100 000 habitants (p<.0001). Le
nombre d’interventions est lui significativement influencé par le taux d’incidence de la grippe,
le jour de la semaine et les vacances d’été et de printemps.
Conclusion
Ces données confirment la grande variabilité du nombre de dossiers traités par les centres 15
et d’interventions d’équipes sanitaires, et que des facteurs explicatifs facilement accessibles
expliquent une grande part de cette variabilité.
Perspectives
La construction d’un modèle prédictif prenant en compte ces variables et la saisonnalité
observée de l’activité devrait permettre la prévision à moyen terme des pics d’activité
nécessitant une organisation particulière.
P a g e | 20
Journée de la Recherche Médicale 2013
Recherche Fondamentale (RF 01 à RF 10) P a g e | 21
Poster n°
RF 01
Journée de la Recherche Médicale 2013
L’effet de la phospholipase A2 murine de groupe
X sur la fécondation in vitro ne dépend pas du
taux de réaction acrosomique.
Roland Abi Nahed1, Jessica Escoffier1, Léa. Munch1, Mouhamad Ali Makieh1, Sylviane
Hennebicq1, Pierre Ray1 et Christophe Arnoult1
1
Equipe "Génétique, Infertilité et Thérapeutique", Laboratoire AGIM, CNRS FRE3405,
Université Joseph Fourier, Grenoble, FRANCE
* Contact : [email protected]
Introduction
La composition de la membrane plasmique des spermatozoïdes change profondément au
cours de leur maturation. Plusieurs familles d'enzymes lipolytiques sont concernées par le
remodelage lipidique. Parmi ces enzymes, les phospholipases A2 (PLA2) sont abondamment
exprimées dans les organes reproducteurs mâles, le sperme éjaculé et dans le tractus génital
femelle et jouent des rôles importants dans la capacitation, la réaction acrosomique (RA) et la
fécondation. Nous avons montré au laboratoire que la PLA2 secrétée de groupe X (mGX) est
présente dans l’acrosome de souris, est relâchée au cours de la RA et est un inducteur de la
RA. De plus, au cours d’une fécondation in vitro (FIV), nous avons montré que le traitement
des spermatozoïdes par l’enzyme recombinante mGX améliore le taux d’embryons obtenus à
24 heures. Les mécanismes moléculaires impliqués restent cependant inconnus. Cet effet
pourrait être lié à l’augmentation importante des spermatozoïdes ayant réalisé leur RA après
le traitement par mGX. Afin d'évaluer le rôle de la RA sur l’effet de mGX dans la FIV, nous
avons déterminé l’efficacité sur la RA de différentes de sPLA2 humaines et murines, puis
comparé le taux d’embryons murins à 24 h obtenus avec des spermatozoïdes traités avec
différentes sPLA2.
Matériels et Méthodes
Les spermatozoïdes humains, sélectionnés sur gradient de densité, capacités 5 h en présence
de BSA, sont incubés 10 min en présence ou en absence de sPLA2. La RA est analysée après
marquage avec une léctine couplée a un marqueur FITC (Pisum sativum agglutinineFITC). Modèle murin : Les spermatozoïdes de souris, obtenus par dilacération de l’épididyme
sont capacités en présence de BSA. Ils sont ensuite incubés en présence ou en absence de
sPLA2 durant 10 minutes. La RA est analysée par coloration au bleu de Coomassie. L’efficacité
des sPLA2 sur la FIV est évaluée en déterminant le taux d’embryons clivés à 24 h.
Résultats
L’effet des phospholipases A2 humaines et murines sur la RA des spermatozoïdes : l’éfficacité
des sPLA2 à induire la RA sur les spermatozoïdes humains est par ordre décroissant hGV>
hGX> hGIIF> hGIB. hGIIA, hGIIE, hGIID et hGIII n’ont aucun effet. Sur les spermatozoïdes
murins, les sPLA2 hGV, hGX et mGIIA ont une efficacité similaire. Par contre mGIID est
inactive.
L’effet des phospholipases A2 humaines et de souris sur la FIV des souris : Aucune des sPLA2
testées (hGV, hGX, mGIIA, mGIID) ne mime l’effet positif de la mGX.
Conclusion
l’efficacité de la phospholipases A2 murine de groupe X n’est pas dépendante du taux de RA
mais d’un remodelage lipidique spécifique qui a lieu au cours de la capacitation.
P a g e | 23
Poster n°
RF 02
Journée de la Recherche Médicale 2013
Une réaction inflammatoire exubérante est
responsable de l’arthrite réactionnelle à
Chlamydia muridarum chez la souris SKG :
Rôle du contrôle de la charge bactérienne et des
lymphocytes T régulateurs dans un modèle
murin du syndrome de Reiter
Athan Baillet1, Linda Rehaume1, Helen Benham1, Connor O’Meara², Charles Armitage², Marina Harvie²,
Jared Velasco1, Kenneth Beagley², Ranjeny Thomas1
1 The University of Queensland Diamantina Institute, Brisbane, QLD
2 Institute of Health & Biomedical Innovation, Biomedical Sciences, Faculty of Health,
Queensland University of Technology, Brisbane, QLD
Introduction : L'arthrite réactionelle est une forme de spondylarthropathie déclenchée par des
infections gastro-intestinales ou génito-urinaires, principalement par Salmonella typhimurium et
Chlamydia trachomatis, chez les personnes génétiquement prédisposées. Bien que plusieurs
études suggèrent la persistance de Chlamydia dans le tissu synovial des patients au stade
chronique de l’arthrite réactionnelle, il était admis que la maladie procède d’une réaction autoimmune par mimétisme moléculaire entre antigènes bactériens et du soi. Les progrès dans la
connaissance éthiopathogénique de la maladie ont été limités par l’absence de modèles animaux.
Objectif: Nous avons étudié si une infection génitale par Chlamydia muridarum, homologue
murin de Chlamydia trachomatis, déclenchait l'arthrite réactionnelle chez les souris BALB/c
porteuse de la mutation ZAP-70W163C (connues sous le nom SKG), qui développent une
spondylarthropathie après injection de bêta-glucan microbiens.
Méthodes: Des souris SKG et BALB/c ont été infectées par voie génitale par Chlamydia
muridarum. L’apparition de conjonctivite et d’arthrite a été évaluée chaque semaine pendant
12 semaines. La charge bactérienne génitale, l’inflammation articulaire et cutanée ainsi que la
production cytoquinique en réponse à la stimulation de splénocyte par MOMP (antigène de
Chlamydia muridarum) ont été quantifiés. Le rôle des lymphocytes T régulateurs (Tregs) a été
étudié après déplétion des Treg chez les souris infectées. La présence de l’ADN bactérien de
Chlamydia muridarum (ompA) a été quantifiée par PCR dans les cellules myéloïdes. Des tests
non paramétriques ont été utilisés pour l’analyse statistique.
Résultats: Après infection génitale par Chlamydia muridarum, les souris SKG ont développé une
polyarthrite asymétrique, avec enthésite, synovite, sacro-iliite et une inflammation cutanée alors que
les souris BALB/c étaient épargnées. Certaines souris SKG présentaient également une conjonctivite
et une uvéite. Chez les souris SKG, la production par les splénocytes d’IFN-γ et d'IL-17A étaient
effondrées alors que la production de TNFα était augmentée par rapport aux souris BALB/c. La
synthèse d’IL-6 était augmentée de façon significative dans les explants cutanés et articulaires de
souris SKG rapport aux souris BALB/c. De même, on notait, pour un même inoculum, une charge
bactérienne dans le tractus génital plus importante chez les souris SKG que chez les BALB/c.
L’inactivation de la bactérie in vitro par UV ou in vivo par antibiotiques (rifampicine+doxycycline)
empêchait l’apparition des symptômes. Chez les souris SKG, la déplétion des Treg majorait l’intensité
des symptômes et augmentait la production d’ l'IFN-γ, de TNFα et d'IL-6 par les splénocytes en
réponse à une stimulation par l’antigène MOMP. L’ADN génomique de Chlamydia muridarum était
détecté dans les cellules myéloïdes des ganglions lombaires drainant le tractus génital et de la rate
des souris infectées. Aucun auto-anticorps n'a pas été détecté chez les souris.
Conclusions: La mutation ZAP-70W163C prédispose les souris SKG à l'arthrite réactionnelle après
l'infection génitale par Chlamydia muridarum. Chez les souris SKG, le déséquilibre de la
production cytokinique altère le contrôle de la charge bactérienne, facilite la persistance dans les
cellules myéloïdes et la dissémination systémique de Chlamydia muridarum. Ainsi l’arthrite
réactionnelle à Chlamydia muridarum chez les souris SKG résulte d’une réponse inflammatoire
exubérante où les Tregs jouent un rôle fondamental, plutôt que d’une réaction auto-immune.
P a g e | 24
Poster n°
RF 03
Journée de la Recherche Médicale 2013
Unraveling secrets of the epigenome using mass
spectrometry and structural biology
Elisabetta Boeri Erba1, Simon Trowitzsch2, Imre Berger2
1) Institute of Structural Biology "J.P.Ebel, 41 rue Jules Horowitz, 38027 Grenoble
2) EMBL, 6 rue Jules Horowitz, 38042 Grenoble
Mass spectrometry (MS) has revolutionised the way of studying and analysing proteins in
clinical and research laboratories. It is an analytical tool important to characterise the
biochemical basis of diseases, to improve diagnostic approaches for an early-stage detection
of disease, to monitor the outcome of medical treatments and to control the quality of biologic
medical products (i.e. biosimilars). A novel MS (native MS) was developed for investigating
intact non-covalent protein complexes and become a remarkable tool in structural biology. By
native MS, the mass of intact protein assemblies, their stoichiometry, interactions between
subunits, the position of subunits within subcomplexes (core and peripheral subunits) and the
pathway of assembly can be determined. Overall, native MS is gaining more relevance for
studying the structure of protein complexes.
Epigenetics investigates genome modifications, which are functionally relevant, but do not
alter DNA sequences. Different epigenetic modifications (e.g. histone modifications) control
gene activities, tuning important cellular processes such as DNA replication. Moreover, altered
patterns of histone modifications are associated with a wide range of human malignancies.
We study the human Spt–Ada–Gcn5–acetyltransferase (SAGA), a histone-modifying complex
involved in several events related to gene transcription. It is formed by 18 distinct subunits,
whose total mass is at least of 1.2 MDa. It acetylates and deubiquitinates histone residues,
thereby introducing modifications that are essential for a regulated gene expression. The
SAGA complex plays crucial roles not only in the control of histone function, but also in
transcriptional activation, transcriptional elongation, and mRNA export. Furthermore,
malfunction and mutations of SAGA subunits are associated with a neurodegenerative disease
(spinocerebellar ataxia type 7) and cancer. Altered function and expression of human SAGA
subunits have been observed in colorectal, breast, ovarian, bladder and lung cancer. Despite
the importance of this multifunctional nanomachine, its structure and function are only poorly
understood. Using native MS we investigate the human SAGA complex to obtain a complete
two-dimensional map of its inter-subunit interactions. This will enable us to gain novel insights
into the function of human SAGA complex in normal cells and in diseases.
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Poster n°
RF 04
Journée de la Recherche Médicale 2013
VEGF165b : un marqueur de réponse
aux thérapies anti-angiogéniques dans
les cancers du poumon ?
BOUDRIA Asma (1), GOUT Stéphanie (1), KERAMIDAS Michelle (2), BRAMBILLA Elisabeth
(1), COLL Jean-Luc (2), GAZZERI Sylvie (1), EYMIN Béatrice (1)
(1) CRI INSERM/UJF U823, Equipe 2, Bases Moléculaires de la Progression des Cancers du
Poumon, Pr Elisabeth Brambilla, Institut Albert Bonniot, La Tronche.
[email protected]
(2) Equipe 5, Institut Albert Bonniot, La Tronche.
Le VEGF-A est l’un des facteurs de croissance les plus importants au cours de la néo-angiogénèse
tumorale. Différents médicaments l’inhibant (Bevacizumab) ou inhibant ses voies de signalisation
(inhibiteurs VEGFR2) sont actuellement utilisés en clinique humaine, notamment dans les
adénocarcinomes pulmonaires. Cependant, un grand nombre de patients apparaissent d’emblée
résistants ou échappent à ces thérapies, voir même développent des tumeurs plus agressives. A
ce jour, il n’existe aucun moyen d’identifier les patients susceptibles de répondre à ces thérapies.
Il est connu depuis longtemps que l’épissage alternatif du pré-ARNm du VEGF-A donne naissance
à de multiples isoformes protéiques dénommées VEGFxxx, telles que VEGF121, VEGF165 et VEGF189.
En 2002, de nouveaux variants issus d’un épissage alternatif différentiel au niveau du dernier
exon ont été identifiés, les isoformes VEGFxxxb. A l’inverse des VEGFxxx, ces variants sont antiangiogéniques. Si les effets paracrines des isoformes du VEGF-A sur les cellules endothéliales ont
été bien caractérisés, bien peu d’études se sont penchées sur leurs effets autocrines sur les
cellules tumorales qui expriment à leur surface les récepteurs VEGFR1 et VEGFR2. De la même
façon, bien peu d’études se sont intéressées à l’effet potentiel des thérapies ciblant le VEGF-A sur
les cellules tumorales. Dans ce contexte, nous avons émis l’hypothèse que la balance d’expression
des isoformes VEGFxxxb/VEGFxxx pourrait être modulée par certaines thérapies anti-angiogéniques
et participer à l’échappement des tumeurs pulmonaires à ces thérapies. Nous montrons que le
traitement de cellules dérivées d’adénocarcinomes pulmonaires humains par des agents
thérapeutiques ciblant la voie VEGF/VEGFR (Bevacizumab, SU5416), en combinaison ou non avec
les sels de platine qui leur sont associés dans les protocoles cliniques, augmente l’expression des
isoformes VEGFxxxb au détriment des isoformes VEGFxxx. De plus, nous montrons que le
traitement de ces cellules par Bevacizumab stimule leur prolifération et leur confère un phénotype
plus invasif, plus migratoire, qui corrèle avec l’acquisition de certains marqueurs de transition
épithélio-mésenchymateuse (EMT) et la sécrétion de métalloprotéases (MMPs). Contrairement au
dogme, et à l’inverse des cellules endothéliales, le traitement par Bevacizumab active la
phosphorylation des récepteurs VEGFR1/VEGFR2 et la voie de signalisation p38-MAPK dans les
cellules tumorales. De façon importante, la neutralisation spécifique par ARN interférence de
l’isoforme VEGF165b dans les cellules traitées prévient ce phénotype. En accord avec ces résultats,
les cellules surexprimant l’isoforme VEGF165b acquièrent des capacités accrues de migration et
d’invasion comparativement aux cellules contrôle, sécrètent plus de MMPs active et sont plus
résistantes à l’apoptose induite par les sels de platine. De plus, in vivo, les xénogreffes dérivées
de ces cellules et implantées en sous-cutané chez la souris nude croissent plus vite que les
tumeurs contrôle. Finalement, nous décrivons in situ dans une série de 80 carcinomes
pulmonaires non à petites cellules un profil d’expression différentiel de l’isoforme VEGF165b et
l’existence de corrélation entre de hauts niveaux de VEGF165b, des hauts niveaux de VEGFR1 et PVEGFR1, et l’envahissement ganglionnaire (Boudria et al., en préparation). En conclusion, nos
résultats démontrent un rôle de l’isoforme VEGF165b dans le contrôle d’une boucle autocrine
invasive régulée par les thérapies anti-angiogéniques. Ils suggèrent un mécanisme par lequel
Bevacizumab, utilisé ou non en association avec les sels de platine, pourrait favoriser l’émergence
de cellules plus agressives dans les adénocarcinomes pulmonaires. Ils suggèrent aussi que les
patients présentant de hauts niveaux de VEGF165b pourraient être ceux échappant au
Bevacizumab comme récemment suggéré dans les carcinomes prostatiques métastatiques.
P a g e | 26
Poster n°
RF 05
Journée de la Recherche Médicale 2013
Le rôle des dérivés du tryptophane dans le
dialogue inter-règne entre Pseudomonas
aeruginosa et les cellules de l’immunité. A la
recherche d’une nouvelle cible thérapeutique.
GENESTET Charlotte, Le Gouellec Audrey, Guery Benoit,
*Toussaint Bertrand, *Stasia M José
* co-auteurs
8 rue Georges Prieto, 38400 Saint Martin d’Hères
[email protected]
Equipe TheREx, Laboratoire TIMC-IMAG, UMR 5525 CNRS
Responsable du laboratoire : Philippe Cinquin
Centre Hospitalier Universitaire de Grenoble
BP 217, 38043 Grenoble CEDEX 9
Introduction : Pseudomonas aeruginosa est responsable d’infections persistantes chez les
patients atteints de mucoviscidose, suggérant une capacité à mettre en échec les défenses
immunitaires innées. Cette bactérie utilise la voie des kynurénines pour cataboliser le
tryptophane. Les cellules de l’hôte produisent également de la kynurénine, qui est connue pour
contrôler l’homéostasie du système immunitaire. De plus, des résultats préliminaires de notre
équipe ont montré que lors d’une infection pulmonaire aigue chez la souris par une souche de P.
aeruginosa ne produisant pas de kynurénine, il y a une perte de virulence (diminution de la
mortalité des souris et de la charge bactérienne pulmonaire). Le but de notre travail est donc
d’étudier le rôle du métabolisme de la kynurénine durant l’interaction entre P. aeruginosa et les
cellules de système immunitaire, en particulier les neutrophiles.
Méthodes : Pour confirmer l’intérêt d’étudier la voie des kynurénines chez P. aeruginosa, la
production de kynurénine dans le surnageant par des isolats cliniques issus de patients atteints de
mucoviscidose a été mesurée grâce au réactif de Kovac. L’activité transcriptionnelle de kynA (le
premier gène impliqué dans la voie de synthèse des kynurénines) chez P. aeruginosa a été
mesurée, via une fusion transcriptionnelle entre le promoteur de kynA et un gène rapporteur,
durant l’interaction avec différents types cellulaires de l’immunité. L’effet de la kynurénine sur
l’activité bactéricide des neutrophiles humains a été étudié durant le contact avec P. aeruginosa
en suivant la survie des bactéries par étalement sur gélose sélective. L’impact de la kynurénine
sur la production de ROS (reactive oxygen species) par les neutrophiles humains durant un
contact avec P. aeruginosa ou après stimulation au zymosan opsonisé ou au PMA, a été évalué
par chimiluminescence. Pour finir, la protéine recombinante KynA a été produite et son activité
enzymatique a été caractérisée.
Résultats : La majorité des souches de P. aeruginosa issues de patients atteints de
mucoviscidose produisent des taux élevés de kynurénine. La voie des kynurénines est activée (au
niveau transcriptionnel) lors du contact avec les cellules de l’immunité, et en particulier avec les
neutrophiles. La kynurénine inhibe l’activité bactéricide des neutrophiles humains via l’inhibition
de la production de ROS. De plus, la production de ROS par des neutrophiles humains stimulés
par le PMA et le zymosan opsonisé est inhibée en présence d’une quantité croissante de
kynurénine. Finalement nous avons démontré que KynA est une enzyme allostérique, indiquant
une possible régulation au niveau enzymatique de la voie des kynurénines.
En conclusion La voie des kynurénines semble être impliquée dans les mécanismes de virulence
de P. aeruginosa durant le contact avec les cellules de l’immunité innée et plus particulièrement
avec les neutrophiles. L’enzyme recombinante KynA purifiée est un nouvel outil qui pourrait
permettre de cribler des inhibiteurs spécifiques. La voie des kynurénines de P. aeruginosa pourrait
donc être une nouvelle cible thérapeutique potentielle.
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Poster n°
RF 06
Journée de la Recherche Médicale 2013
Etude du rôle joué par la porine Omp-Pst1 dans
le phénotype de résistance aux antibiotiques de
Providencia stuartii.
Nasrallah C1., Tran Q.T.2,3, Martel A1., Bolla J.M2., Flayhan A1., Lethier M1., Vivaudou M1.,
Weik M1., Winterhalter M3., Pagès J.M.2 & Colletier J.P1
1 Institut de Biologie Structurale UMR 5075 CEA-CNRS-UJF, Grenoble, France
2 Jacobs University of Bremen, Brèmes, Allemagne
3 UMR-MD1, Université de la méditerranée, Marseille,France
Les porines sont des protéines « canal » dont le rôle est de permettre l’influx d’ions et
nutriments au sein des bactéries Gram-négatives. Elles sont également la voie d’entrée des
antibiotiques hydrophiles, en particulier les beta-lactames1. Au cours de la dernière décade,
des modifications dans la séquence des porines ou dans leur niveau d’expression ont été
observées dans de nombreux cas d’infections bactériennes multi-résistantes2, motivant
l’étude des relations structure-fonction au sein de ces protéines. Une meilleure
compréhension de cet aspect de la résistance est en effet capitale puisque lui seul rend
viable, chez les bactéries Gram-négative, les mécanismes de résistance basés sur l’efflux.
Au sein de notre laboratoire, nous avons choisi de nous focaliser sur Omp-Pst1, la porine
majoritaire exprimée par Providencia stuartii. Ce pathogène opportuniste, impliqué dans des
infections endémiques à morbidité élevée dans les centres de soins intensifs, est en effet
l’espèce la plus intrinsèquement résistante de la famille des Entérobactéries. Afin de
comprendre l’adaptation phénotypique de cette protéine in situ,3 nos travaux se sont portés
non seulement sur la souche de référence (ATCC) mais également sur deux isolats cliniques,
« 99645 » et « NEA16 ».
Ainsi, nous avons résolu les structures cristallographiques d’Omp-Pst1-ATCC, Omp-Pst199645 et Omp-Pst1-NEA16 à 2.7, 4.5 et 5 Å de résolution, respectivement. Ces structures
illustrent un consensus dans l’adaptation des porines in situ, lequel repose sur l’accumulation
de résidus chargés positivement dans les boucles extracellulaires et dans le canal. La
première résulte en une interaction plus forte avec les lipopolysaccharides de la membrane
externe, qui pourrait avoir vocation à camoufler la protéine dans la membrane. La seconde
accentue le caractère anion sélectif du canal.
Cette dernière observation est intéressante, puisque les isolats cliniques présentent une
résistance augmentée pour tous les antibiotiques que nous avons testé (concentrations
inhibitrices minimales « MIC » 10 à 10000 fois plus élevées), excepté ceux chargés
positivement. Des mesures de conductance à l’échelle de la protéine unique montrent, par
ailleurs, une diffusion ralentie des antibiotiques au travers des variantes d’Omp-Pst1 issues
des isolats cliniques. L’augmentation de la constante d’association (Kon) pour les antibiotiques
chargés négativement, et la diminution de celle pour les antibiotiques chargés positivement
suggèrent, par ailleurs, que l’augmentation de l’affinité d’un antibiotique pour la porine
ralentit la diffusion en son sein.
Nos résultats démontrent donc de la molécule unique au cristal, et de l’atome à la cellule, le
rôle critique joué par les porines dans les phénotypes de résistance aux antibiotiques4.
Références :
1- Nikaido, H. Microbiol Mol Biol Rev 2003, 67,593-656
2- Pages JM, James CE, Winterhalter M. Nature Reviews Microbiology 2008, 6, 893.
3- Tran, Q, Hajjar E, Winterhalter M, Pages JM. J. Biol. Chem. 2010, 285, 32273-32281.
4- Nasrallah, Tran, Bolla, Flayhan, Lethier, Weik, Winterhalter, Pagès, Colletier (manuscrit en
préparation)
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Poster n°
RF 07
Journée de la Recherche Médicale 2013
Couplage de la NADPH oxydase et de la
glycolyse dans les neutrophiles activés
Rôle de la phosphofructokinase-2
Athan Baillet1, Marc-André Hograindleur1, Jamel El Benna2, Alexei Grichine3, Sylvie
Berthier 1,, Françoise Morel 1 et Marie-Hélène Paclet 1,4
1
GREPI - AGIM FRE3405 CNRS / Université Joseph Fourier / EPHE, Grenoble, France.
2
INSERM, U773, Centre de Recherche Biomédicale Bichat Beaujon CRB3, Université Paris 7
site Bichat, UMRS 773, Paris, France.
3
Platform ‘Optical microscopy – cell imaging’ – UJF, Inserm U823, Institut Albert Bonniot, La
Tronche, France.
4
Lab. Biochimie des Enzymes et Protéines, C.H.U. Grenoble, Grenoble, France.
La NADPH oxydase phagocytaire (complexe Nox2) est un complexe enzymatique dont
l’activité est induite par la translocation de facteurs cytosoliques régulateurs sur le cytochrome
b558, le centre catalytique membranaire de l’enzyme. Dans un précédent travail, le complexe
Nox2 a été isolé à partir de neutrophiles humains sous une forme constitutivement active a.
L’analyse protéomique de ce complexe par spectrométrie de masse MALDI-TOF a mis en
évidence la présence de de la phosphofructokinase-2 (PFK-2), une enzyme catalysant la
formation du fructose-2,6 diphosphate (F-2,6-diP), l’activateur allostérique de la
phosphofructokinase-1, l’enzyme limitante de la glycolyse.
Ce travail avait pour objectif de déterminer la spécificité d’interaction de la PFK-2 avec le
complexe Nox2 et le cas échéant, de comprendre le rôle de la PFK-2 dans la régulation de
l’activité de la NADPH oxydase phagocytaire.
Dans cette étude, nous montrons que c’est la forme phosphorylée de la PFK-2 (la forme
active) qui est associée au complexe NADPH oxydase des neutrophiles. En particulier, la PFK-2
active est associée aux facteurs cytosoliques de l’oxydase spécifiquement dans le cytosol de
neutrophiles activés. La déplétion en PFK-2 de cellules PLB985 (préalablement différenciées en
pseudo-neutrophiles) de même que l’inhibition pharmacologique de son activation conduisent
à une diminution significative de l’activité NADPH oxydase des cellules suggérant un rôle de la
PFK-2 dans la régulation de l’activité NADPH oxydase. Des expériences de microscopie
confocale montrent une colocalisation stimulation-dépendante de la PFK-2 avec le cytochrome
b558 et les rafts lipidiques. Sur le plan énergétique, la déplétion en PFK-2 active conduit à une
diminution de l’activité de la PFK-1, l’enzyme limitante de la glycolyse et en parallèle à une
diminution d’ATP, le produit de la glycolyse.
Tous ces résultats convergent et suggèrent qu’en réponse à un stimulus inflammatoire, la
PFK-2, une enzyme régulant le métabolisme énergétique, est relocalisée à proximité du
complexe NADPH oxydase activé. L’hypothèse proposée est une micro-compartimentation,
dans le neutrophile activé, des enzymes du métabolisme énergétique et de la NADPH
oxydase. Ceci se traduirait par un apport énergétique localement élevée.
Cette association PFK-2 / NADPH oxydase retrouvée exclusivement dans les neutrophiles
apporterait un niveau de contrôle supplémentaire dans l’activation de l’enzyme et optimiserait
la production d’ion superoxyde en réponse à une stimulation.
a
Paclet MH, Berthier S, Kuhn L, Garin J, Morel F. Regulation of phagocyte NADPH oxidase
activity: identification of two cytochrome b558 activation states. Faseb J 2007;21:1244-55.
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Poster n°
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Cellular iron homeostasis in leukemia:
experimental and modeling approaches
Emmanuel Pourcelot
1,3
, Nicolas Mobilia 3, Alexandre Donzé 4,5, Fiona Louis 2, Oded Maler 5,
Pascal Mossuz 1,3, Eric Fanchon 3, Jean-Marc Moulis 2.
21, chemin des sources- 38240 Meylan – [email protected]
Laboratoire Techniques de l’Ingénierie Médicale et de la Complexité, Equipe TheREx, UMR
5525, CNRS-UJF. Faculté de Médecine, 38706 La Tronche cedex – France
Responsable :Pr Philippe Cinquin
Use of iron resources and variations of the redox balance are processes involved in cell
proliferation and differentiation. They participate to normal hematopoiesis and their
disturbance may have an oncogenic role. Hematological neoplasia, such as acute myeloid
leukemia (AML), provide clinical evidence of the link between iron regulation, handling of
redox active components, and malignancy. Yet, the properties favoring proliferation of
leukemic clones detrimental to differentiation remain unclear. Iron and redox homeostasis are
grounded in a series of molecular events belonging to several metabolic and regulatory
networks. Our project aims at describing the functional differences between normal and
pathological hematopoiesis by analyzing experimental data from leukemic cells with
innovative modeling tools.
The core network of cellular iron regulation in mammals, organized around the Iron
Regulatory Proteins (IRP), has been represented in a simplified generic theoretical model with
five species (IRP, transferrin receptor, ferritin, ferroportin, and available ‘labile’ iron). The
evolution over time of these species has been described by ordinary differential equations and
the behavior of the biological system in hematopoietic precursors has been formalized in the
Signal Temporal Logic using the software Breach [1]. Sets of consistent parameters were first
estimated for the iron-replete situation corresponding to proliferating cells. The dynamic
response to iron deprivation, which was previously shown to contribute to differentiation in
some types of AML, was then monitored, and the relevant parameter region was determined.
The salient features and new properties of hematopoietic precursors were evidenced, as well
as identification of critical parameters [2]. Some of these important parameters, such as the
iron threshold above which the IRP regulators loose function, have been experimentally
measured in leukemic cell lines (KG1 and K562).
These data bear clinical relevance for patients supplemented with iron, or those under
chelation therapy. They are also used to further implement the theoretical model of cellular
iron homeostasis in order to improve its explicative and predictive power, and to unravel the
details of its dynamic interactions with other redox-dependent regulatory networks.
[1] Donzé, A., Fanchon, E., Gattepaille, L. M., Maler, O. and Tracqui, P. (2011) PLoS One 6,
e24246.
[2] Mobilia, N., Donzé, A., Moulis, J.-M. and Fanchon, E. (2012) Electronic Proceedings in
Theoretical Computer Science 92, 42-57.
http://rvg.web.cse.unsw.edu.au/eptcs/paper.cgi?HSB2012.4
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Poster n°
RF 09
Journée de la Recherche Médicale 2013
Ingénierie moléculaire d’un Facteur Xa activé
pour le traitement de l’hémophilie
THOMAS A, MARLU R, POLACK B, et DAGHER MC Email : [email protected]
Laboratoire TIMC-IMAG, Equipe TheREx, Bâtiment Jean Roget, Domaine de la Merci, 38700 LA TRONCHE
THOMAS A Email : [email protected]
CERMAV - CNRS UPR 5301, Domaine Universitaire de Grenoble-St Martin d'Hères, 38041 Grenoble cedex
Intérêt et cadre de la recherche
L’hémophilie est une maladie hémorragique due à l’absence de Facteur VIII ou de Facteur IX,
ce qui limite la génération du Facteur Xa, une protéase impliquée dans la production de
thrombine qui transforme à son tour le fibrinogène en fibrine pour former le caillot. Comptetenu de la nécessité de nouvelles approches, nous avons ciblé le TFPI (Tissue Factor Pathway
Inhibitor). Il s’agit d’utiliser une forme tronquée du Facteur Xa, GD-Xa, qui a perdu la
possibilité de se lier aux membranes, pour piéger le TFPI et lever l’inhibition du complexe
impliquant le Facteur Xa actif, puis d’améliorer l’interaction entre GD-Xa et TFPI.
Méthodologie
1-La modélisation moléculaire à partir des coordonnées cristallographiques d’un complexe
Facteur Xa/TFPI pour prédire des mutations augmentant l’affinité des deux protéines.
2-La réalisation de constructions pour permettre l’expression de formes tronquées avec
différents tags et différents systèmes d’expression, ainsi que des mutants prédits.
3-L’expression et la purification de ces protéines
4-Les tests fonctionnels enzymatiques de protéolyse d’un substrat chromogénique, et de
restauration de la génération de thrombine sur un plasma d’hémophile A sévère
5-Les tests d’interaction entre GD-Xa sauvage et muté avec le TFPI par méthode enzymatique
et étude directe de la liaison.
Résultats
Après création d’un modèle cristallographique du Facteur Xa avec le domaine Kunitz 2 du
TFPI, une étude de minimisation d’énergie a permis de mettre en évidence des résidus dont la
mutation est susceptible d’améliorer l’interaction entre les deux protéines. La modélisation de
deux mutants a permis de confirmer l’effet prévu.
Le TFPI a été produit à partir d’un gène optimisé, dans le système baculovirus-cellules
d’insectes. Il est fonctionnel et inhibe l’activité du Facteur Xa dix fois mieux que le TFPI du
commerce.
Les formes tronquées et mutées de facteur Xa ont été produites dans le surnageant des
cellules d’insectes. Elles ne sont que partiellement activées par excision d’un domaine dit
peptide d’activation par les protéases cellulaires. Une expression dans la bactérie E. coli a
également été réalisée.
Les protéines semi-purifiées sont capables de restaurer la génération de thrombine d’un
plasma d’hémophile A sévère.
Les mutants prédits sur deux acides aminés ont une génération de thrombine sensiblement
augmentée par rapport à la protéine native.
Les résultats de l’interaction entre les différentes formes mutées et le TFPI seront présentés.
Conclusions et perspectives
La possibilité de produire une nouvelle protéine médicament, le GD-Xa sous forme recombinante
dans divers systèmes d’expression a été démontrée. Cette protéine est fonctionnelle et capable
d’interagir avec le TFPI et de restaurer la génération de thrombine d’un plasma d’hémophile A
sévère. Notre étude montre l’intérêt de la modélisation moléculaire pour prédire des mutations qui
favorisent une interaction. La perspective immédiate est le test de ces mutants in vivo sur des
souris hémophiles.
Bibliographie
Marlu R, Polack B. Gla-domainless factor Xa: molecular bait to bypass a blocked tenase
complex. Haematologica. 2012;97(8):1165-72.
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Poster n°
RF 10
Journée de la Recherche Médicale 2013
Docosahexaenoic acid supplementation in
Apolipoprotein-E deficient mice exposed
to intermittent hypoxia:
effect on atherogenesis prevention
Laetitia Van Noolen 1, 2, 4, Magnus Bäck 3, Claire Arnaud 1, Amandine Rey 2, Marcello H.
Petrii 3, Patrick Levy 1,4, Patrice Faure 1, 2, 4, Françoise Stanke-Labesque 1, 2, 4
1
Laboratoire HP2, INSERM, U1042, UJF, Grenoble, F-38042 France
CHU, Hôpital A. Michalon, Département de Biochimie, Toxicologie et Pharmacologie, BP217,
Grenoble, F-38043 France
3
Department of Medicine, Karolinska Institute and University Hospital, CMM L8 :03, 17176
Stockholm, Sweden
4
Université Grenoble 1, Faculté de Médecine et Pharmacie, UFR1, Grenoble, F-38042 France
2
Mail : [email protected]
Aim
Obstructive sleep apnea is characterized by recurrent episodes of nocturnal intermittent
hypoxia. In Apolipoprotein-E deficient (ApoE -/-) mice, chronic intermittent hypoxia (CIH)
enhanced atherosclerosis progression through an inflammatory pathway1. Docosahexaenoic
acid (DHA), an ω-3 polyinsatured fatty acid, displays anti-inflammatory properties that may
prevent atherosclerosis progression2. The aim of this study was to assess the influence of oral
DHA supplementation on atherosclerosis progression in ApoE -/- mice exposed to CIH, and to
study the underlying mechanisms.
Method
42 ApoE -/- mice were exposed to CIH (21–5% FiO2, 60s cycle, 8h/day) or normoxia (N) for 8
weeks. Mice were randomized to four groups (CIH + DHA (0.5% of food), N+DHA, CIH
control, N control). Atherosclerosis was quantified on aortic roots by Oil-Red-O and fatty acid
composition was evaluated in different organs by gas chromatography – flame ionization
detection. Plasma inflammatory cytokines (IL6; IL1β; TNFα; MCP-1; MIP1α) were studied by
Luminex® technology.
Results
Mice exposure to CIH induced an increase of atherosclerosis lesion sizes (p=0.008) that was
prevented by DHA supplementation. DHA supplementation enhanced heart, epididymal and
subcutaneous fat, thoracic aorta and liver DHA incorporation while arachidonic acid (AA)
incorporation was reduced (p<0.0001). Inflammatory cytokine and cholesterol levels were not
significantly changed by DHA supplementation in CIH mice.
Conclusions
Oral DHA supplementation prevented the acceleration of atherosclerosis induced by CIH. The
incorporation of DHA in different tissues (associated to AA reduction levels) may probably
have a role in this prevention. Conversely, DHA induced no significant change in proinflammatory cytokine concentrations. Further studies are needed to explore other potential
mechanisms such as the resolvin or metalloproteinase pathways.
1.
Gautier E, Arnaud C, Bäck M, Pépin JL, Petri MH, Baguet JP, et al. Intermittent hypoxia activated
cyclooxygenase pathway: role in atherosclerosis. Eur Respir J. 2012 Oct.
2.
Calder PC. The role of marine omega-3 (n-3) fatty acids in inflammatory processes, atherosclerosis and
plaque stability. Mol Nutr Food Res. 2012 Jul;56(7):1073-80.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Recherche Translat ionnel le (RT 01 à RT 11) P a g e | 33
Poster n°
RT 01
Journée de la Recherche Médicale 2013
Protein Transfert induced Pluripotent
Stem Cells
Lionel Berthoin, David Laurin, Audrey Le Gouellec, Martin Carré, Frédéric Sauvageot, JeanLuc Lenormand, Jadwiga Chroboczek, Bertrand Toussaint, Benoît Polack et Frédéric Garban
TheREx TIMC-IMAG UMR 5525 CNRS-Université Joseph Fourier, EFS, Faculté de Médecine
Institut Jean Roget, Domaine de la merci, F-38700 La Tronche, France
Il est aujourd’hui possible de reprogrammer des cellules adultes différenciées par
réintroduction de gènes de pluripotence au moyen de vecteurs viraux codant pour l’expression
de facteurs de transcription. Cette technique a été mise au point par l’équipe de Yamanaka,
prix Nobel de Médecine en 2012, qui a identifié une combinaison de quatre facteurs capables
de provoquer la reprogrammation. Chez l’homme une combinaison de facteurs évitant
l’oncogène c-Myc a été identifiée depuis. Les cellules obtenues de cette manière, désignées
sous le terme d’induced Pluripotent Stem cell (iPS), s’auto-renouvèlent à l’infini et forment
tous les types cellulaires, partageant ainsi les caractéristiques des cellules souches
embryonnaires, mais leur utilisation ne pose pas de problème éthique. Les applications des
iPS pourraient révolutionner la médecine régénérative. Elles sont également très intéressantes
pour la modélisation des pathologies génétiques, le screening de molécules et le génie
génétique.
L’un des plus importants freins à l’utilisation thérapeutique des iPS est la reprogrammation,
actuellement établie par des vecteurs viraux associés à des risques élevés d’insertion
mutagène et de dysfonctionnements génétiques.
L’équipe TheREx (laboratoire TIMC-IMAG) est spécialisé en transfert intracellulaire de
protéines actives et a mis au point quatre méthodes originales : A) les protéoliposomes
recombinants [1] ; B) le dodécaèdre des adénovirus de type III [2, 3] ; C) les domaines de
transfert transmembranaires [4] et D) le système de sécrétion de type 3 bactérien [5]. Nous
proposons de produire des iPS au moyen de ces vecteurs protéiques originaux, performants,
et non intégratifs pour délivrer les facteurs de reprogrammation.
La vectorisation protéique la plus efficace pour transférer les facteurs de reprogrammation
dans les cellules CD34+ de sang placentaire et de fibroblastes humains est en cours
d’évaluation. Les constructions les plus efficaces seront utilisées pour produire des iPS à partir
de ces cellules. La pluripotence et la stabilité des iPS obtenues seront caractérisées. Nous
démontrerons la capacité des cellules obtenues sans vecteurs intégratifs à se différencier en
globules rouges matures et fonctionnels et à produire des cellules d’autres lignées
hématopoïétiques.
Cette approche permettra de réaliser des iPS de grade thérapeutique par transfert de
protéines puis de constituer des banques d’iPS de phénotypes érythrocytaires particuliers pour
la production de globules rouges en collaboration avec l’équipe de Luc Douay (UPMC Paris 6,
UMR S938, Hôpital Saint Antoine, Paris, France) qui a réalisée la première transfusion à partir
de globules rouges produits en laboratoire [6].
1. Liguori L, Blesneac I, Madern D, Vivaudou M & Lenormand JL. Single-step production of functional OEP24
proteoliposomes. Protein expression and purification 2010.
2. Villegas-Mendez A, Fender P, Garin MI, Rothe R, Liguori L, Marques B, et al. Functional characterisation of the WW
minimal domain for delivering therapeutic proteins by adenovirus dodecahedron. PloS one. 2012.
3. Szolajska E, Burmeister WP, Zochowska M, Nerlo B, Andreev I, Schoehn G, et al. The structural basis for the
integrity of adenovirus Ad3 dodecahedron. PloS one 2012.
4. Rothe R, Liguori L, Villegas-Mendez A, Marques B, Grunwald D, Drouet E, et al. Characterization of the cellpenetrating properties of the Epstein-Barr virus ZEBRA trans-activator. The Journal of biological chemistry 2010.
5. Le Gouellec A, Chauchet X, Laurin D, Aspord C, Verove J, Wang Y, et al. A Safe Bacterial Microsyringe for In Vivo
Antigen Delivery and Immunotherapy. Molecular therapy 2013, in press.
6. Giarratana MC, Rouard H, Dumont A, Kiger L, Safeukui I, Le Pennec PY, et al. Proof of principle for transfusion of
in vitro-generated red blood cells. Blood 2011.
P a g e | 35
Poster n°
RT 02
Journée de la Recherche Médicale 2013
SUCCESSFUL MODELISATION OF X-LINKED
CHRONIC GRANULOMATOUS DISEASE (X-CGD)
BY USING PATIENT-SPECIFIC INDUCED
PLURIPOTENT STEM CELLS (iPSCs)
J. Brault1,2, E Goutagny1,2, K Shao3, MK Gupta3, D Grunwald4, JP Brion5,
D Plantaz6, KH Krause7, T Saric3, MJ Stasia1,2
1. Centre Diagnostic et Recherche sur la granulomatose septique (CDiReC),
Institut de Biologie et Pathologie, CHU de Grenoble ;
2. TheREx, TIMC/Imag, UMR CNRS 5525, Université Joseph Fourier, Grenoble 1 ;
3. Institute for Neurophysiology, Cologne, Allemagne ;
4. iRTSV/BCI, CEA, Grenoble ;
5. Pôle de Médecine Aigue et Communautaire, Pôle Couple Enfant, CHU Grenoble ;
6. Service de Pédiatrie, Pôle Couple Enfant, CHU Grenoble ;
7. Dept. Of Pathology and Immunology, Geneva Medical Faculty, Genève, Suisse.
Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are reprogrammed somatic cells with embryonic stem
cell (ESC)-like characteristics (self-renewal, pluripotency) generated by the introduction of a
combination of specific transcription factors. Patient-specific iPSCs can be used to recapitulate
disease-specific phenotypes for the screening of new therapies. Chronic granulomatous
disease (CGD), a rare inherited immunodeficiency (1/200,000 births), is characterized by
recurrent and severe infections in childhood. The most frequent form is the X-linked CGD (XCGD, 70% of CGD cases) due to mutations in CYBB leading to the absence of the
transmembrane sub-unit gp91phox (Nox2) of the phagocytic NADPH oxidase complex,
responsible for the production of microbicidal reactive oxygen species.
Our objective was to optimize the generation of phagocytes (neutrophils and macrophages)
reproducing the X-CGD physiopathology in order to test a new therapeutic approach based on
protein therapy.
X-CGD and control iPSC lines were reprogrammed from human fibroblasts with OSKM
retroviral vector (Oct4, Sox2, Klf4, c-Myc). iPSC lines expressing pluripotency markers (flow
cytometry) were able to form embryoid bodies (EBs) comprising cells of the three embryonic
germ layers (immunofluorescence microscopy). Hematopoietic differentiation was induced
after coculture of iPSCs or EBs with OP9 mouse bone marrow stromal cell line during 7, 10 or
13 days. Generation of hematopoietic progenitors was analyzed by expression of the CD34,
CD43 and CD45 markers using flow cytometry, and by the colony-forming cells (CFC) assay. A
fast decrease of pluripotency markers with a progressive appearance of progenitors CD34+
was observed. No significant difference between both coculture types (iPSC or EB) was
noticed. Freezing and thawing of the CD34+ progenitors did not modify the progenitor ability.
Terminal differentiation into mature neutrophils or macrophages (5.105 cells) was obtained in
10-14 days by using specific hematopoietic cytokines. Morphology, phenotype and
functionality of these cells were studied by MGG staining, flow cytometry and exploration of
the NADPH oxidase activity. X-CGD neutrophils and macrophages derived from X-CGD iPSCs
showed no Nox2 expression and NADPH oxidase activity unlike control cells.
In conclusion, we succeeded in generating two cellular model of X-CGD ready to perform in
vitro protein therapy assays.
P a g e | 36
Poster n°
RT 03
Journée de la Recherche Médicale 2013
Nouveaux agents antibactériens : dérivés de
structure bis-indolique ou pyrrolique
Y. Caspar1,2, M. Maurin1,2, E. Le Pihive2, J. Blu3, M. Jeanty3, P.-M. Léo3, D. Schneider2, F. Minassian3,
N. Pelloux-Léon3, J.-F. Poisson3 , J.-N. Denis3
1
Laboratoire de bactériologie, Institut de Biologie et Pathologie, CHU de Grenoble
2
LAPM, UMR-5163 CNRS, Université Joseph Fourier, Grenoble Cedex 9, France
3
DCM (SERCO), UMR-5250 CNRS, Université Joseph Fourier, BP53, 38041, Grenoble Cedex 9, France
[email protected]
Intérêt et cadre de la recherche
Malgré le développement de plusieurs classes d’antibiotiques au cours des quatre dernières
décennies, l’émergence de résistances bactériennes a progressivement limité l’utilisation de
certains antibiotiques. La découverte de nouveaux agents antibactériens ayant notamment un
mécanisme d’action original est urgente.
Objectif scientifique
Tester l’activité antibactérienne de 22 dérivés de synthèse de structure bis-indolique et de 15
dérivés de structure pyrrolique mis au point par le Département de Chimie Moléculaire de
l’Université Joseph Fourier. Déterminer leur spectre d’activité ainsi que leur caractère
bactéricide ou bactériostatique.
Méthode
Mesure des concentrations minimales inhibitrices (CMI) et des concentrations minimales
bactéricides (CMB) en milieu liquide selon la méthode standard du Clinical Laboratory
Standard Institute. Mesure des CMI vis-à-vis de 29 souches de référence incluant 22 espèces
de bactéries à gram positif dont certaines souches de Staphylocoques multi-résistantes et 7
espèces à gram négatif. Puis mesure des CMI vis-à-vis de 39 souches cliniques de
staphylocoques à coagulase négative (SCN).
Résultats
Les résultats observés montrent que ces deux familles de composés sont inactives contre les
bactéries à gram négatif (notamment contre les entérobactéries, Pseudomonas aeruginosa,
Acinetobacter baumanii et Haemophilus influenzae) et vis-à-vis de certaines espèces de
bactéries à gram positif (Streptocoques, Entérocoques, Listeria et Bacillus) avec des CMI >32
mg/L ou > 128 mg/L. Néanmoins l’activité de ces composés contre les souches de
Staphylocoques semble prometteuse. En effet, pour les composés bis-indoliques et pyrroliques
les plus actifs, on observe des CMI de l’ordre de 0,5 à 2 mg/L voire 0,125 mg/L pour le
composé pyrrolique le plus actif. De plus l’activité de ces composés sur les souches de
Staphylococcus aureus soit résistante à la méticilline (SARM), soit de sensibilité intermédiaire
à la vancomycine (VISA), soit de sensibilité diminuée aux fluoroquinolones par surexpression
de la pompe à efflux NorA est semblable à l’activité observée vis-à-vis des souches sauvages.
Par ailleurs, alors que les dérivés bis-indoliques sont actifs contre l’ensemble des souches de
SCN testées avec des CMI variant de 1 à 4 mg/L, on observe pour les dérivés pyrroliques une
activité variable selon l’espèce avec des CMI allant de 1 mg/L à >32 mg/L. Enfin, la mesure
des CMB pour ces deux familles de composés montrent qu’ils n’ont qu’une activité
bactériostatique.
Conclusion
Le spectre d’activité antibactérien des dérivés bis-indoliques et pyrroliques semble limité aux
espèces de staphylocoques y compris les souches de S.aureus multi-résistantes, à l’exception
de certaines espèces de SCN pour les dérivés pyrroliques. Cette activité ainsi que la structure
originale de ces deux classes de composés laisse supposer un mécanisme d’action original, ce
qui en fait des candidats prometteurs pour le développement de nouvelles molécules
antistaphylococciques.
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Poster n°
RT 04
Journée de la Recherche Médicale 2013
Développement et évaluation d’un environnement
virtuel d’apprentissage des biopsies prostatiques
Gaelle Fiard, Sonia Selmi, Emmanuel Promayon, Lucile Vadcard, Jean-Luc Descotes, Jocelyne Troccaz
Service d’urologie, CHU Grenoble CS10217 Grenoble Cedex 9, [email protected]
Laboratoire TIMC-IMAG
Directeur Philippe Cinquin
UJF-Grenoble 1 / CNRS / TIMC-IMAG UMR 5525, Grenoble, F-38041, France
Introduction
Les méthodes actuelles d’apprentissage des biopsies prostatiques, basées sur un compagnonnage
sans possibilité de retour visuel sur la localisation des biopsies, ont prouvé leurs limites avec une
marge de progression même pour des opérateurs expérimentés (1). D’autre part, l’émergence des
biopsies ciblées sur des anomalies repérées en IRM a créé de nouveaux besoins en termes de
formation.
Objectifs
Nos objectifs étaient donc de développer et valider un simulateur associant un environnement
pédagogique et une base de données cliniques pour l’apprentissage des biopsies prostatiques
répondant à ces besoins.
Matériels et méthodes
Une étude didactique (2) a été menée permettant d’analyser le geste de biopsie et de définir des
exercices spécifiques permettant d’en travailler chaque aspect (coordination main-œil,
représentation mentale de la prostate, répartition des biopsies dans la prostate, ciblage d’une
biopsie). Le simulateur (3) se compose d’un ordinateur portable relié à un bras à retour d’effort
(Phantom Omni, Sensable), manipulé par son stylet qui représente la sonde d’échographie. Les
différents exercices, un module de simulation, des cours théoriques ainsi qu’un parcours
d’apprentissage adapté à chaque utilisateur ont été implémentés. Une base de données cliniques
(volumes échographiques 3D de prostates enregistrés lors de séances de biopsies réelles) alimente
le simulateur, et l’ensemble des résultats des utilisateurs sont sauvegardés dans une seconde base
de données. Un score simple a été mis au point afin de permettre une évaluation chiffrée de ces
résultats.
Résultats
Une première évaluation a été réalisée auprès de 21 testeurs au sein du service d’urologie (7
experts et 14 novices) et a permis de valider l’apparence (réalisme de la simulation d’une procédure
de biopsies) avec un réalisme du simulateur noté en médiane à 9/10 (écart interquartile 7,1-9,7) et
le contenu (le simulateur enseigne ce qu’il est supposé enseigner) avec une note médiane de
8,2/10 (7,9-9,7) pour les experts. En revanche les scores médians des novices (52%(43-67)) et
des experts (64%(59-73) n’étaient pas significativement différents (p=0,18) avec le score utilisé.
Les experts ont noté la nécessité d’améliorer le réalisme physique (aspect de la sonde
d’échographie), ainsi que le retour de force et les amplitudes de déplacement de la sonde.
Conclusion-perspectives
Ces premiers résultats encourageants vont conduire à la réalisation d’une deuxième version, plus
réaliste, du simulateur. Le score devra également être affiné afin de discriminer novices et experts.
Une seconde évaluation sera réalisée à l’aide de cette version et visera à évaluer l’intérêt de la
formation sur simulateur (parcours pédagogique).
Références :
(1) Mozer P. et al. Mapping of transrectal ultrasonographic prostate biopsies: quality control and learning curve assessment
by image processing. J. Ultrasound Med. 2009;28(4):455‑460.
(2) Meurger C. Caractérisation didactique d’un simulateur pour la formation médico-chirurgicale. Mémoire Université Pierre
Mendes France; 2009.
(3) Janssoone T. et al. Biopsym: a learning environment for trans-rectal ultrasound guided prostate biopsies. Stud. Health
Technol. Inform. 2011;163:242‑246.
P a g e | 38
Poster n°
RT 05
Journée de la Recherche Médicale 2013
Highly variable plasma concentrations of
voriconazole in adult recipients of allogeneic
hematopoietic stem cell transplantation
E. Gautier1,2, J. Tonini1, A Thiébaut4, A. Rey1, CE Bulabois4, JY Cahn4, F Stanke-Labesque,1,2,3
1
Laboratoire de Pharmacologie-Toxicologie, CHU Grenoble
2
INSERM, U1042, Grenoble, F-38042 France
3
Université Grenoble 1, Faculté de Médecine, IFR1, Grenoble, F-38042 France
4
Département d’Hématologie clinique, CHU Grenoble
Background
Recipients of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) present a risk of
invasive fungal disease, notably invasive aspergillosis (IA). Voriconazole, the reference
treatment of IA, is a good candidate for therapeutic drug monitoring (TDM) with regard to its
non-linear pharmacokinetic and its CYP2C19-dependant metabolism.
Aim
The aim of this study was to assess the distribution of voriconazole trough concentrations
(Cmin) and the determinants of its variability in a population of recipients of AHSCT.
Methods
Biological and clinical data (occurrence of infection, diarrhea, and graft versus host disease
(GVHD)) of patients post-AHSCT and orally treated by voriconazole were retrospectively
collected. Voriconazole Cmin at steady state were measured by liquid chromatography-tandem
mass spectrometry.
Results
126 dosages of voriconazole Cmin were performed in 16 patients (male/female: 8/8, age: 55.2
years (range: 36.8-61.0), body mass index: 22.8 (14.6-27.0) kg/m²), representing 7 (3-15)
dosages/patient. The median dosing was 400 (200-600) mg/j. Cmin intraindividual and
interindividual variability were respectively of 53% and 54%, with a median Cmin of 1.20
(0.10-5.00) mg/l. The individual average Cmin was 1.28±0.67 mg/l. The outcome of infection,
diarrhea or GVHD had no impact on voriconazole Cmin. Multiple regression analysis identified
female gender (p=0.0006), age (p=0.001) and dosing (p=0.003) as associated with a higher
voriconazole Cmin. However, 8/16 (50%) patients presented an average Cmin <1 mg/l,
considered as the efficient threshold by previous studies1. Patients with an average Cmin < or
> 1 mg/l were similar in terms of sex ratio, age and dosing. Nevertheless, glucocorticoid
treatment was more frequent among patients with an average Cmin <1 mg/l (24% vs. 9%,
p=0.02).
Conclusion
These data underlined the high intra- and interindividual variabilities of voriconazole Cmin.
Gender, age, dosing and glucocorticoid treatment could partially explain this variability,
although these data must be confirmed in a larger cohort where genotype of CYP2C19 will
also be determined. Since the average Cmin was lower than the efficient threshold in half of the
patients, TDM appears of importance to optimize voriconazole treatment, especially when
associated to glucocorticoids that have been reported to reduce voriconazole exposure2.
References
1
Pascual et Al., Clinical Infectious Disease 2008
2
Dolton et Al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2012
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Poster n°
RT 06
Journée de la Recherche Médicale 2013
Caractérisation de l’expression du gène de
la protéine neuro-inflammatoire
MSRV-Env ex vivo et in vitro
dans les cellules du sang périphérique et
dans les lignées lymphoblastoïdes
immortalisées par l’EBV issues de
patients atteints de sclérose en plaques
R. Germi(1-2), N. Morel(1-3), O. Casez(3), O. P. Gilson (1-2), L. Grossi(1), L. Morand(1),
HL. Dougier (5) P. Marche(5) H. Perron(6), P.Morand(1-2), Epaulard(1-4),
1- Unit of Virus Host Cell Interactions UMI 3265 UJF-EMBL-CNRS, B.P. 181, 6, rue Jules Horowitz, 38042
Grenoble Cedex 9, France, 2- Département de Virologie, CHU de Grenoble, France, 3- Département de
Neurologie, CHU de Grenoble, 4- Département des maladies infectieuses, CHU de Grenoble, France, 5Université Joseph Fourier-Grenoble I, Faculté de Médecine, Institut d'Oncologie Albert Bonniot, UMRS823, Grenoble cedex, 6 - Geneuro, 18 Chemin des Aulx, CH-1228 Plan-les-Ouates (Genève), Suisse.
Introduction : La sclérose en plaques (SEP) est associée à une dysrégulation immunitaire
manifestement déclenchée par des facteurs environnementaux encore mal connus, chez des
sujets jeunes, génétiquement prédisposés. L’implication de facteurs étiologiques viraux comme le
virus d’Epstein-Barr (EBV) et le Multiple Sclerosis Associated Retrovirus (MSRV, rétrovirus
endogènes humains de la famille HERV-W) par le biais de sa protéine d’enveloppe MSRV-Env,
neurotoxique, est encore discutée. L’objectif de cette étude est de préciser les modalités
d’expression de MSRV-Env dans les cellules lymphocytaires B de patients atteints de SEP de sujets
contrôles et de sujets atteints de mononucléose infectieuse (MNI).
Matériels et méthodes : La présence du gène codant pour la protéine MSRV-Env et l’expression
de ce gène ont été évaluées par PCR et RT-PCR spécifiques dans les cellules mononucléées du
sang périphérique (PBMC) de patients atteints de SEP de forme rémittente-récurrente, et de
sujets contrôles sains. Les patients étaient inclus à l’occasion d’une poussée inflammatoire de leur
pathologie, avant l’injection des bolus de corticothérapie intraveineuse.
L’expression du gène MSRV-Env a également été évaluée par RT-PCR i) sur des cultures
lymphocytaires B, immortalisées par la souche B95-8 de l’EBV et ii) sur des lignées
lymphocytaires spontanément immortalisées issues de patients atteints de MNI.
Résultats : Le nombre de copies du gène MSRV-Env et son expression (ARN) étaient
significativement plus élevés dans les PBMC de patients atteints de SEP que dans les PBMC des
sujets contrôles. L’étude des PBMC de patients atteints de MNI est en cours.
L’expression des ARN MSRV-Env dans les lignées lymphoblastoïdes était plus faible que dans les
PBMC. Aucune différence statistiquement significative d’expression des ARN MSRV-Env n’a pu être
mise en évidence entre les lignées de patients atteints de SEP, de sujets contrôles ou de patients
atteints de MNI.
Enfin l’ARN MSRV-Env était détectable dans les surnageants de ces lignées.
Conclusion : Nos résultats montrent une différence en terme de copie du gène MSRV-Env et en
terme d’expression de l’ARN dans les PBMC de patients atteints de SEP et de sujets contrôles.
Cette différence ne serait pas due à une augmentation de l’expression des ARN MSRV-Env dans
les lymphocytes B EBV positifs des patients SEP, mais aux autres cellules du sang périphérique
(Monocytes, macrophages, cellules T ou NK). En effet aucune différence d’expression n’a pu être
mise en évidence entre les 2 groupes (SEP et contrôles) dans les lignées lymphoblastoïdes B
immortalisées par l’EBV in vitro. Cependant l’ARN MSRV-Env est retrouvé dans les surnageants de
ces lignées.
Des travaux complémentaires sont nécessaires pour augmenter la taille de nos groupes de PBMC,
analyser les PBMC de patients atteints de MNI, compléter l’analyse des surnageants et
comprendre la nature des ARN présents dans ces surnageants puisque de précédents travaux
suggèrent qu’il s’agirait de particules rétrovirales complètes.
P a g e | 40
Poster n°
RT 07
Journée de la Recherche Médicale 2013
Étude du réseau lacuno-canaliculaire de l'os par
optique non linéaire
Aurélien Gourrier, Delphine Débarre, Julien Douady, Jean-Claude Vial, Rachel Genthial
Laboratoire Interdisciplinaire de physique (LIPhy)
140 rue de la piscine
38400 Saint Marin D'Hères
0476514729
Certaines pathologies osseuses, comme l'ostéoporose, sont liées à un déséquilibre du
remodelage osseux. Si les mécanismes cellulaires impliqués dans la résorption et l'apposition
de tissu sont relativement bien connus, les facteurs de régulation du signal déclenchant ou
inhibant ces processus demeurent mal compris. Il semblerait que le réseau ostéocytaire,
formé de cellules dendritiques dérivées des ostéoblastes et piégées dans la matrice osseuse,
soit fortement impliqué dans cette régulation. De plus, le réseau de porosité dans la matrice
tissulaire qui héberge les osteocytes et leur prolongement dendritiques, dit lacunocanaliculaire (LCN : Lacuno-Canalicular Network) peut avoir un impact fort sur les propriétés
biomécaniques globales de l'os.
Malgré ces implications importantes dans la conservation de l'intégrité de l'os, il n'existe à ce
jour, aucune caractérisation générale du LCN en trois dimensions. En effet, il est difficile de
visualiser ce réseau car cela nécessite à la fois une bonne résolution (environ 400 nm) afin
d'observer les canalicules et un champ de vue large pour avoir une statistique biologique
suffisante. L'optique non linéaire permet de satisfaire ces deux conditions. Les deux
techniques principales utilisées pour ce travail sont la microscopie de fluorescence à deux
photons (2PE) et la génération de troisième harmonique (THG). Ces deux méthodes
présentent l'avantage d'avoir des longueurs d'ondes dans le proche infra-rouge et l'infrarouge qui permettent de grandes profondeurs de pénétration et de faibles interactions avec la
matière.
Une recherche amont a donc été initiée au LIPHY visant à observer et caractériser le LCN en
utilisant les techniques d'imageries non linéaires en vue d'applications biomédicales (de
diagnostic notamment). Les premiers résultats obtenus par microscopie confocale, au LIPHY,
sur un modèle d'os cortical bovin ont permis d'établir la faisabilité de la segmentation du
réseau en 3D sur section transverse (100 µm d'épaisseur) de la diaphyse fémorale. Le
protocole établi sera utilisé pour analyser des données récemment obtenues simultanément
par microscopie 2PE et THG sur ces mêmes échantillons au Laboratoire d'Optique et de
Biosciences de Palaiseau. L'ensemble de ces mesures seront prochainement comparées à une
mesure de micro-tomographie (µCT) synchrotron à l'ESRF avec une résolution attendue de
250 µm, qui constitue notre "gold-standard". Une partie de nos expérimentations s'effectue
directement sur la plateforme d'optique clinique du CHU de Grenoble.
Les grandes longueurs d'ondes utilisées en optique non linéaire et la localisation de cette
plateforme permettent d'envisager des analyses intravitales dans le futur.
P a g e | 41
Poster n°
RT 08
Journée de la Recherche Médicale 2013
GeniusVac-Mel4 : a new immunotherapeutic
strategy for the treatment of melanoma
J.Plumas, C.Aspord, M.J. Richard, A.Moisan, L. Chaperot, J. Charles, M.T. Leccia
Equipe Mixte de Recherche EFS-UJF-INSEUM U823
Unité Mixte de Thérapie Cellulaire
Servie de Dermatologie, CHU Grenoble
[email protected]
[email protected]
[email protected]
Melanoma represents a major public health issue, because its incidence is increasing, it affects
young people, and there is no efficient therapy when metastases have occurred. Melanoma
growth and spread are tightly controlled by the immune system, supporting the development
of various approaches of immunotherapy. We propose a new allogeneic cell-based therapeutic
strategy, based on an antigen-loaded irradiated allogeneic plasmacytoid cell (PDC) line to
treat melanoma patients. PDC are endowed with special immunological features that make
them good candidates as vaccine vectors; and the GEN PDC cell line developed in our lab is
really highly immunogenic. The proof of concept of the efficacy of this vaccine strategy has
been recently published in melanoma (Aspord et al, PlosOne 2010, Aspord et al,
J.Inv.Dermatol 2012). The results of this study show that a vaccination with GeniusVac (the
PDC line irradiated and loaded with immunogenic peptides) inhibits melanoma tumor growth
in humanized mice. Moreover, cytotoxic T lymphocytes from melanoma patients, after an in
vitro activation with GeniusVac, acquire the ability to kill autologous tumor cells. GeniusVac is
a standardizable product, easy to produce, that can be used to treat other cancers or viral
pathologies, only by changing the antigens loaded (Aspord et al, Am J Transpl 2011,Martinet
et al, Hepatology 2012). Moreover the ONE-TO-MANY approach allows an easy access to the
treatment and represents a guarantee of the clinical trials homogeneity.
We are setting-up an early clinical trial to study the safety and the feasibility of GeniusVacMel4 in advanced melanoma patients in Grenoble University Hospital. For this clinical trial, one
batch of Drug Product (DP) composed of irradiated PDC line loaded with four melanoma
peptides (Melan-A, gp100, Tyrosinase, Mage-3) is manufactured in the Grenoble/St Ismier
Cell Therapy unit and frozen until its use. Following prescription, the thawed DP will be packed
in syringe and sent to clinicians for sub-cutaneous injections. This clinical trial should start
early in 2013 in Grenoble and Nantes. The authorization from local Ethical Committee is
already obtained. The one from ASNM is pending. We are planning to enlarge the strategy to
other applications in cancer and infectious diseases.
P a g e | 42
Poster n°
RT-09
Journée de la Recherche Médicale 2013
Analyse de l’effet anticancéreux d’un inhibiteur
de la LIM Kinase, « Liminib », et compréhension
du mécanisme d’action
Chloé Prunier1, Amandine Hurbin1, Jean Viallet1, Renaud Prudent1, Véronique Josserand2,
Anne Martinez1, Jean-Luc Coll1, Marc Billaud1, Laurence Lafanechère1
1
Institut Albert Bonniot, CRI INSERM/UJF U823, rondpoint de la Chantourne, 38706 la Tronche
2
OPTIMAL, Floralis, Institut Albert Bonniot, rondpoint de la Chantourne, 38706 la Tronche
L’apparition de tumeurs résistantes limite considérablement l’efficacité des chimiothérapies
conventionnelles. De plus, la dissémination métastatique est la cause la plus fréquente de
décès des patients atteints d'un cancer. De nouveaux médicaments, actifs sur les cancers
résistants et empêchant la formation de métastases constitueraient une avancée
thérapeutique majeure.
Notre équipe a identifié un nouvel agent pharmacologique ciblant le cytosquelette cellulaire. Il
s’agit d’un inhibiteur de la LIM Kinase (LIMK) baptisé « Liminib ». La LIMK, située au carrefour
de plusieurs voies de signalisation, est un régulateur de la dynamique des microfilaments
d’actine et des microtubules. Elle est surexprimée dans de nombreux cancer (Yoshioka et al.,
2002 ; Scott et al., 2010) et représente une cible émergente pour le traitement du cancer
(Manetti, 2011).
Des expériences in vitro montrent que Liminib est actif sur des lignées de cellules cancéreuses
et notamment des lignées résistantes aux chimiothérapies conventionnelles. De plus, une
étude pilote sur un modèle de leucémie a mis en évidence son efficacité antitumorale (Prudent
et al., Cancer Research, 2012, Brevet WO2010/000141).
Nos objectifs sont désormais de confirmer l’effet antitumoral du composé in vivo, notamment
sur des modèles de cancers mammaires agressifs. Pour cela, nous avons conduit deux études
in vivo sur modèle murin (xénogreffes MDA MB 231 et TSA). Dans ces deux études, nous
avons observé une efficacité antitumorale de Liminib, associée à une bonne tolérance. A titre
de contrôle nous avons utilisé le taxol. Liminib est aussi efficace que le taxol et bien mieux
toléré. Nous analysons actuellement les tumeurs résiduelles afin de préciser le mode d'action,
in vivo, de Liminib.
Parallèlement, nous testons l'effet anti-métastatique de Liminib. In vitro, nous avons obtenu
des résultats encourageants, à la fois sur des tests de blessures et sur expériences de
migration de cellules au travers de matrigel.
Par ailleurs, nous avons observé un effet antimétastatique "in vivo", sur un modèle de greffe
de cellules tumorales sur la membrane chorio-allantoidienne d'embryon de poulet.
Nous projetons d'investiguer l'effet antimétastatique de Liminib sur de modèles murins,
notamment à l'aide de la technique d'imagerie intravitale.
Enfin, nous recherchons des marqueurs de l'activité LIMK, avec pour l'objectif de développer
un test compagnon permettant de stratifier les patients, dans l'optique d'une utilisation de
Liminib en clinique.
P a g e | 43
Poster n°
RT 10
Journée de la Recherche Médicale 2013
Apport de la navigation par imagerie 3D per
opératoire dans les cimentoplasties
vertébrales percutanées.
RUATTI S, KERSCHBAUMER G, MILAIRE M, BODIN A, DUBOIS C, COURVOISIER A, EID A,
MOREAU-GAUDRY A, MERLOZ P, TONETTI J.
Clinique universitaire d’Orthopédie Traumatologie, CHRU Grenoble
Clinique universitaire d’imagerie médicale, CHRU Grenoble
TIMC – Imag Université J. fourier et CIC-IT CHRU Grenoble
Aucun conflit d’intérêt pour l’ensemble des auteurs
Introduction
La malposition des trocarts de cimentoplastie peut entrainer des complications neuro
vasculaires et mécaniques, et également des fuites de ciment dans 70 à 80% des cas en
moyenne. Ces gestes sont réputés 10 à 12 fois plus irradiants que la chirurgie des membres
d’après Little, Theocharoulos, Hartl et Rampersaud. Le but de cette étude prospective
randomisée monocentrique était de comparer le taux de trajets extrapédiculaires, le temps
opératoire et l’exposition aux radiations dans deux groupes de patients: l’un bénéficiant d’une
instrumentation “conventionnelle” (groupe A) et l’autre d’une fluoronavigation 3D per
opératoire (groupe B).
Matériel et méthode
Nous avons procédé à la mise en place de trocarts pédiculaires dans les 2 groupes : A, 29
patients (108 implants) et B, 30 patients (72 implants). Nous avons colligé le temps et la
dose absorbée par le chirurgien (en mSv) lors de la mise en place de 2 implants pédiculaires
(1 vertèbre). Le positionnement des trocarts était évalué sur une tomodensitométrie post
opératoire par deux radiologues indépendants, selon les critères définis par Heary.
Résultats
12 implants / 108 étaient extra pédiculaires (groupe A 11,11%) contre 10 / 72 (groupe B
13,88%). Concernant le temps opératoire par vertèbre, il était de 9,19 minutes (groupe A)
contre 19,75 minutes (groupe B). La dose d’irradiation reçue par l’équipe chirurgicale au
cours de l’instrumentation d’une vertèbre était de 1,57mSv (groupe A) contre 0.56mSv
(groupe B). Les résultats étaient statistiquement significatifs en termes d’irradiation et de
temps opératoire (p<0,05), mais non significatifs en termes de précision (p=0,24).
Discussion
Concernant le temps opératoire plus important dans le groupe B, le calibrage des instruments
chirurgicaux et l’acquisition des images en étaient les principales causes. La courbe
d’apprentissage et l’expérience du chirurgien permettent de le diminuer significativement. La
dose d’irradiation était plus basse dans le groupe B, lié à l’éloignement de la source
d’irradiation. En termes de précision, le dispositif ne s’est pas avéré plus efficace (différence
non significative), et nous l’expliquons par les défaillances potentielles du rigid body, à la
fixation perfectible.
Conclusion
Les résultats sont très encourageants en terme d’irradiation surtout mais également en
termes de précision puisqu’elle était globalement équivalente (p=0,24). Le temps opératoire
est à est à rapporter au bénéfice apporté au patient, et au chirurgien en termes de
rayonnements reçus.
P a g e | 44
Poster n°
RT 11
Journée de la Recherche Médicale 2013
Intérêt de l’évaluation de l’expression des
protéines en immunohistochimie dans les
cancers bronchiques non à petites cellules
(étude Pharmacogenoscan)
Toffart Anne-Claire, Timsit Jean-François, Souquet Pierre-Jean, Merle Patrick, Moro-Sibilot
Denis, Brambilla Christian, Brambilla Elisabeth
Toffart Anne-Claire. [email protected].
Equipe 11 Institut Albert Bonniot. Rond-point de la Chantourne. 38706 La Tronche
Université Grenoble 1 U 823-Institut A Bonniot-Université J Fourier
Rond-point de la Chantourne. 38706 La Tronche Cedex
Responsable du laboratoire : Pr Christian Brambilla
Intérêt et cadre de la recherche: La chimiothérapie à base de sels de platine reste la
référence du traitement du cancer bronchique non à petites cellules (CBNPC) mais la toxicité
est importante et la réponse hétérogène. Définir le profil protéique de ces tumeurs permettrait
de mieux cibler les molécules à utiliser et d’améliorer leur efficacité et leur tolérance dans une
maladie où la chimiothérapie offre un succès limité.
Objectif scientifique : Cette étude évalue la corrélation entre l'analyse immunohistochimique (IHC) de l’expression de certaines protéines tumorales et les paramètres de
réponse et de survie pour des patients porteurs d’un CBNPC.
Méthode: L’étude "Pharmacogenoscan" a inclus prospectivement des patients porteurs d’un
CBNPC de tout stade, naïfs de chimiothérapie, entre 2005 et 2010, dans 6 hôpitaux de la
région Rhône-Alpes-Auvergne. Ces patients devaient pouvoir recevoir une chimiothérapie à
base de sels de platine. Parmi les 537 patients inclus dans l’analyse per-protocole, 460
avaient un diagnostic histologique. Nous avons recueilli les prélèvements tumoraux
disponibles et 8 protéines ont été évaluées en IHC: ERCC1, BRCA1, p53, p27kip1, β-tubuline de
classe III (TUBB3), Bax, Fas et FasL. La limite entre le statut positif ou négatif d’un anticorps
est la médiane du score IHC (intensité du marquage multipliée par le pourcentage de cellules
tumorales marquées). Nous avons évalué la réponse tumorale après 2 ou 3 cycles de
chimiothérapie, la survie sans progression et la survie globale. Compte tenu du nombre de
tests statistiques effectués, la correction de Bonferroni a été utilisée.
Résultats: Au moins un anticorps a pu être analysé chez 289 patients. La proportion de biomarqueurs évaluables était différente selon le centre (valeur p<0,05 pour chaque protéine).
Concernant la corrélation entre le niveau d'expression des bio-marqueurs et les paramètres
clinico-pathologiques (tableau 1), seule la TUBB3 était significativement plus exprimée dans
les adénocarcinomes (p=8.10-4). Les patients présentant une sous-expression d’ERCC1
semblent avoir plus souvent une maladie métastatique (ns) et ceux avec une sur-expression
de p27 un performance status plus élevé (ns). Aucune association significative n'a été
observée entre le niveau d'expression des bio-marqueurs et la réponse tumorale ou la survie.
Toutefois, les patients avec une tumeur sous-exprimant TUBB3 et Fas-L ont tendance à avoir
une meilleure réponse aux sels de platine avec respectivement 89% de répondeurs contre
79% dans le groupe TUBB3 positifs (ns) et 90% chez les répondeurs contre 81% dans le
groupe FasL positifs (ns).
Conclusion: Nos résultats négatifs sur une large cohorte n’autorisent pas à attribuer un rôle
pronostique ou prédictif à ces bio-marqueurs. Ainsi, leur analyse en IHC ne peut pas être
recommandée pour prédire la sensibilité à la chimiothérapie.
P a g e | 45
Journée de la Recherche Médicale 2013
Les résumés P a g e | 47
Journée de la Recherche Médicale 2013
Cortical reorganization in speech areas after
intra-oral surgery
Audrey Acher¹, Marc Sato¹, Laurent Lamalle², Coriandre Vilain¹, Arnaud Attye²,
Alexandre Krainik², Georges Bettega³, Christian Adrien Righini4,
Brice Carlot5, Muriel Brix³ and Pascal Perrier¹
¹ Gipsa-Lab, Dpt. Parole & Cognition, UMR 5216 CNRS/Université Grenoble-Alpes, France
² SFR1 RMN Biomédicale et Neurosciences – Unité IRM Recherche 3T, CHU Grenoble, France
³ Service de chirurgie plastique et maxillo-faciale – CHU Grenoble, France
4
Clinique Universitaire d’ORL, Pôle Tête et cou et Chirurgie Réparatrice
CHU Grenoble, France
5
Hôpital Privé de la Casamance – Aubagne, France
This study aims at describing cortical and subcortical activation patterns associated with
functional recovery of speech production after reconstructive mouth surgery. Our ultimate
goal is the understanding of how the brain deals with altered relationships between motor
commands and auditory/orosensory feedback, and establishes new inter-articulatory
coordination to preserve speech communication abilities. A longitudinal sparse-sampling fMRI
study involving orofacial, vowel and syllable production tasks on 9 patients and in three
different sessions (one week before, one month and three months after surgery) was
conducted. Healthy subjects were recorded in parallel. Results show that for patients in the
pre-surgery session, activation patterns are in good agreement with the classical speech
production network. Crucially, lower activity in sensorimotor control brain areas during
orofacial and speech production movements is observed for patients in all sessions. After
surgery, other brain regions associated with regulation and planning processes are more
active, notably in the right caudate nucleus for syllable production, the anterior cingulate
cortex for vowel production and the middle frontal gyrus bilaterally for tongue movement.
Altogether, these results indicate both altered and adaptive sensorimotor control mechanisms
in these patients.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Intérêt pronostique de marqueurs biologiques
devant une dyspnée aigue sévère
C Ara Somohano1 ,4, A. Vesin1, C. Tournegros1, L. Potton1, C. Minet1, R. Hamidfar1,
A. Bonadona1, P.Pavese2, H. Bouvaist3, M.Lugosi1, JC. Cartier1,
F. Carpentier4, C.Schwebel1, JF. Timsit1
1 Pôle cancérologie, médecine aigue et communautaire, Clinique de réanimation médicale
2 Pôle cancérologie, médecine aigue et communautaire, Clinique d’infectiologie
3 Pôle cardiovasculaire et thoracique, Clinique de cardiologie, soins intensifs
4 Pôle urgence SAMU SMUR, Urgences médicales
CHU A Michallon Grenoble
Introduction
La dyspnée est un symptôme fréquent en situation d’urgence, révélateur de dysfonctions
d’organe souvent intriquées. La reconnaissance des patients les plus sévères est l’un des
enjeux de la prise en charge précoce. De nombreux biomarqueurs ont montré un intérêt
pronostic dans différentes situations et pourraient participer à l’évaluation de la gravité initiale.
L’objectif de cette étude est d’évaluer l’apport pronostique de marqueurs biologiques devant
une dyspnée aigue grave en urgence.
Matériels et Méthodes
Etude prospective observationnelle d’une cohorte de patients consécutifs admis aux urgences
et en réanimation médicale pour dyspnée grave. Critères d‘inclusion: SaO2 ≤ 92% et/ou
fréquence respiratoire ≥ 25 cycles/min. Les syndromes coronariens aigus et les pneumothorax
étaient exclus. A l’admission, recueil des données cliniques, biologiques, radiologiques
habituelles et du diagnostic initial, prélèvement pour le dosage des bio marqueurs étudiés: MR
Pro ANP, Pro Adrénoméduline (MR Pro ADM), Pro Endotheline, Copeptine (Pro Vasopressine),
Troponine (Tn), NT Pro BNP, Procalcitonine (PCT), CRP. Diagnostic final porté par un comité
pluridisciplinaire en aveugle des bio marqueurs. La mortalité au 28ème jour est recueillie. Les
facteurs associés à la mortalité conduisent à la construction d’un modèle prédictif (MP) de
mortalité à J-28 en analyse multivariée avec régression logistique. L’apport pronostic de
chacun des marqueurs est mesuré par l’aire sous la courbe ROC (ASC ROC) seul puis en
association avec le MP.
Résultats
400 patients consécutifs, 384 analysés : 220 hommes (57,3%), âge moyen: 72 ans, SaO2
moyenne: 89,7 %, FR moyenne: 31c/mn. La mortalité à J28 : 19,9 %. Diagnostic final: sepsis
141 patients (36,7%), insuffisance cardiaque 84 patients (21.9%), exacerbation de BPCO 46
patients (11.9%), embolie pulmonaire 20 patients (5.2%), autres 93 patients (24.2%). Les
paramètres associés au décès à J28 composant le MP: service d’inclusion (réanimation
médicale) OR 1.636 [0.88 ;3.02], tension artérielle systolique inférieure à 90 mm Hg OR 2.68
[1.1 ;6.53], taux de leucocytes < 4G/l ou > 12 G/l OR 2.34 [1.24 ;4.40], thrombopénie < 200
G/l OR 2.4 [1.19 ;4.84], antécédents de chimiothérapie OR 2.56 [1.04 ;6.32], antécédents
d’asthme OR 0.07 [0.01 ;0.63], créatininémie <75 mmol/l vs >100 mmol/l OR 0.295
[0.14 ;0.61]. Les valeurs médianes de tous les marqueurs sont significativement plus élevées
dans la population décédée à J28. Les valeurs pronostiques mesurée par l’ASC ROC pour les
bio marqueurs sont: Pro ET: 0,646, Pro ADM: O.731, Pro ANP: 0.695, Copeptine: 0.725, PCT:
0.677, CRP: 0.608, NT Pro BNP: 0.696, Tn: 0.709. En association avec le modèle pronostic
(ASC ROC 0.794), trois marqueurs apportent une information significative (ASC ROC) : Pro
ADM (0.805), Copeptine (0.810), Troponine (0.807).
Conclusion
L’utilisation au quotidien de marqueurs biologiques pour l’évaluation pronostique reste peu
codifiée. Dans une cohorte de patients porteurs d’une dyspnée sévère, trois marqueurs, MR Pro
ADM, Copeptine et Troponine, semblent performants pour la prédiction de la mortalité à J 28.
L’apport en pratique clinique de ces résultats reste à définir: Quels seuils utiliser? Quelles
stratégies de prise en charge à la clé ? La réponse à ces questions nécessitera de nouvelles
études interventionnelles.
P a g e | 50
Journée de la Recherche Médicale 2013
Optimisation d’un modèle animal pour les
cancers des VADS et apport de l’imagerie en
fluorescence dans l’exérèse tumorale
ATALLAH I1-2-3,RIGHINI C1-2-3,MILLET C2-3,KERAMIDAS M2-3,GUILLERMET S4,HURBIN A2-3,COLL
JL2-3
1-Clinique universitaire d’ORL, CHU de Grenoble / Courriel : [email protected]
2-Université Joseph Fourier, Grenoble I
3-Unité Inserm U823, Institut Albert Bonniot, Grenoble
4 Fluoptics, Grenoble, France
Intérêt et cadre de la recherche: Les modèles animaux des cancers des VADS (voies
aérodigestives supérieures) sont développés dans le but d’améliorer la connaissance des
mécanismes de carcinogénèse, le diagnostic, et de tester de nouveaux traitements.
Objectif : Développer un nouveau modèle animal orthotopique des cancers des VADS chez la souris
nude afin de tester l’amélioration de la qualité d’exérèse tumorale aidée de l’imagerie de fluorescence
en temps réel.
Matériels et méthodes : Les cellules humaines de cancer des VADS CAL33 exprimant l’intégrine
αvβ3 ont été implantées en sous-cutanée chez la souris nude. Nous avons caractérisé le
développement des tumeurs à partir de ces cellules in vivo et injecté un peptide couplé à un
fluorophore (le RAFT-c[RGD]4-Alexa700) qui se lie spécifiquement à l’intégrine αvβ3, et confirmé
l’expression de l’intégrine αvβ3 par les cellules CAL33 in vivo par imagerie de fluorescence. Nous
avons réalisé des implantations orthotopiques intra-jugales des copeaux tumoraux obtenus à partir
des tumeurs CAL33 développées après implantation sous-cutanée. L’exérèse tumorale des tumeurs
sous-cutanées et orthotopiques a été réalisée 30 jours après implantation en s’aidant d’une sonde
miniaturisée d’imagerie de fluorescence « Fluostick ».
Résultats : Notre modèle animal a permis l’augmentation de la survie des souris avec une tumeur
orthotopique in situ, par comparaison avec une tumeur orthotopique obtenue après injection des
cellules CAL33 en intra-lingual ou au niveau du plancher buccal qui présente une croissance
tumorale accélérée du fait de la dissémination tumorale importante crée par pression hydrostatique
lors de l’injection ce qui impose le sacrifice des souris 10 à 12 jours après l’implantation. Dans
notre modèle, l’implantation des copeaux tumoraux en intra-jugal, a freiné la croissance tumorale
et a permis, une fois les tumeurs développées, la résection tumorale à J30 en s’aidant de l’imagerie
de fluorescence in vivo, sans toucher à l’intégrité de la langue de la souris ce qui permet
d’augmenter la survie des souris après l’explantation tumorale et de surveiller l’apparition de
métastases ganglionnaires cervicales ou une rechute tumorale. Les marges d’exérèse de la tumeur
et des reliquats tumoraux invisibles macroscopiquement mais détectés par la sonde Fluostick après
injection de RAFT-c[RGD]4-Alexa700, ont été analysées histologiquement. Des cellules tumorales
sont présentes dans ces reliquats.
Conclusion et perspectives : L’imagerie optique in vivo améliore la qualité d’exérèse
tumorale dans notre modèle animal orthotopique des cancers des VADS. Notre modèle est
actuellement celui qui se rapproche le plus de la pratique clinique. Des reliquats tumoraux qui
pourraient passer inaperçus si l’exérèse tumorale était exclusivement macroscopique, ont été
détectés grâce à l’imagerie de fluorescence. Cette étape préclinique est indispensable avant de
tester cette technique chez l’être humain. De nombreux patients atteints des cancers des VADS
pourraient bénéficier de cette nouvelle technologie afin d’améliorer la résection tumorale et
prolonger leur survie sans rechute.
Références



Keramidas M, Josserand V, Righini CA, Wenk C, Faure C, Coll JL. Intraoperative near-infrared image-guided
surgery for peritoneal carcinomatosis in a preclinical experimental model. Br J Surg. 2010 May;97(5):737-43.
Wenk CH, Ponce F, Guillermet S, Tenaud C, Boturyn D, Dumy P, et al. Near-infrared optical guided surgery of highly
infiltrative fibrosarcomas in cats using an anti-alpha(v)ss(3) integrin molecular probe. Cancer Lett. 2012 Nov 27.
Gioux S, Coutard JG, Berger M, Grateau H, Josserand V, Keramidas M, et al. FluoSTIC: miniaturized fluorescence
image-guided surgery system. J Biomed Opt. 2012 Oct;17(10):106014.
P a g e | 51
Journée de la Recherche Médicale 2013
Intérêt de la séquence Flair-Vista 4 heures
après injection dans la maladie de Ménière
Arnaud Attyé
1-2
1
3
2
3
, Irène Troprés , Georges Dumas , Julien Ghelfi , Alexandre Karkas ,
1
3
1-2
Laurent Lamalle , Sébastien Schmerber , Alexandre Krainik
1-UMS IRMaGe (UJF / Inserm US 017 / CNRS UMS 3552)
2-Clinique Universitaire de Neuroradiologie et d’IRM – CHU Grenoble
3-Clinique Universitaire d’ORL– CHU Grenoble
Objectif
Illustrer l’intérêt d’une séquence IRM d’inversion-récupération réalisée 4 heures après
injection intraveineuse de chélates de gadolinium dans la segmentation des compartiments
liquidiens de l’oreille interne, dont le déséquilibre est à la base des symptômes des patients
présentant une maladie de Ménière suspectée cliniquement.
Matériels et Méthodes
La séquence est basée sur de l'imagerie FLAIR en 3 dimensions avec les paramètres
suivants : TR : 8000 ms, TE : 316 ms, TI : 2400 ms, acquisition des voxels : 0,8 mm
isotrope, à 3 T.
Elle est réalisée sur une IRM Philips Achieva 3.0T TX avec antenne tête 32 canaux.
L'injection intraveineuse d’acide gadotérique (Dotarem®) permet un rehaussement sélectif de
la périlymphe à 4 heures (Naganawa et al., Acta Oto-Laryngologica, 2011) facilitée par la
rupture de la barrière hémato-labyrinthique secondaire à la maladie (Tagaya et al., Acta OtoLaryngologica 2011)
La dilatation focale des espaces endolymphatiques dans la cochlée ou le vestibule appelée
hydrops est visible par méthode de soustraction avec la périlymphe.
L’analyse est visuelle et semi-quantitative, le compartiment endolymphatique cochléaire étant
considéré pathologique quand il est visible et le compartiment périlymphatique étant
considéré pathologique quand supérieur au 1/3 de l’ensemble du labyrinthe membraneux
(Fukuoka et al., Acta Otolaryngol 2010).
Les patients qui ont bénéficié du protocole ont une maladie de Ménière probable ou définie
selon les critères de l’Association Américaine d’Otologie.
Résultats
21 patients (12 femmes, âge moyen : 52,1 ± 13,1 ans) avec une maladie de Ménière définie
ou probable ont pu bénéficier de la séquence FLAIR Vista 4 heures après injection de
gadolinium.
Elle a permis de détecter 19 hydrops homolatéraux aux symptômes dont 9 dans la cochlée et
19 dans le vestibule.
La résolution spatiale de la séquence permet une analyse fine du vestibule et une localisation
topographique de l’hydrops dans le saccule ou l’utricule avec une prédominance sacculaire
pour les hydrops homolatéraux (6 patients avec hydrops sacculaires, 8 utriculo-sacculaires, 4
utriculaires)
Pour 2 patients, les compartiments endo et périlymphatiques ne sont pas individualisables dans le
vestibule avec un signal intermédiaire du liquide faisant suspecter une rupture membranaire. Neuf
patients présentent un hydrops controlatéral aux symptômes dont 7 dans la cochlée. Quand elles
sont disponibles, les explorations fonctionnelles auditives et vestibulaires sont corrélées aux
symptômes pour les patients présentant un hydrops unilatéral.
Conclusion
La séquence 3D FLAIR-Vista apparaît efficace et bien corrélée à la symptomatologie clinique et
aux explorations fonctionnelles des patients suivis pour une maladie de Ménière définie
cliniquement. Elle est applicable en pratique clinique courante sur les IRM à 3 Teslas et
permet d’orienter le médecin spécialiste vers une prise en charge thérapeutique adaptée.
P a g e | 52
Journée de la Recherche Médicale 2013
Profil de Participation au dépistage organisé du
cancer du sein des femmes de l’Isère
entre 2002 et 2011
A.Balestier, C.Exbrayat, B.Salicru, M.Colonna, A.Seigneurin
ODCL, Registre du Cancer de l’Isère
[email protected] ; 06 84 58 13 41
Introduction
Le Dépistage organisé du cancer du sein par mammographie a montré son efficacité
(diminution de la mortalité) lorsque le taux de participation est élevé. Celui ci est de 52,7% en
France en 2011 et les profils de participation aux invitations successives (régulier ou
irrégulier) ne sont pas connus au delà de la 2ème invitation. L’objectif de cette étude est de
décrire les profils de participation des femmes, au dépistage du cancer du sein en Isère, pour
les 4 premières invitations, et d’étudier l’impact des résultats faux positifs ou négatif sur le
profil de participation ainsi que les conséquences des différents profils de participation sur le
nombre de résultat positif, le taux de détection et la valeur prédictive positive (VPP).
Matériel et Méthodes
L’étude a porté sur la cohorte de femmes agées de 50 à 74 ans et invitées au moins 4 fois au
dépistage des cancers du sein en Isère pendant la période 2002-2011. Les données sont
issues de l’ODLC (Office De Lutte contre le Cancer) qui coordonne le dépistage organisé des
cancers en Isère. En fonction d’un résultat faux positif versus négatif à la 1ère invitation, nous
avons étudié le profil de participation des femmes lors des 3 invitations suivantes. Par ailleurs,
les résultats: nombre de tests positifs, taux de détection et VPP ont été analysés en fonction
des participations antérieures.
Résultats
Au total, 43 530 femmes invitées au moins 4 fois étaient incluses dans l’étude. Le taux de
participation en fonction des années étaient en progression : de 15% en 2002 à 44% en
2011. Parmi les femmes invitées 4 fois, 66 % de celles qui ont participé la 1ère invitation,
renouvellent le dépistage organisé à la 2ème invitation, mais seules 44% réalisent les 4
dépistages. Après ajustement sur la classe d’âge et l’année, avoir eu un résultat faux positif à
la 1ère invitation était significativement associée à un profil de participation plus irrégulier aux
3 invitations suivantes (OR: 54, IC 95% [0,42 ; 0,70]). Une participation régulière lors des 3
premières invitations était significativement associée à un taux de résultat positif inférieur lors
de la mammographie de la 4ème invitation, (OR : 0,57; IC 95% [0,46 ; 0,72]) et non
significativement associée à un changement de taux de détection et de la valeur prédictive
positive lors de la 4ème invitation.
Conclusion
La survenue d'un test faussement positif est un facteur de moindre participation au dépistage
organisé : le stress lié à un résultat faussement positif peut entrainer au mieux le recours au
dépistage individuel, au pire le rejet complet de toute procédure de dépistage. On observe, à
contrario, qu'une participation régulière génère moins de faux positifs, grâce à une lecture
facilitée des mammographies (comparaison avec les clichés antérieurs). La prise en compte de
ces résultats permettra d’adapter les courriers d’invitations successives en fonction des
participations précédentes et des résultats, afin d’améliorer l’adhésion et la fidélisation des
femmes au dépistage organisé des cancers du sein.
P a g e | 53
Journée de la Recherche Médicale 2013
Intérêts de la toxicocinétique et de l’ajustement
à la créatinine urinaire pour la surveillance
biologique de l’exposition aux Hydrocarbures
Aromatiques Polycycliques
D Barbeau(1,2), S Lutier(1), L-M Michel(1), R Persoons(1,2), M Marques(1), A Maitre(1,2)
(1) Equipe Environnement et Prédiction de la Santé des Populations (Pr A. Maitre)
Laboratoire TIMC-IMAG (UMR 5525) UJF Grenoble
(2) Unité Médicale de Toxicologie Professionnelle et Environnementale (Pr Anne Maitre) - DBTP - IBP
CHU de Grenoble - CS 10217- 38043 Grenoble Cedex 9
[email protected]
Intérêt et cadre de la recherche : Les Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques (HAP) sont
des polluants retrouvés en secteurs industriels (aluminium, silicium, goudron, combustion) et en
population générale (tabac, diesel, barbecue). Parmi eux, le benzo(a)pyrène (BaP) est classé
cancérogène certain pour l’homme rendant indispensable le suivi de l’exposition des populations.
L’hydroxypyrène (OHP) est le biomarqueur urinaire couramment analysé pour la surveillance
biologique de l’exposition aux HAP mais ce métabolite est issu du pyrène, HAP non cancérogène.
Nous avons précédemment validé en population la méthode de dosage du 3-hydroxy
benzo(a)pyrène (3-OHBaP), métabolite urinaire majoritaire du BaP(a).
Objectif scientifique : Ce travail se propose d’étudier la toxicocinétique du 3-OHBaP après une
semaine d’exposition professionnelle au BaP afin de déterminer le moment optimal de
prélèvement des urines pour estimer au mieux l’exposition cancérogène des sujets aux HAP.
Méthodes : Chez six salariés d’une entreprise de production de cathodes, ont été prélevés des
échantillons urinaires en début de poste (DP) et en fin de poste (FP) les deux derniers jours de la
semaine de travail ainsi que toutes les mictions du weekend suivant le dernier jour de travail. Le
3-OHBaP et l’OHP ont été analysés pour chaque échantillon par chromatographie liquide couplée à
la fluorimétrie. Les limites de quantification des méthodes analytiques étaient respectivement de
0,05 ng/L et de 0,02 µg/L. La créatinine urinaire était quantifiée par la réaction de Jaffé.
Résultats : Pendant le weekend, la cinétique d’élimination de l’OHP est très semblable entre les
sujets avec un maximum 4,2±0,9h après le FP du dernier jour de travail. En revanche, le pic
d’excrétion du 3-OHBaP est retardé par rapport à celui de l’OHP, apparaissant 15,2±6,8h après le
FP du dernier jour. Ce retard d’élimination du 3-OHBaP de 11H par rapport à l’OHP confirme les
données précédemment publiées après une journée unique d’exposition et serait expliqué par une
rétention rénale du métabolite, que nous avons démontrée chez le rat(b). Ceci explique que les
niveaux d’OHP soient plus élevés en FP les 2 derniers jours de travail alors que ceux du 3-OHBaP
le sont en DP.
La variabilité inter-individuelle de l’OHP est plus faible pour les concentrations rapportées à la
créatinine que pour celles directement exprimées en mol/L mais cette correction n’a que peu
d’effet sur la variabilité des niveaux de 3-OHBaP urinaire qui de ce fait est plus importante. Alors
que l’ajustement à la créatinine est classiquement utilisé pour corriger les concentrations urinaires
des métabolites éliminés par filtration glomérulaire (OHP), cette correction n’est pas utile pour le
3-OHBaP qui est surtout éliminé par sécrétion tubulaire(b).
Conclusion : Pour estimer au mieux l’exposition cancérogène des populations aux HAP, il est
important de prélever les urines le lendemain matin après la fin d’exposition afin de doser le 3OHBaP qui est stocké au niveau rénal avant d’être éliminé. La correction par la créatinine ne
semble pas nécessaire du fait de l’importance de la sécrétion tubulaire du métabolite
contrairement à l’OHP. (projet de recherche soutenu par l’ANSES)
(a)
D Barbeau, A Maître, M Marques. Highly sensitive routine method for urinary 3-hydroxybenzo[a]pyrene quantitation using liquid
chromatography-fluorescence detection and automated off-line solid phase extraction. Analyst, 2011, 6: 1183-91
C Marie, M. Bouchard, R Heredia-Ortiz, C Viau, A Maitre. A toxicokinetic study to elucidate 3-hydroxybenzo(a)pyrene atypical urinary
excretion profile following intravenous injection of benzo(a)pyrene in rats. J Appl Toxicol, 2010, 30(5): 402-10
(b)
P a g e | 54
Journée de la Recherche Médicale 2013
Implication du noyau sous thalamique de
patients parkinsoniens dans l'inhibition
proactive et réactive.
Damien Bénis, Olivier David, Jean-Philippe Lachaux, Eric Seigneuret, Paul Krack, Valérie Fraix,
Stéphan Chabardès et Julien Bastin
Institut des Neurosciences de Grenoble - Chemin Fortuné Ferrini
Bâtiment Edmond J. Safra - 38700 La Tronche
La Maladie de Parkinson est caractérisée non seulement par des symptômes moteurs
(akinésie, rigidité) mais aussi non moteurs (apathie, dépression).
Le noyau sous thalamique (NST) est une structure importante des boucles cortico-souscorticales impliquées dans la physiopathologie de cette maladie, mais son rôle fonctionnel
reste débattu. Ainsi, il a été observé que les patients parkinsoniens présentent un déficit
concernant les processus exécutifs comme l'inhibition réactive à savoir la suppression d'un
mouvement programmé en réponse à un changement dans l'environnement (Obeso et al.,
2011), et l'inhibition proactive, à savoir la préparation à inhiber son mouvement afin d'éviter
des réponses impulsives inappropriées (Wylie., 2010). La stimulation haute fréquence du NST
utilisée comme traitement symptomatologique de la maladie de Parkinson influe sur
l'inhibition réactive et proactive (Ray et al., 2009; van den Wildenberg et al., 2006, Frank et
al., 2007) mais les corrélats électrophysiologiques de ces processus exécutifs dans le NST ne
sont pas clairs.
Nous avons tiré parti de la procédure d'implantation des électrodes de stimulation dans le NST
de 12 patients parkinsoniens, pour étudier le décours temporel des activités en potentiel de
champs locaux du NST, lors de l'inhibition réactive associée à la suppression d'un mouvement
programmé et l'inhibition proactive associée à la préparation à inhiber son mouvement.
L'activité électrophysiologique du NST a été enregistrée pendant une tache de Stop Signal
optimisée pour dissocier ces deux processus.
Les enregistrements électrophysiologiques ont confirmé que l'activité du NST dans la bande de
fréquence beta (13-35 Hz) baissait lors du mouvement. Nous avons montré que cette baisse
d'activité beta est interrompue précocement lors de la suppression d'un mouvement
programmé (inhibition réactive) à une latence précédant le Stop Signal Reaction Time (SSRT).
Cette activité peut ainsi être interprétée comme reflétant un signal "Stop" inhibant l'activité
thalamo-sous-corticale sous tendant le mouvement.
Enfin, nous avons mis en évidence un niveau d'activité beta plus élevé dans le NST lors de la
préparation à inhiber le mouvement (inhibition proactive). Cette différence correlle avec la
performance du sujet lors de l'inhibition réactive. Nous proposons donc que l'activité beta
dans le NST implémente un signal qui permet de retarder la réponse afin de privilégier la
précision par rapport à la vitesse.
En résumé, les preuves électrophysiologiques apportées par cette permettent de mieux
appréhender les fonctions non motrices du NST qui est fortement impliqué dans la
physiopathologie de la maladie de Parkinson.
Damien Bénis1,2, Olivier David1,2, Jean-Philippe Lachaux3, Eric Seigneuret, Paul Krack1,2,4,
Valérie Fraix1,2,4, Stéphan Chabardès1,2,5 and Julien Bastin1,2* Beta band activity in the
subthalamic nucleus dissociates proactive and reactive inhibition in patients with
Parkinson’s disease (en préparation)
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Aging and Mental-Cognitive State modulate
Cortical Excitability (TMS)
1
Beynel, L.1, Bécu, M. 1, Chauvin, A. 1, Guyader, N. 2, Harquel, S. 1,3,Marendaz, C. 1
Lab of Psychology & NeuroCognition (UMRS CNRS 5105) / 2Gipsa-Lab (UMR CNRS 5216)
Grenoble-Alpes University / 3IRMaGe (UMS CNRS 017)
Introduction
Cortical excitability can be evaluated with transcranial magnetic stimulation (TMS). Applied on
motor cortex TMS leads to a muscular response (motor evoked potential). When varying the
stimulation parameters, one can generate indirect measure of GABA and glutamate
neurotransmission. Indeed, estimating cortical silent period (CSP) allows an indirect measure
of GABAb. Paired-pulses stimulations separated by short inter-stimuli interval (ISI) lead to
intracortical inhibition (ICI) which is believed to reflect GABAa neurotransmission. A longer ISI
leads to intracortical facilitation (ICF) that is thought to depend on the glutamatergic
neurotransmission. If cortical excitability is commonly used as a biomarker of different
pathologies (e.g. schizophrenia, mood disorders, obsessive compulsive disorders), little is
known about parameters able to modulate excitability measures as aging or mental-cognitive
state. Our study was aiming to assess how these two factors modulate cortical excitability.
Method
Twenty young (m=26.4; =7.9) and 19 older healthy subjects (m=63.7; =1.7) participated
in this study. First, motor threshold (MT) was determinate for each subject. Then, baseline,
ICI and ICF were estimate when participants were either at rest or performing a simple task:
a white (25% of trials) or a grey cross (75%) could be displayed on a screen. Subjects were
asked to imagine a mental calendar and add a day each time the white cross appeared.
Finally, CSP measure was performed.
Result analysis
- Aging impacts cortical excitability. Older subjects displayed higher MT and decreased
baseline amplitude, ICI and CSP. However, ICF was not modulating by aging.
- Performing the simple cognitive task also modulated cortical excitability, increasing
baseline amplitude for all subjects.
- More interesting was the interaction between Aging and Mental-cognitive state: compared
to the resting state condition (without task), the cognitive task increased ICF in older
subjects and decreased ICI in younger subjects. As a consequence, in the cognitive task
condition, young and old subjects displayed the same pattern of ICI-ICF cortical
excitability.
Conclusion
Our experiment demonstrates that Aging and Mental-Cognitive state could each dramatically
modulate cortical excitability, especially inhibition (ICI and CSP), i.e. the GABAergic
neurotransmission. However, these two factors interact leading to a similar pattern of
inhibition and facilitation for young and older subjects.
Cortical excitability is commonly used as a biomarker of different psychiatric disorders and
inhibitory deficits are a ubiquitous finding across these pathologies (Radhu et al., 2013).
However, patients in these studies are often aged. Our results highlight that adding a task
during the measures of cortical excitability could ensure that inhibition deficit is really a
marker of the pathology and not of aging.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Neuroprotection par effets modulateur
de l’érythropoïétine carbamylée sur
l’aquaporine-4 dans un modèle d’œdème
cérébral diffus post-traumatique
Yvonnick Boue 1, 2,*, Pierre Bouzat 1, 2, Anne Millet 2, 3, Thibaut Trouve-Buisson 1, 2, Samuel
Valable 4, Emmanuel Barbier 2, Jean-François Payen 1, 2
1
Pole Anesthésie-Réanimation, 2INSERM U836, 3Réanimation Pédiatrique, GRENOBLE,
4
centre cyceron, CAEN, France
Introduction : L’érythropoïétine carbamylée (CEPO) est une thérapeutique anti-oedémateuse
dans le modèle animal de traumatisme crânien (TC) diffus par impact-accélération. La proteine
membranaire aquaporine-4 (AQP-4) est impliquée dans les mouvements d’eau et d’électrolytes
intracérébraux, suggérant une modulation de cette protéïne par l’érythropoïétine après un TC.
L’objectif de cette étude préliminaire a donc été d’étudier l’effet de la CEPO sur la modulation de la
synthèse d’AQP4.
Matériel et Méthodes : 8 groupes de rats Wistar males ont été étudiés (n=5 par
groupe). 4 groupes de rats traumatisés ont reçu soit du placebo soit la CEPO en
combinaison avec l’administration d’un inhibiteur des AQP4 (PMA) ou de son véhicule
(DMSO). 4 groupes de rats non traumatisés recevaient les mêmes traitements. La CEPO
était administrée à H + 30 min du TC à la dose de 50 µg/kg. Le PMA était administré à la
posologie de 200 µg/kg/2h à H + 30 min du TC. Les cerveaux ont été extraits à H+2 du TC afin
d’analyser la transcription d’ARNm d’AQP4 par reverse transcriptase PCR (RT-PCR) ainsi que sa
néosynthèse protéique en Western-blot (WB).
Résultats : 40 rats ont été étudiés en WB et 20 rats ont été étudiés en RT-PCR. Nous n’avons
pas observé de différence significative concernant l’expression protéïque d’AQP4 en WB. La
description préliminaire des résultats en RT-PCR montre une augmentation de la transcription
d’AQP4 dans le groupe TC placebo-véhicule par rapport au groupe sham placebo-véhicule (0,66 ±
0,22 vs 0,97 ± 0,08 unités arbitraires). La CEPO a également majoré la transcription d’AQP-4
dans le groupe TC-CEPO-véhicule par rapport au groupe TC-placebo-véhicule (1,30 ± 0,78 vs
0,97 ± 0,08 unités arbitraires). La transcription d’AQP-4 a été diminuée dans le groupe TC-PMAplacebo par rapport au groupe TC-véhicule-placebo (0,29 ± 0,14 vs 1,03 ± 0,42 unités
arbitraires).
Image
Discussion : Cette étude préliminaire suggère une augmentation de la transcription d’AQP-4
après un TC. La CEPO exercerait ses effets anti-oedémateux en activant la transcription d’AQP-4.
Le PMA semble être un inhibiteur de la transcription d’AQP-4 dans notre modèle de TC diffus.
Aucune modification de la synthèse protéique d’AQP-4 n’a été observée à H+2, probablement en
rapport avec un délai d’observation trop court.
Références
Crit Care Med 2011; 39(9):2099-2105
Neuroscience 2010; 168(4):1036-1046
Proc Natl Acad Sci USA 2009; 106(5):1602-1607
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Le transfert d’embryon unique : EG-VEGF, biomarqueur de l’implantation embryonnaire ?
S. Brouillet1,2, H. Garcin1, C. Thomas-Cadi1, J-J. Feige2, N. Alfaidy2, U. Bergues1,
P. Hoffmann1,2, S. Hennebicq1
1
Centre Clinique et Biologique d’Assistance Médicale à la Procréation, Département de Génétique et
Procréation, CHU Grenoble, BP217, Hôpital Couple-Enfant, 38043 GRENOBLE cedex 9
2
INSERM U1036, iRTSV/LAPV, CEA, 17 rue des Martyrs, 38054 Grenoble cedex 09
Contexte actuel
Malgré l'amélioration des techniques d’Assistance Médicale à la Procréation (AMP) depuis 30
ans, les taux de succès restent toujours limités avec seulement 25% de grossesses par
transfert pour une moyenne de 2 embryons replacés. La sélection de ces embryons repose en
routine sur l’établissement de scores morpho-cinétiques, dont l’utilisation exclusive montre
aujourd’hui ses limites. L’évaluation de la qualité embryonnaire par des critères de plus haute
valeur prédictive est une priorité en vue de mettre en place la politique systématique du
transfert d’embryon unique, seul rempart contre la mortalité et morbidité associées aux
grossesses gémellaires.
Originalité du projet
Il est aujourd’hui bien établi que l’amélioration des techniques d’AMP dépend de l’identification
de bio-marqueurs utilisables en routine et directement corrélés à la qualité embryonnaire et
aux taux de grossesse. Parmi ces facteurs, EG-VEGF et ses récepteurs constituent de
nouvelles cibles, de par leurs caractéristiques biologiques étroitement associées à la
physiologie ovocytaire, la réceptivité endométriale, l’implantation embryonnaire et le
développement placentaire physiopathologique. En 2012, les taux sériques de cette cytokine
ont été décrits comme significativement associés à la qualité globale de la cohorte
embryonnaire, ainsi qu’aux taux de grossesse. Ces données préliminaires suggèrent le
potentiel pronostique de cette cytokine dans le succès de l’implantation embryonnaire. Il était
urgent d’évaluer la faisabilité de son dosage en routine en AMP et d’investiguer son potentiel
comme bio-marqueur prédictif de l’implantation.
Patients et Méthodes
L’étude que nous réalisons est une étude longitudinale prospective de cohorte conduite parmi une
population de 200 couples pris en charge pour infertilité dans le centre d’AMP du CHU de Grenoble.
Résultats préliminaires
La faisabilité du dosage d’EG-VEGF et de ses récepteurs dans les cellules du cumulus et dans
les liquides folliculaires par test ELISA a été concluante et permet d’envisager l’utilisation de
cette méthode peu onéreuse en routine hospitalière. EG-VEGF est fortement exprimé dans les
liquides folliculaires, avec une variation importante comprise entre 60 à 1140 pg/ml selon les
patientes. Dans les cellules du cumulus, l’expression d’EG-VEGF et de ses récepteurs semblent
évoluer avec le stade de maturité ovocytaire. Pour l’instant, ces taux semblent être
favorablement associés à la qualité globale de la cohorte ovocytaire, ainsi qu’à la survenue de
la grossesse. L’augmentation prochaine du nombre d’échantillons analysés permettra de
confirmer ou non cette tendance.
Résultats attendus
Cette étude permettra d’une part, de déterminer les niveaux d’expression d’EG-VEGF et de
ses récepteurs dans les différents matériaux biologiques du processus de fécondation in vitro ;
et d’autre part d’évaluer la corrélation entre les taux d’EG-VEGF, le succès de l’implantation
embryonnaire et la survenue de la grossesse. Cette étude permettra également d’évaluer si le
dosage d’EG-VEGF en routine peut être considéré comme un bio-marqueur prédictif du
développement embryonnaire, et plus encore de la survenue de la grossesse suite au transfert
d’un embryon unique dans la cavité utérine.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Rôle du facteur HSF1 dans la réponse des
carcinoses péritonéales au traitement par
chimio-hyperthermie
Cécile Caron 1, Marie-Hélène Laverrière 2, Julie Gervasoni 2, Soumia Sabeur 1, Katinka
Ruigrok1, Thomas Girard 1, Julio Abba 3, Claire Vourc’h 1 et Catherine Arvieux 3,4.
[email protected]
Laboratoire d’ontogenèse et oncogenèse moléculaire, INSERM/UJF U823
Equipe 10 (responsable : Pr. Claire Vourc’h) : Stress, Cancer et dynamique de l’organisation
du génome.
Institut Albert Bonniot,- Rond point de la Chantourne
Site santé BP170
38042 Grenoble Cedex
Les carcinoses péritonéales (CP) sont pour la plupart des complications évolutives et létales
des adénocarcinomes digestifs. Certaines sont traitées par chirurgie d’exérèse et chimiohyperthermie intrapéritonéale (CHIP). Ce traitement très lourd et toxique n’est cependant pas
d’une efficacité constante, et il n’existe aujourd’hui aucun marqueur moléculaire permettant
de prédire le caractère résistant des CP à la CHIP.
Bien que l’hyperthermie favorise la pénétration de la drogue dans les tissus, elle pourrait avoir
comme effet indésirable d’activer les mécanisme de réponse au choc thermique (HSR, pour
« Heat-shock response »), capables de les aider à résister au traitement. L’HSR est sous le
contrôle du facteur de transcription HSF1, activé par la chaleur, et dont le rôle promoteur de
tumeur a par ailleurs été démontré.
Pour aborder ces questions, et identifier des marqueurs moléculaires potentiels de l’efficacité
du traitement, nous avons développé un projet de recherche translationnelle visant à
analyser, dans des prélèvements de carcinoses soumis in vitro à l’hyperthermie, comment les
voies de l’HSR sont mises en œuvre, et si des drogues ciblant ces mécanismes sensibilisent
les tumeurs au traitement.
Nos premiers résultats d’analyses par immuno-histochimie et western blots sur divers
échantillons valident ce système d’incubation ex vivo des tumeurs, et une analyse sur un petit
nombre de patients permet de proposer certains marqueurs qu’il sera intéressant d’analyser
sur de plus grandes séries.
A terme, ce projet devrait permettre d’appréhender les rôles de la voie HSF1 dans
l’adaptabilité des cellules cancéreuses à l’hyperthermie, d’identifier des marqueurs de stress
prédictifs de la réponse des CP à la CHIP, et de proposer de nouvelles stratégies
thérapeutiques pour contrer leur résistance à la thermothérapie. P a g e | 59
Journée de la Recherche Médicale 2013
Prédicteurs de dysfonction rénale persistante à
1 an des patients encore dialysés
en sortie de réanimation
JC Cartier(1), S Ruckly(2), P Zaoui(3), C Minet(1), C Ara-Somohano(1), R Hamidfar-Roy(1), A Bonadona(1),
C Schwebel(1), JF Timsit(1,2)
(1)
Réanimation médicale, CHU Grenoble
(2)
Institut A Bonniot, Université J Fourier, Grenoble 1 et groupe OUTCOMEREA
(3)
Néphrologie, Hémodialyse et Transplantation rénale, CHU Grenoble
[email protected]
Introduction : L’insuffisance rénale aiguë (IRA) en réanimation est fréquente, de l’ordre de
35 à 65%, et associée à une surmortalité propre. En cas d’épuration extra-rénale (EER), la
mortalité hospitalière peut atteindre 60% des patients. Peu de données existent quant au
pronostic vital ou rénal à long terme de ces patients, survivants à l’issue du séjour en
réanimation. Particulièrement, en cas de défaillance rénale persistante à l’issue du séjour,
aucune donnée n’est disponible. Cette étude propose une description de cette population
particulière et en évalue le pronostic vital et rénal à 1 an avec l’étude des facteurs de risque
associés.
Matériels et méthodes : Les patients ayant présenté une IRA avec EER non sevrée avant la
sortie de réanimation ont été inclus dans cette étude rétrospective du service de Réanimation
médicale du CHU de Grenoble entre le 01/12/2005 et le 31/03/2011. Nous avons modélisé la
survie sans dialyse à 1 an grâce à un modèle de Cox dans un premier temps. Un modèle à
risque compétitif en sous distribution de Fine & Gray a aussi été utilisé pour modéliser de
manière conjointe la mise en dialyse chronique et la mortalité.
Résultats : Parmi les 4132 séjours, 551 ont bénéficié d’une EER, 337 patients ont survécu
dont 115 encore dialysés à la sortie de réanimation. Il s’agissait de 77 hommes/32 femmes,
d’âge médian 63,5 ans (IQR : 55;73) avec un score de gravité IGS II élevé médian à 54,5
(IQR : 40,5;65,5). Pendant le séjour en réanimation, ils ont reçu une injection d’iode,
d’aminosides ou de vancomycine dans respectivement 45,7%, 31% et 12,9% des cas. Les
étiologies principales de l’IRA étaient le sepsis (23,3%), les chocs non infectieux (22,4%),
fonctionnelles (19,8%) ou toxiques (16,4%). La nécrose tubulaire aiguë (NTA) était admise
comme mécanisme de l’IRA pour 102 patients (87,9%).
La survie sans dialyse chronique à 1 an est de 64,3% (IC95%=54,9-72,3%).
Le risque cumulé de dialyse et de décès à 1 an était respectivement de 23.5% (IC95% : 1732%) et de 12,1% (IC95%=7,4-19,7%).
Les facteurs indépendants associés à une moindre survie sans dialyse sont : un âge élevé, un
autre mécanisme que la nécrose tubulaire aiguë à l’IRA, une fonction rénale antérieure
inférieure à 60ml/min/1,73m2 (MDRD) et l’administration de vancomycine pendant le séjour
en réanimation (HR=2,33 avec IC95% 1,05-5,17). De plus, la présence de statines dans le
traitement de fond est un facteur protecteur avec un HR=0,35 (IC95%=0,17-0,71).
Le risque cumulé de dialyse chronique était significativement aggravé par une cause d’IRA
autre que la NTA (sHR=3.59 avec IC95% 1.2-10.7) et l’utilisation d’aminosides durant le
séjour en réanimation (sHR=4.25 avec IC95% 1.36-13). Il était réduit par une clairance
antérieure supérieure à 60ml/min (sHR=0.033, IC95% 0.004-0.27) et les statines sHR=0,06
(IC95%=0,01-0,49).
Les statines ne modifiaient pas significativement le risque cumulé de décès (sHR=0,086
IC95%=0,68-2,43, p=0.09).
Conclusion : Deux tiers des patients nécessitant une EER à l’issue du séjour en réanimation
sont vivants et non dialysés à 1 an. Le niveau de fonction rénale antérieure, l’âge, l’utilisation
de vancomycine et d’aminosides pendant le séjour ainsi que la présence de statines dans le
traitement de fond sont des facteurs indépendants déterminants.
P a g e | 60
Journée de la Recherche Médicale 2013
Exploration comportementale des déficits
de mise à jour égocentrée dans
la maladie d’Alzheimer
1
Cerles Mélanie1, Brugnon Anaïs2, Rousset Stéphane1, Charnallet Annik12, Moreaud Olivier12
Laboratoire de Psychologie et NeuroCognition, Univ.Grenoble Alpes, Grenoble (dir. Monica Baciu)
2
CMRR & Neuropsychologie, Pôle de psychiatrie et Neurologie, CHU de Grenoble
[email protected]
Introduction
La démence de type Alzheimer (DTA) est une maladie neuro-dégénérative associée
précocement à des troubles de mémoire épisodique (i.e., la capacité à revivre mentalement
un épisode du passé) et à une désorientation spatiale (i.e., se perdre dans des lieux
familiers). Cette association de symptômes peut suggérer qu’il existe un mécanisme commun
aux traitements spatiaux et mnésiques (de mémoire épisodique) comme cela a été suggéré
par plusieurs modèles de mémoire épisodique. Gomez et al. (2009) postulent que la
récupération d’un souvenir en mémoire épisodique serait liée à la re-création d’un point de
vue spatial. Cette re-création reposerait sur un processus spatial qui permet, lorsque l’on se
déplace réellement, l’intégration dynamique des différents points de vue visuels grâce aux
informations issues du mouvement de soi (i.e., processus de mise à jour égocentrée). A
l’appui de cette hypothèse, Gomez et al. (2011) montrent une atteinte spécifique de la mise à
jour égocentrée lors d’un déplacement chez un patient présentant une amnésie antérograde.
Cette étude est destinée à évaluer l’atteinte des processus de mise à jour égocentrée chez les
patients présentant une DTA.
Méthode
Dans cette étude, 17 patients atteints de DTA et 17 participants contrôles appariés par âge,
sexe et niveau socio-professionnel devaient apprendre les positions de quatre objets placés
autour d’eux puis devaient effectuer un mouvement de rotation les yeux bandés. Ils devaient
ensuite indiquer, depuis cette dernière position, la position de l’un des objets par rapport à
eux. Le point de référence à partir duquel le pointage s’effectuait variait selon trois
conditions : 1/ les participants devaient pointer par rapport à leur position finale (condition
Mise à jour), 2/ par rapport à leur position de départ (condition Ignorer), les participants ne
devaient pas tenir compte du déplacement réalisé, 3/ par rapport à leur position finale
lorsqu’un aller-retour était réalisé lors du déplacement (condition Contrôle).
RESULTATS : Les résultats indiquent une dissociation entre deux groupes de patients. Dans
un 1er groupe, les patients sont déficitaires dans la condition Ignorer, ceux-ci sont capables
d’intégrer leur déplacement mais sont dans l’incapacité de se projeter mentalement dans une
autre position que celle dans laquelle ils sont réellement. Le processus de mise à jour
égocentrée lors d’un déplacement étant irrépressible (Farell & Robertson, 1998), il est
nécessaire de simuler ce processus afin de revenir mentalement à sa position de départ dans
la condition Ignorer. Dans le 2ème groupe, les patients sont déficitaires aussi bien dans la
condition Mise à jour que dans la condition Ignorer.
Conclusion
Ces résultats suggèrent une atteinte générale du processus de simulation de
égocentrée dans la DTA et montrent une dissociation entre les patients sur un
à jour égocentrée lors d’un déplacement. La spécification de cette dissociation,
de ses répercussions mnésiques pourrait à terme permettre d’adapter les
remédiation en fonction des atteintes spatiales spécifiques des patients.
P a g e | 61
la mise à jour
déficit de mise
de sa cause et
techniques de
Journée de la Recherche Médicale 2013
La Neurostimulation Vagale à visée
anti-inflammatoire : une nouvelle approche
thérapeutique de la maladie de Crohn
D. Clarençon1,2, S. Pellissier2, N. Mathieu3, D. Hoffmann4, V. Sinniger2,3, O. David2,
L. Vercueil4, D. Tartry3, M. Baudrant-Boga3, C. Trocmé5, P. Faure5, A. Peinnequin1,2,
JL. Cracowski6, C. Dantzer7 et B. Bonaz2,3
1. Institut de Recherche Biomédicale des Armées, Centre de Recherche du Service de Santé des Armées, La Tronche
2. Grenoble Institut des Neurosciences (GIN), Centre de Recherche INSERM 836 UJF-CEA-CHU, Grenoble
3. Clinique Universitaire d’Hépato-Gastroentérologie, CHU de Grenoble
4. Pôle Neurologie, Département de Neurochirurgie, CHU de Grenoble
5. Institut de Biologie, CHU Grenoble
6. Centre d’Investigation Clinique, CHU de Grenoble
7. Laboratoire Inter-Universitaire de Psychologie, EA 4145 UPMF/UDS Université de Savoie- BP1104 73011 Chambéry
Les maladies inflammatoires chroniques de l’intestin (MICI) sont représentées par la maladie de
Crohn et la rectocolite hémorragique. Ce sont des affections chroniques qui atteignent le tube
digestif et évoluent par poussées inflammatoires entrecoupées de périodes de rémission. Elles
constituent un problème de santé publique du fait de l’augmentation de leur prévalence, de leur fort
retentissement sur la qualité de vie et de leur coût de santé non négligeable. Le stress est un facteur
important dans le déclenchement et l’entretien de cette pathologie (1). Le système nerveux
autonome, représenté par les systèmes nerveux sympathique et parasympathique, est très impliqué
dans les relations stress-inflammation digestive (1) : ainsi au cours d’un stress aigu, il existe une
activation du système sympathique et une inhibition du système parasympathique, en particulier du
nerf vague. En 2000, l’équipe de Tracey a mis en évidence le rôle anti-inflammatoire des efférences
vagales (20% des fibres) en décrivant la voie cholinergique anti-inflammatoire (2). En effet,
l’acétylcholine, libérée à l’extrémité du nerf vague inhibe la libération de TNFα par les macrophages
via des récepteurs α7 nicotiniques. Chez le rongeur, la neurostimulation du nerf vague (NSV) à
basse fréquence (5Hz) stimule préférentiellement les efférences vagales (3), mais aussi les
afférences (4) ; elle améliore une colite expérimentale (3). La NSV à haute fréquence (30Hz) est
classiquement utilisée dans le traitement de l’épilepsie et la dépression (5). La NSV à basse
fréquence pourrait donc être utilisée chez l’Homme en alternative au traitement médicamenteux des
MICI (5-aminosalicylés, corticoïdes, immunosuppresseurs, biothérapies), et notamment aux antiTNF. Dans cette perspective, une étude pilote utilisant la NSV à visée anti-inflammatoire chez des
patients présentant une maladie de Crohn a débuté en 2012, dans le cadre d’un appel à projet
(AAP) de recherche clinique translationnelle DGOS-INSERM incluant la Clinique Universitaire
d’Hépato-Gastroentérologie, l’IRBA, les équipes 8 et 11 du GIN, le CIC, le pôle de Neurologie, le
département de Neurochirurgie et l’institut de Biologie du CHU. Les différents critères d’inclusion
sont les suivants : MC en poussée modérée à sévère avec un index d’activité (CDAI) compris entre
220 et 450, un score d’activité endoscopique (CDEIS) >7, une CRP >5mg/L et une calprotectine
fécale>100µg/g. Les patients inclus font l’objet d’un suivi multi paramétrique : examen clinique,
iléo-coloscopie, marqueurs biologiques sanguins (cytokines, cortisol, CRP…), biopsies, exploration de
la balance sympatho-vagale (réalisée par l’analyse de la variabilité cardiaque : HRV). L’effet
potentiel de la NSV sur le SNC, via les afférences vagales (80% des fibres), est exploré par un
enregistrement EEG haute résolution. Jusqu’à présent, 3 patients ont été recrutés, la NSV est bien
tolérée, et les résultats sont cours d’analyse.
(1)
Bonaz BL, Bernstein CN. Brain-gut interactions in inflammatory bowel disease. Gastroenterology. 2013
Jan;144(1):36-49.
(2)
Borovikova LV, Ivanova S, Zhang M, Yang H, Botchkina GI, Watkins LR, Wang H, Abumrad N, Eaton JW,
Tracey KJ. Vagus nerve stimulation attenuates the systemic inflammatory response to endotoxin. Nature. 2000 May
25;405(6785):458-62.
(3)
Meregnani J, Clarençon D, Vivier M, Peinnequin A, Mouret C, Sinniger V, Picq C, Job A, Canini F, JacquierSarlin M, Bonaz B. Anti-inflammatory effect of vagus nerve stimulation in a rat model of inflammatory bowel disease.
Auton Neurosci. 2011 Feb 24;160(1-2):82-9.
(4)
Reyt S, Picq C, Sinniger V, Clarençon D, Bonaz B, David O. Dynamic Causal Modelling and physiological
confounds: a functional MRI study of vagus nerve stimulation. Neuroimage. 2010 Oct 1;52(4):1456-64.
(5)
Bonaz B, Picq C, Sinniger V, Mayol JF, Clarençon D. Vagus nerve stimulation: from epilepsy to the cholinergic
anti-inflammatory pathway. Neurogastroenterol Motil. 2013 Mar;25(3):208-21.
P a g e | 62
Journée de la Recherche Médicale 2013
Dysfonction myocardique induite par le sepsis :
exploration fonctionnelle in vivo du système
nerveux sympathique cardiaque
Clerc R. (1); Perret P. (1); Broisat A. (1); Riou L. (1); Toczek J. (1) ; Doll S. (1) ; Fagret D.
(1), Ghezzi C. (1) et Schwebel C. (2). (1) Inserm U1039, Radiopharmaceutiques Biocliniques
U1039 38000 Grenoble ; (2) Service de Réanimation Médicale, CHU de Grenobl
Hôpital A. Michallon, La Tronche
Introduction
La pathologie infectieuse grave est un motif fréquent d’admission dans les services de
réanimation et l’une des dix premières causes de mortalité au monde. La physiopathologie
complexe de la dysfonction myocardique induite par le sepsis inclut des anomalies de la balance
sympatho-vagale dont les mécanismes exacts restent inconnus. L'objectif de l'étude est
d’étudier in vivo, d’une part les modifications hémodynamiques, d’autre part les
caractéristiques fonctionnelles du système sympathique myocardique au cours du sepsis.
Matériels et Méthodes
La fonction mécanique du myocarde est étudiée en échocardiographie (standard et de strain,
Vevo 2100, Visualsonics). Le système sympathique myocardique est étudié en imagerie TEMP
(Tomographie d’Emission Mono-Photonique, Nano SPECT-CT, Bioscan) avec un analogue de la
noradrénaline marqué à l'iode 123, la Méta-Iodo-Benzyl-Guanidine (123I-MIBG). L’étude est
réalisée sur deux groupes de rats : des rats mâles de souche Wistar rendus septiques par
injection intra-péritonéale (IP) de lipopolysaccharide (LPS 10 mg/kg, O55 :B5) et des rats
témoins (injection IP de NaCl 0,9% intra-péritonéal), en présence ou non de desipramine (DMI,
2 mg/kg) un inhibiteur du transporteur responsable de la recapture pré-synaptique de la
noradrénaline : l'uptake-1.
Résultats
Dans le groupe d’animaux traités par LPS les paramètres de fonction systolique (fraction
d’éjection, fraction de raccourcissement, débit cardiaque), et de fonction diastolique (rapport
E/A à l’anneau mitral) sont diminués de façon significative (p<0,05). On observe une réduction
globale du strain myocardique dans ses trois composantes sans anomalie segmentaire.
Toutefois seul le strain radial présente une différence significative (p<0,05).
La captation myocardique de 123I-MIBG est significativement réduite dans le groupe LPS par
rapport au groupe contrôle (p<0,05). La cinétique de fixation modifiée en présence de DMI est
en faveur d’une altération de l'uptake-1.
Conclusion
L’originalité de cette étude réside dans l’utilisation de l'imagerie nucléaire non invasive in vivo
pour la mesure des altérations du système sympathique au cours du sepsis.
Elle montre que les anomalies échocardiographiques décrites au cours du sepsis
s'accompagnent d'une altération fonctionnelle du système sympathique myocardique. La
complexité fonctionnelle du système nerveux autonome impose l’évaluation plus précise des
mécanismes uptake-1 et uptake-2 par l’utilisation isolée et combinée de leurs inhibiteurs
respectifs.
P a g e | 63
Journée de la Recherche Médicale 2013
Quelles mesures tomodensitométriques
quantitatives et qualitatives pour le suivi d’un
nodule pulmonaire en verre dépoli ?
J. COHEN*, E. REYMOND*, M. LEDERLIN**, M.MEDICI***, G. FERRETTI*, A. MOREAU GAUDRY***
*Clinique universitaire de radiologie et imagerie médicale (CURIM), CHU GRENOBLE
**Clinique universitaire de radiologie, CHU BORDEAUX (Hôpital cardiovasculaire)
***Centre d’investigation clinique (CIC), CHU GRENOBLE.
Intérêt et cadre
Les nodules pulmonaires en verre dépoli sont des lésions fréquemment retrouvées sur les
scanners thoraciques haute résolution. Lorsqu’elles persistent sur un examen de contrôle à 3
mois, ces lésions sont fortement suspectes d’appartenir au spectre des adénocarcinomes.
Compte tenu de la morbimortalité des thérapeutiques disponibles, dont le standard reste la
lobectomie, il existe un intérêt majeur à la caractérisation scannographique non invasive par
TDM afin notamment de proposer une exérèse plus limitée pour les lésions de bon pronostic,
d’où l’intérêt en premier lieu de disposer de mesures TDM reproductibles.
Objectif
Déterminer les mesures tomodensitométriques les plus reproductibles dans le suivi d’un
nodule pulmonaire en verre dépoli pur ou mixte.
Méthode
Relecture rétrospective des deux TDM de 39 nodules en verre dépolis chez 35 patients opérés.
Il y avait 1 fibrose interstitielle focale, 1 hyperplasie adénomateuse atypique, 13
adénocarcinomes in situ, 3 adénocarcinomes minimalement invasifs, 21 adénocarcinomes
invasifs. Nous avons étudié la variation inter-observateur chez 3 observateurs d’expérience
différente pour les caractéristiques suivantes : grand diamètre axial, plus grand diamètre axial
orthogonal, hauteur, densité, taille composante solide, volume, score de Suzuki, attraction
pleurale, bronchiolectasie, masse, temps de doublement, ratio de disparition, sa corrélation
avec l’histologie.
Résultats
Les mesures du grand axe, petit axe, hauteur, densité, taille de la composante solide, ratio de
disparition, volume du nodule, masse, ainsi que la présence de bronchiolectasie étaient très
reproductibles quelque soit l’histologie (coefficient Kappa/ICC>0,75). Concernant les
variations inter-examen, l’accord inter-observateur était fort pour les deux plus grand
diamètres axiaux, la taille de la composante solide, le volume du nodule et sa masse
(Kappa/ICC >0,75).
Conclusion
Les mesures des deux plus grands diamètres orthogonaux, de la composante solide, du
volume et de la masse sont reproductibles dans le suivi TDM d’un nodule en verre dépoli pur
ou mixte.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Involvement of cytochrome epoxygenase
metabolites in cutaneous postocclusive
hyperemia in humans
Jean-Luc Cracowski1,2,3, Florence Gaillard-Bigot1,2, Claire Cracowski1, Claire Sors1,2, Matthieu
Roustit1,2,3, Claire Millet2
1 Clinical Pharmacology Department, Inserm CIC3, University Hospital, Grenoble, France
2 Inserm U1042, Grenoble, France
3 University Joseph Fourier, Grenoble, France
Objective
Several mediators contribute to postocclusive reactive hyperemia (PORH) of the skin including
sensory nerves and endothelium derived hyperpolarizing factors (EDHF). The main objective
of our study was to investigate the specific contribution of epoxyeicosatrienoic acids in human
skin PORH.
Methods
Eight healthy volunteers were enrolled in two placebo controlled experiments. In the first
experiment we studied the separate and combined effects of 6.5 mM fluconazole, infused
through microdialysis fibers, and lidocaïne/prilocaïne cream on skin PORH following 5 min
arterial occlusion. In the second experiment we studied the separate and combined effects of
6.5 mM fluconazole and 10 mM L-NMMA. Skin blood flux was recorded using two-dimensional
Laser Speckle Contrast Imaging. Maximal CVC was obtained following 29 mM sodium
nitroprusside perfusion.
Results
The PORH peak at the placebo site averaged 66 +/- 11 %CVCmax. Compared to the placebo
site, the peak was significantly lower at the fluconazole (47 +/- 10 %CVCmax; P < 0.001);
lidocaïne (29 +/- 10 %CVCmax; P< 0.001); and fluconazole + lidocaïne (30 +/- 10
%CVCmax; P < 0.001) sites. The effect of fluconazole on the area under the curve was more
pronounced. In the second experiment, the PORH peak was significantly lower at the
fluconazole site, but not at the L-NMMA or combination site, compared to the placebo site.
Conclusions
In addition to sensory nerves cytochrome epoxygenase metabolites, putatively
epoxyeicosatrienoic acids, play a major role in healthy skin PORH, their role being more
important in the time course rather than the peak. ClinicalTrials.gov Identifier: NCT01290198
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Prévalence et caractéristiques étiologiques des
enfants avec déficience intellectuelle légère
dans le département de l’Isère
F Devillard1, M David2, K Dieterich1, C Coutton1,4, V Satre1,4, F Amblard1, G Vieville1, J
Counillon2, A Billette de Villemeur2, C Cans23, P S Jouk13
(1) Département de Génétique et Procréation, Hôpital Couple Enfant, CHU Grenoble.
Responsable Pr Pierre Simon Jouk
[email protected]
(2) RHEOP (Registre des Handicaps de l’Enfant et Observatoire Périnatal)
(3) Unité d’Exploitation de l’Information Médicale, CHU de Grenoble
(4) Equipe "Andrologie, Génétique et Cancer" - Laboratoire AGIM - CNRS FRE3405-UJF
Grenoble. Responsable : Christophe Arnoult
La prévalence totale de la déficience intellectuelle est d’environ 3%. Elle comprend la
déficience intellectuelle moyenne ou sévère (QI < 50) et la déficience intellectuelle légère
(DIL, QI entre 50 et 69). Les études sur la DIL de l’enfant sont peu nombreuses et la
variabilité des taux de prévalence est très importante, allant de 4‰ à vingt fois plus. Afin de
mieux répondre aux interrogations des parents concernant l’avenir de leur enfant, les
pédiatres et les généticiens sont intéressés par le devenir scolaire des enfants avec DIL.
Le RHEOP (Registre du Handicap de l’Enfant et Observatoire périnatal) enregistre seulement
les enfants avec déficience sévère, et a décidé de conduire en Isère une étude visant à :
- Déterminer la prévalence des enfants présentant une DIL
- En explorer les étiologies reconnues
- En décrire la scolarité et les prises en charge.
L’inclusion s'est faite à partir des tests psychométriques pour la génération des enfants nés en
1997 et présentant une DIL identifiée entre 9 et 13 ans. Un entretien approfondi a été réalisé
auprès des parents. Une consultation en génétique a ensuite été proposée ainsi qu’un bilan
étiologique (caryotype, X fragile, MLPA, Analyse Chromosomique sur puce ADN (ACPA).
Résultats
La prévalence estimée de la DIL pour la génération 1997 en Isère est de 18‰.
181 familles ont été interrogées et 79 bilans génétiques réalisés.
67 sujets ont bénéficié d’une ACPA permettant d’identifier 13 anomalies considérées comme
causales de la DIL.
Au total 27% d’étiologies ont été retrouvées dont 19% de causes génétiques.
Cette étude démontre l’intérêt des nouvelles techniques d’exploration pangénomique dans le
bilan étiologique de la déficience intellectuelle.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Mécanismes moléculaires de la virulence
du pneumocoque
A.M. Di Guilmi1, R. Terrasse1, P. Tacnet2, C. Durmort1, C. Moreau2, C. Gaboriaud2,
T. Vernet1, N. Thielens2, P. Frachet2.
Institut de Biologie Structurale, 41 rue Jules Horowitz, Grenoble
1
, Groupe Pneumocoque ; 2, Groupe Réponse immunitaire aux pathogènes et au soi altéré
Streptococcus pneumoniae est une bactérie Gram-positive commensale des voies respiratoires
supérieures chez l’homme. Ce pathogène est responsable d’infections de type pneumonies,
méningites et sepsis, causant plus d’un million de morts par an, dont la plupart sont des
enfants dans les pays en voie de développement. Malgré le fort impact des infections à
pneumocoque sur la santé humaine, les mécanismes physiopathologiques développés par le
pneumocoque sont encore mal connus. La colonisation de la sphère oro-pharyngée, l’invasion
des tissus profonds et l’échappement au système immunitaire inné par les bactéries sont des
étapes déterminantes conduisant aux infections à pneumocoque.
Notre but est de décrypter au niveau moléculaire les mécanismes de virulence en étudiant
notamment :
- les voies de biosynthèse de la capsule polysaccharidique, un facteur essentiel de la virulence
du pneumocoque,
- les processus d’assemblage du pilus, un complexe multiprotéique présent en surface de la
bactérie et impliqué dans l’adhésion aux cellules hôtes,
- les interactions établies entre les protéines de surface du pneumocoque et les composants
du système immunitaire inné, en particulier les facteurs du complément afin d’identifier de
nouvelles voies d’échappement de la bactérie aux mécanismes de défense humains. Cette
thématique est illustrée par les résultats présentés ici.
En collaboration avec Philippe Frachet et Nicole Thielens (groupe IRPAS) à l’Institut de
Biologie Structurale, nous avons récemment montré que la protéine GAPDH présente en
surface du pneumocoque est reconnue par C1q, protéine de reconnaissance de la voie
classique du complément. Cette interaction conduit à l’activation du complément, à la
différence de la GAPDH humaine, présente en surface de cellules apoptotiques et également
reconnue par C1q. Nous cherchons actuellement à évaluer les déterminants moléculaires de
l’interaction GAPDH bactérienne et GAPDH humaine avec C1q pour comprendre la différence
fonctionnelle dans l’activation du complément et déterminer dans quelle mesure ce processus
est exploité par le pneumocoque pour échapper au système immunitaire humain.
Terrasse, R. Tacnet-Delorme P., Moriscot C., Pérard J., Schoehn G., Vernet T., Thielens N., Di Guilmi
A.M. and Frachet P. Human and pneumococcal cell surface glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase
(GAPDH) proteins are both ligands of human C1q protein. (2012) J. Biol. Chem., 287, 42620-42633.
P a g e | 67
Journée de la Recherche Médicale 2013
L’endopeptidase ECEL1 est associée à
l’arthrogrypose distale autosomique récessive
Dieterich K1,2,4, Monnier N1,3,4, Fauré J1,3,4, Marty I1, Jouk PS2,4, Lunardi J1,3,4 et coll.
1
Inserm U836, Grenoble Institut des Neurosciences, Grenoble, France
Chemin Fortune Ferrini - 38043 Grenoble cedex 09
[email protected]/ [email protected]
2
3
Département de Génétique et Procréation, Hôpital Couple Enfant, CHUG
Institut de Biologie et Pathologie, Laboratoire de Biochimie et Génétique Moléculaire, CHUG
4
Centre de Référence des Anomalies du Développement, Consultations arthrogrypose
Intérêt et cadre de la recherche
Les arthrogryposes distales (DA) représentent un sous-groupe important des arthrogryposes
multiples congénitales (AMC) qui sont caractérisées par des limitations articulaires multiples.
La plupart des gènes identifiés dans les DA sont impliqués dans la constitution de l’appareil
contractile du muscle squelettique. Toutefois, approximativement 60% des patients atteints
de DA ne montrent pas de mutations dans les gènes actuellement connus.
Objectif
Mettre en évidence de nouveaux gènes impliqués dans les DA.
Méthodes
L’étude s’est basée sur l’approche classique par analyse de liaison pangénomique (SNP array),
calcul du lod-score et séquençage des gènes candidats dans deux familles consanguines avec
respectivement 4 et 2 enfants atteints.
Résultats
L’analyse de liaison combinée chez les deux familles permettait d’identifier un locus morbide au
chromosome 2q37 avec une lod-score maximal à 5 (θ = 0), sur 8 Mb. Les gènes CHRNG et
CHRND contenus dans cet intervalle et responsables d’AMC avec pterygia (multiple pterygia
syndrome, OMIM 265000) ne montraient pas de variants nucléotidiques. Nous avons par contre
identifié des mutations dans le gène Endothelin Converting Enzyme Like 1 (ECEL1). Ce gène est
exprimé au cours du développement et en post-natal au niveau du système nerveux central et
périphérique et il joue un rôle primordial dans l’arborisation terminale intramusculaire des
motoneurones des muscles squelettiques. Nous avons identifié une mutation à l’état homozygote
chez les enfants atteints dans chaque famille. Le criblage d’une cohorte de 20 familles atteintes de
DA mettait en évidence 5 autres mutations dans 4 familles distinctes.
Le phénotype clinique était homogène entre tous les patients avec une limitation très
caractéristique de la flexion des genoux, une amyotrophie prédominant aux membres
inférieurs et touchant la langue. L'IRM musculaire montrait un patron d’infiltration graisseuse
reproductible entre tous les patients étudiés. L’EMG ne montrait pas de signes en faveur d’un
dysfonctionnement de la jonction neuromusculaire.
Conclusions
Les mutations du gène ECEL1 représentent une cause fréquente de DA par un mécanisme
physiopathologique nouveau. Un défaut développemental est suggéré par son expression
prénatale prédominante, le tableau clinique non progressif et les données de la souris K.O.
Réf.
Dieterich K, Quijano-Roy S, Monnier N, Zhou J, Fauré J, Smirnow DA, Carlier R, Laroche C, Marcorelles
P, Mercier S, Mégarbané A, Odent S, Romero N, Sternberg D, Marty I, Estournet B, Jouk PS, Melki J,
Lunardi J. The neuronal endopeptidase ECEL1 is associated with a distinct form of recessive distal
arthrogryposis. Hum Mol Genet. 2013 Apr 15;22(8):1483-92. Epub 2012 Dec 11. IF = 7,6.
Cette étude a obtenu des financements de la DRCI du CHUG et de la FRM (pour K.D.).
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Influence du taux de PSA et de son temps de
doublement sur les performances de la TEP à la
18Fluoro-choline dans la recherche du site de
rechute du cancer de prostate
Dubreuil J, Roux J, Bourre JC, Galazzini-Crépin C, Desruet MD, Bolla M, Descotes JL, Vuillez JP
Clinique Universitaire de Médecine Nucléaire, Service de Radiopharmacie, Clinique Universitaire de
Radiothérapie, Service d’Urologie,
CHU de Grenoble,
Unité 1039
Directeur : Catherine Ghezzi
Radiopharmaceutique biocliniques
Faculté de Médecine
Domaine de la Merci
38700 La Tronche
Intérêt et cadre de la recherche
La tomographie par émission de positons (TEP) est habituellement réalisée après injection de
18Fluor-Désoxy-Glucose (FDG). De nouveaux radiopharmaceutiques sont désormais
disponibles pour la réalisation d’une TEP. La 18Fluoro-choline (F-Choline) dispose d’une AMM
pour l’évaluation des adénocarcinomes prostatiques. La principale indication est la localisation
du site de rechute chez des patients dont le PSA est en augmentation.
Objectif scientifique
Le seuil de PSA à partir duquel l'examen est intéressant fait actuellement l’objet de débats.
Nous rapportons les résultats d’une cohorte de patients au CHU de Grenoble.
Patients et Méthode
29 patients consécutifs, âgés de 53 à 85 ans, suivis pour un adénocarcinome prostatique ont
bénéficié entre le 8 février 2011 et le 8 décembre 2011 d'une tomographie par émissions de
positons couplée à une tomodensitométrie à la F-Choline pour progression du taux de PSA.
Pour chaque patient, la dernière valeur du PSA datant de moins de 3 mois était : PSA moy 3.2
ng/ml ; med 2.7 ng/ml ; range 0.74-13.7 ng/ml. Le temps de doublement du PSA (PSAdt)
était calculé selon la formule à partir de la réascension des PSA (PSAdt moy 17.5 mois ; med
12.8 mois ; range 4 – 104.9 mois). Un examen était considéré comme négatif s'il n'existait
aucun foyer d'hyperfixation focalisé suspect de récidive.
Résultats
Sur les 29 examens qui ont été réalisés, 20 étaient positifs (69%) : 9 (31%) étaient en
faveur d’une récidive locale, 9 (31%) pour une atteinte ganglionnaire, et 6 (20%) pour une
atteinte métastatique. Sur 5 patients avec un taux de PSA inférieur à 2 ng/ml, 3 examens
étaient positifs (60%), sur 14 patients avec un taux de PSA compris entre 2 et 3 ng/ml 11
examens étaient positifs (79%), et sur 10 patients avec un taux de PSA supérieur à 3 ng/ml,
9 examens étaient positifs (90%).
Pour un PSAdt supérieur à 24 mois, 3 examens sur 5 étaient positifs (60%), pour un PSAdt
compris entre 12 et 24 mois, 10 examens sur 12 étaient positifs (83%), et pour un PSA dt
inférieur à 12 mois, 10 examens sur 12 était positifs (83%).
Conclusions
Notre série confirme l’intérêt de la réalisation d’une TEP-TDM à la F-choline dans la recherche
du site de récidive. Sa sensibilité semble diminuée pour des valeurs de PSA inférieures à 2
ng/ml ou chez les patients lentement progressifs (PSAdt > 24 mois).
P a g e | 69
Journée de la Recherche Médicale 2013
Etude organisationnelle et structurale
des protéines Murs, impliquées dans
la synthèse de la paroi bactérienne
Sandy FAVINI-STABILE1,2, Carlos CONTRERAS-MARTEL1,3, Nicole THIELENS1, Andréa
DESSEN1,3,4
1. Institut de Biologie Structurale (IBS), Université. Grenoble I
2. Commissariat à l’Energie Atomique (CEA), Grenoble
3. Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS), Grenoble
4. Brazilian National Laboratory for Biosciences (LNBio), Campinas, Sao Paulo, Brazil
IBS
41 rue Jules Horowitz,
38027 Grenoble cedex 1, France
[email protected]
Les résistances aux antibiotiques sont de plus en plus fréquentes, rendant la thérapie des
patients infectés par des souches multi-résistantes très complexe et délicate, voire dans
certains cas inefficace. Il devient donc urgent de trouver des antibiotiques innovants et ainsi
repousser la menace renaissante d’épidémie.
Pour ce faire, la biosynthèse du peptidoglycane – l’un des composants majeurs de la paroi des
bactéries, est une cible qui a amplement fait ses preuves dans la lutte contre les infections
bactériennes et reste d’intérêt thérapeutique. Des études récentes ont en effet suggéré que ce
processus impliquerait des complexes macromoléculaires dont l’intégrité pourrait être
perturbée par de nouveaux antibiotiques. En particulier, il a été suggéré que les ligases Mur –
qui participent à la synthèse de l’unité monomérique du peptidoglycane dans le cytoplasme,
feraient partie d’un complexe multipartite impliquant probablement la transglycosylase MurG
et la protéine du cytosquelette MreB. En outre, ces enzymes ne sont à l’heure actuelle la cible
d’aucun antibiotique médical, malgré leur intérêt thérapeutique largement reconnu. L’objectif
des travaux présentés ici est la caractérisation des interactions protéiques par méthodes
biochimiques, biophysiques et structurales.
Le réseau d’interactions des ligases MurD, MurE, MurF, avec MurG et MreB de Thermotoga
maritima a été étudié par résonance plasmonique de surface et par dot blot, montrant que les
ligases Murs interagissent toutes avec MurG et MreB, ces dernières formant un complexe. La
structure par diffraction aux rayons X des trois ligases a été résolue, suggérant que leur
flexibilité conformationnelle pourrait être importante dans les interactions protéiques.
Ces résultats marquent les premiers pas dans la caractérisation de la machinerie
cytoplasmique de la biosynthèse du peptidoglycane, ouvrant la porte à de nouvelles cibles
thérapeutiques.
P a g e | 70
Journée de la Recherche Médicale 2013
Implication du facteur de transcription HIF-1 et
de l’endothéline-1 dans l’apparition de
l’inflammation systémique et
du remodelage vasculaire induits
par l’hypoxie intermittente chronique
Emmanuelle Gras, Claire Arnaud, Anne Briançon-Marjollet, Peter Carmeliet, Patrick Levy and Diane
Godin-Ribuot.
Laboratoire HP2, Inserm U1042
Faculté de Pharmacie
Domaine de la Merci, La Tronche
Le syndrome d’apnées obstructives du sommeil est une pathologie touchant plus de 5% de la
population d’âge moyen. Il se caractérise par des arrêts répétés de la respiration durant la
nuit, soumettant ainsi le patient à de l’hypoxie intermittente (HI). L’HI entraîne des
complications cardiovasculaires importantes, telles que de l’hypertension, un remodelage
vasculaire et de l’athérosclérose, associées à un stress oxydant et à une l’inflammation
systémique.
Le but de cette étude est d’évaluer l’implication du facteur de transcription HIF-1 et d’un de
ses gènes cibles, l’endothéline (ET-1), dans le développement de l’inflammation systémique et
du remodelage vasculaire induits par l’HI chronique chez la souris. Pour cela, la réponse à l’HI
a été étudiée chez des souris partiellement invalidées pour la sous-unité alpha de HIF-1 et
chez des souris C57Bl/6J traitées par du bosentan (antagoniste non-sélectif des récepteurs de
l’ET-1), à raison de 100mg/kg/j, pendant la période d’exposition à l’HI. Tous les groupes ont
été exposés durant 2 semaines, 8h/j, à des cycles de 1 min d’HI (30s à 5% FiO2 – 30s à 21%
FiO2) ou de normoxie. L’épaisseur intima-media aortique et l’inflammation systémique,
évaluée par l’activation splénocytaire, ont été mesurées dans les différents groupes
expérimentaux.
L’exposition à l’HI induit une prolifération splénocytaire accrue à la concanavaline A par
rapport à la normoxie. L’épaisseur intima-media est également significativement augmentée
par l’HI. Ces effets sont abolis tant par le traitement avec le bosentan que par l’invalidation
partielle de HIF-1α.
En conclusion, cette étude démontre que le facteur de transcription sensible à l'hypoxie HIF-1
et l'endothéline-1 sont impliqués dans le développement de l’inflammation systémique et du
remodelage vasculaire en réponse à l'hypoxie intermittente chronique.
P a g e | 71
Journée de la Recherche Médicale 2013
Evaluation des modifications Vocales précoces
après Chirurgie endocrinienne cervicale
Sébastien Guigard, Nathalie Henrich, Jocelyne Sarfati, Christophe Savariaux, Philippe Chaffanjon
Laboratoire Gipsa-Lab
Département Parole et Cognition, Grenoble
Département de chirurgie thoracique, vasculaire et endocrinienne
CHU de Grenoble
Introduction
La chirurgie endocrinienne cervicale (thyroïdectomie, parathyroïdectomie, curages
ganglionnaires associés) est en plein essor (>50 000/ans en France), concernant une
population jeune et active exposée à une morbidité vocale potentiellement handicapante.
Cette morbidité vocale (causes et conséquences) est actuellement mal connue car très peu
étudiée et notamment selon des critères de jugement subjectifs et variables.
Matériel et Méthodes
Etude prospective observationnelle menée sur 74 patients opérés entre déc 2010 et nov
2011 au CHU de Grenoble. Comparaison de paramètres vocaux pré et post-opératoire (à 4-6
semaines) par évaluation vocale multimodale : examen laryngoscopique souple, autoévaluation vocale (questionnaire Voice Handicap Index VHI-10), enregistrement vocal
(matériel EVA-2, SQ-Lab® avec Temps Maximal de Phonation TMP sur les sons tenus /s/, /z/,
/e/, la Pression Sous-Glottique PSG sur des trains syllabiques « pai » parlés et chantés). Les
interventions chirurgicales font l’objet d’un compte-rendu détaillé avec neuromonitoring
laryngé systématique.
Résultats
Les modifications de score de VHI-10 montrent augmentation significative de la morbidité
ressentie (p<0,0001), avec répartition des scores plus étalée vers les valeurs élevées : 37%
des patients décrivent une gêne vocale (augmentation du VHI-10), et 10% ont une
augmentation de plus de 10 points.
Pour le Temps Maximal de Phonation, on note sa diminution significative sur la voyelle tenue
/e/ (p=0,020), sans différence significative sur les consonnes tenues /s/ et /z/.
Pour la pression Sous-Glottique, on note son augmentation significative sur les intensités
piano (p=0,029) et forte (p=0,012) uniquement sur la tonalité parlée propre, sans différence
significative sur les tonalités chantées.
Discussion
La morbidité vocale précoce ressentie après chirurgie endocrinienne cervicale est non
négligeable : plus d’1/3 des patients décrivent une gêne vocale (VHI-10 augmenté) et 10%
une gène importante.
La modification significative des paramètres aérodynamiques (TMP, PSG) prouve que les
mécanismes de production vocale sont modifiés, ce qui incite à la réalisation d’études
ultérieures des facteurs impliqués.
L’étude des modifications de la prosodie parlée et chantée (données acquises durant cette
étude) est en cours, dans le but de la mise en corrélation avec l’examen laryngoscopique pour
comprendre les mécanismes impliqués.
L’objectif final est double : l’identification des facteurs de risques de modification vocale et
notamment des éléments de technique opératoire éventuellement modifiables ; la mise au
point d’une méthode simple d’évaluation vocale utilisable en consultation
P a g e | 72
Journée de la Recherche Médicale 2013
Antagonist effects of selenium supplementation
as a function of chemical form and dose:
anti-photoageing versus toxic effects.
F Hazane-Puch*, P Champelovier£, J Arnaud*, C Garrel*, F Laporte* and P Faure*¤
*Unité de Biochimie Hormonale et Nutritionnelle, Département de Biochimie,
Toxicologie et Pharmacologie
£
Unité de Cytologie, Département d’Anatomie et de Cytologie Pathologiques
Both from Institut de Biologie et de Pathologie, Centre Hospitalier Universitaire de Grenoble,
CS 10217, 38043 Grenoble
¤
Laboratoire d'étude de la physiopathologie de l'hypoxie (HP2), Inserm U 1042, Faculté de
médecine et de pharmacie, Domaine de la Merci, 38700 La Tronche, France
Background
The biological effect of selenium (Se) is modulated by different factors such as the baseline
patient Se status, the dose, chemical form and duration of the supplementation. The effects of
Se on skin photoageing remain unclear.
Objectives
The aim of this work was to investigate Se antagonist effects as a function of chemical form
and dose in normal human skin fibroblasts (NHSFs). The photoageing protective effects on
UVA-induced damage versus toxic effects triggering cell death were explored.
Methods
Two selenium species were used: an inorganic (sodium selenite, Na2SeO3) and an organic
(selenomethionine, SeMet) forms. Cells were incubated with Na2SeO3 or SeMet for 6 days,
followed or not by UVA radiation, inducing 30% cell death. At not toxic doses, Se absorption
Glutathione Peroxidase 1 (GPX1) activity, selenoprotein W1 (SEPW1) transcript expression,
anti-photoageing effects, cell death-protection, malondialdehyde (MDA)-remaining, matrix
metalloproteinase (MMP)-1 and -3 after UVA irradiation were studied. At toxic doses, cell cycle
and cell death were characterized.
Results
SeMet was better uptaked than Na2SeO3. At not toxic doses, both forms induced GPX1 and
SEPW1 but Na2SeO3 induced MMP1 whereas SeMet decreased MMP3. Under UVA-induced cell
death, Na2SeO3 did not protected NHSFs whereas SeMet protected NHSF from UVA-induced
MMP1 and MMP3. MDA remaining after UVA irradiation was lower after SeMet administration.
Na2SeO3 toxicity was much higher than SeMet, with IC50 at 6.6 and 62.0 μM respectively. At
toxic doses, Na2SeO3 inhibited cell proliferation associated with a blockage in the S-G2 phase
whereas SeMeT did not modulate the cell cycle. Na2SeO3 only induced DNA fragmentation
leading to apoptosis cell death via caspase-3 activation.
Conclusion
Large differences in terms of photoprotection were evidenced according to selenium forms.
SeMet may be a potential agent for the prevention and treatment of skin photoageing.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Etude de la mémoire de travail chez l’enfant
opéré d’un médulloblastome du cervelet
résultats préliminaires en IRM fonctionnelle
Duc Ha HOANG1, Karine GUICHARDET3, Emilie COUSIN4,6, Fanny DUBOIS-TEKLALI3,
Isabelle SCHIFF3, Anne PAGNIER3, Alexandre KRAINIK1,2,4,5
Duc Ha HOANG: Equipe 05, 1Grenoble Institut des Neurosciences, INSERM U836, Grenoble,
2
Université Joseph FOURIER – Grenoble,
3
Clinique de Pédiatrie – CHU Grenoble,
4
UMS IRMaGe– Grenoble,
5
Clinique Universitaire de Neuroradiologie et IRM – CHU Grenoble,
6
Laboratoire de Psychologie et Neurocognition, UMR CNRS 5105, Université Pierre Mendès,
France
France
France
France
France
France
Introduction
Les enfants suivis pour un médulloblastome cérébelleux traités par chirurgie et radiochimiothérapie présentent des troubles cognitifs avec des altérations de la mémoire de travail
(MDT) visuo-spatiale, responsables d’une chute des performances scolaires. L’objectif de cette
étude préliminaire du PHRC multicentrique MEDIR est la description de l’engagement
encéphalique de la MDT propre à la modalité sensorielle et à la nature des informations à
mémoriser.
Matériels et méthodes
Cinq enfants (12,20,6ans) traités pour un médulloblastome cérébelleux ont été examinés en
IRMf BOLD et comparés à 9 enfants sains (11,12,1ans). Tous les sujets étaient droitiers sans
déficit sensoriel avec un QI global de 70-130.
Analyse factorielle 2x2 des activations obtenues avec 4 tâches de N-1 back selon un
paradigme en bloc variant selon la modalité sensorielle utilisée (visuelle ou auditive) et la
nature des informations à mémoriser (verbale ou non-verbale).
Résultats
Chez les enfants sains, la modalité sensorielle engageait de façon bilatérale les aires
sensorielles primaires et secondaires, les lobes pariétaux, les gyrus fusiformes, les gyrus
temporal et frontal moyen gauches, le lobule VI droit du cervelet.
La nature informationnelle engageait de façon bilatérale les lobes frontaux, les lobes
pariétaux, le gyrus temporal supérieur gauche et les lobules VI, Crus I-II, le déclive, le folium,
la pyramide, l’uvula du cervelet.
Chez les patients, 4 sur 5 patients avaient une baisse de MDT non-verbale avec une résection
de Crus II gauche (4/5), l’uvula (4/5), la pyramide (4/5), le folium (3/5), le déclive (2/5). Un
patient qui n’avait pas de trouble de la MDT était le seul à ne pas avoir de lésion de Crus II.
Chez les patients, les activations fonctionnelles étaient diminuées aussi bien au niveau
cérébelleux que cérébral.
Le Crus II gauche était davantage activé dans les taches non verbales.
Conclusion
Le cervelet est engagé dans la MDT chez l’enfant comme cela a été montré chez l’adulte. Les
lésions de Crus II gauche pourraient être responsables des troubles de la MDT, en particulier
chez l’enfant opéré d’un médulloblastome cérébelleux.
Les effets de l’irradiation cérébelleuse sur les réseaux cérébelleux ne sont pas évalués dans
cette étude. Cette étude multicentrique se poursuit avec des nouvelles tâches de n-2 back et
par une étude des connexions cérébro-cérébelleuses en tenseur de diffusion.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Apport de la biologie structurale pour le
développement de nouvelles stratégies
thérapeutiques contre le cancer
Jean-Baptiste Reiser, Anne Chouquet, Violaine Lantez, Ombeline Pessey,
Dominique Housset
Institut de Biologie Structurale, CEA, CNRS, UJF, 41 rue Jules Horowitz, Grenoble
Groupe Réponse immunitaire aux pathogènes et au soi altéré
Notre équipe s’intéresse depuis plusieurs années à la biologie structurale de protéines ayant
un lien avec le cancer.
Un premier projet piloté par D. Housset et que nous menons en collaboration avec l’équipe de
M. Bonneville, du CRCNA de Nantes, a pour but de comprendre les bases structurales de la
reconnaissance d’antigènes tumoraux présentés par les molécules CMH, par les récepteurs du
lymphocyte T (TCR). Etablir le lien entre les interactions inter-moléculaires qu’un TCR peut
établir avec les complexes peptide-CMH, observables grâce aux structures cristallographiques
et quantifiables par différentes techniques biophysiques comme la résonance plasmonique de
surface, et la capacité de ces mêmes complexes peptide-CMH à activer des lymphocytes T et
à activer une réponse immune efficace, est un enjeu majeur pour le développement de
l’immunothérapie. Les données structurales et d’interaction que nous obtenons nous
permettent, par exemple, de nous guider sur les modifications à apporter au peptide antigène
ou au récepteur pour augmenter son pouvoir activateur ou sa spécificité pour l’antigène. Elles
nous ont également permis de comprendre comment une différence allélique pouvait conduire
à une réponse anti-cancéreuse très différente. Comprendre les bases de la réactivité croisée
des TCR pour différents peptides antigènes, qu’ils soient présentés par des cellules saines ou
des cellules cancéreuses peut aussi nous aider à mieux cibler la réponse anti-tumorale. Nos
travaux contribuent donc à mieux comprendre toute la complexité de la réponse cellulaire
anti-cancéreuse, dans le but d’aider à développer des stratégies d’immunothérapie plus
efficaces.
Un deuxième projet, piloté par J.B. Reiser, en collaboration avec l’équipe de C. Cochet du
CEA-Grenoble concerne les aspects structuraux de la protéine kinase CK2. En effet, les
protéines kinases, dont la fonction est la phosphorylation de protéines substrats en utilisant
l’ATP comme source de phosphate, sont d’importants régulateurs des processus cellulaires en
contrôlant de très nombreux événements intracellulaires de transduction du signal. De par
leur fonction et leur implication à toutes les étapes de la vie cellulaire, leur dérégulation est
notamment à la source de nombreuses pathologies cancéreuses. La recherche de petites
molécules inhibitrices de l’activité des protéines kinases est ainsi depuis de nombreuses
années un domaine majeur dans la recherche de nouvelles thérapies. Notre équipe et ses
collaborateurs s’intéressent à la découverte et caractérisation d’inhibiteurs originaux en
utilisant différentes approches de criblage, de biochimie et de biologie structurale. Les
structures qui sont obtenues par cristallographie permettent d’avoir une image à l’échelle
atomique des interactions mises en œuvre par les composés pour inhiber les protéines pour
ensuite avoir une approche de chimie médicale rationnelle dans la conception de molécules
plus efficaces contre le développement des cellules cancéreuses.
Dans notre poster, nous présenterons donc quelques résultats récents obtenus sur ces deux
projets de recherche fondamentale liés à des problématiques de santé humaine.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Anticorps anti-HLA et déterminisme du TRALI
(Transfusion-Related Acute Lung Injury) :
évaluation de l’immunité innée dans
le conflit immunologique
KHOY Kathy(1), (2), PACLET Marie-Hélène(1), NGUYEN Minh Vu Chuong(1), DROUET Christian(1)
(1)
(2)
Université Joseph Fourier, GREPI AGIM CNRS FRE 3405
Laboratoire HLA, Etablissement Français du Sang (EFS) Rhône Alpes, Grenoble
Le TRALI, acronyme de Transfusion-Related Acute Lung Injury, représente un accident
transfusionnel grave par transfusion de produits d’aphérèse et apparaît comme l’une de
premières causes de mortalité transfusionnelle. Il est décrit comme un œdème pulmonaire
inflammatoire majeur avec lésion de la membrane alvéolaire, secondaire à l’activation des
polynucléaires neutrophiles (PNN) au contact de l’endothélium des capillaires pulmonaires.
Actuellement, les mécanismes étio-patholologiques conduisant à cette lésion sont encore mal
connus. Selon la littérature, il est connu mais jamais démontré que la survenue du TRALI met
en cause un conflit immunitaire lié à la présence d’anticorps d’allo-immunisation chez le
donneur, appelés anticorps anti-HLA (Human Leukocyte Antigen). Ces anticorps anti-HLA sont
dirigés spécifiquement contre les antigènes leucocytaires du receveur pour lesquels la
grossesse, la transfusion et la greffe d’organe allogénique sont les trois facteurs donnant lieu
à cette immunisation.
L’objectif de cette étude est de déterminer l’impact fonctionnel des anticorps anti-HLA vis-àvis de leur cible cellulaire, les PNN. Or, il est capital de disposer d’une meilleure
compréhension du rôle de l’immunité innée déterminant le TRALI afin de privilégier au mieux
les retombées apportées pour le patient transfusé : mesures de prévention, proposition d’un
traitement pour les patients à risque…
La connaissance de l’impact des anticorps vis-à-vis du neutrophile est évaluée via son activité
NADPH oxydase (Nox2). Cette activité est mesurée par chimiluminescence par la production
de dérivés réactifs de l’oxygène, les ROS, médiée par Nox2.
Les résultats ont montré que la présence de tous les types d’immunoglobuline G (IgG) induit
une activité modérée de la NADPH oxydase. En présence d’agents primants tels que le LPS
(lipopolysaccharide) ou le fMLP (formyl-Met-Leu-Phe), les PNN sont dans un état de préactivation. La pré-activation des PNN en présence d’IgG induit une activité de la NAPDH
oxydase qui est significativement plus importante en présence d’IgG anti-HLA A2 si les PNN
expriment à leur surface l’antigène A2. La responsabilité directe des anticorps anti-HLA dans
ce mécanisme est donc confirmée. Cette étude préliminaire permet ainsi de poser les bases
stratégiques dans sa prévention et d’améliorer la connaissance de ce syndrome dont le but
ultime est de réduire l’incidence du TRALI.
Mots clés: TRALI, neutrophile, anticorps anti-HLA, activation Nox2
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Anodal iontophoresis of a soluble guanylate
cyclase stimulator induces a sustained increase
in skin blood flow in rats
S Kotzki1,2, M Roustit1,2,3, C Arnaud2,3, J Boutonnat4, S Blaise2,5,
D Godin-Ribuot2,3, J-L Cracowski1,2,3
1
Clinical Pharmacology Unit, Inserm CIC03, Grenoble University Hospital, F-38043.
2
Inserm, U1042, Grenoble, F-38043.
3
Université Joseph Fourier, Grenoble, F-38043.
4
TIMC UMRCNRS 5525, Grenoble, F-38043.
5
Vascular Medicine Department, Grenoble University Hospital, F-38043.
Background And Purpose
The treatment of systemic sclerosis-related digital ulcers is challenging. While the only effective
drugs are prostacyclin analogues, their use is limited by vasodilation-related adverse reactions.
Iontophoresis, a non-invasive drug delivery method, may allow high drug concentration to be
reached in the dermis while avoiding systemic effects. Our objectives were 1) to screen
iontophoretically-administered non-prostanoid IP agonists and soluble guanylate cyclase (sGC)
stimulators for increase in skin blood flow in rats; 2) to test different drug concentrations and
protocols, and 3) to verify safety.
Experimental approach
We screened sGC stimulators (A-350619, SIN-1 and CFM 1571) and non-prostanoid IP
agonists (MRE-269 and BMY 45778) using cathodal or anodal iontophoresis onto the
hindquarters of anaesthesized rats (n = 8 per drug). Then we compared the effect of three
concentrations of candidate drugs. Tolerance was assessed by continuously recording blood
pressure and histopathologic examination. Lastly, we compared continuous vs intermittent
iontophoresis protocols. Skin blood flow was quantified using laser Doppler imaging.
Key Results
Anodal iontophoresis of A-350619 (7.54 mM) induced a sustained increase in cutaneous blood
flow (P=0.008 vs control). All other drugs exhibited poor or no effect on skin blood flow.
Vasodilation with A-350619 iontophoresis was concentration dependent (7.5 mM, 0.75 mM
and 0.075 mM; P<0.001, Jonckheere-Terpstra trend test) and tolerance was good.
CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS.
Continuous, anodal iontophoresis of A-350619 at 7.5 mM, increases cutaneous blood flow with
good local tolerance. Iontophoresis of sGC stimulators should be investigated as potential
local therapy for digital ulceration in patients with scleroderma.
Principales références de l’équipe sur la thématique
Blaise, S. et al. (2010). Oral sildenafil increases skin hyperaemia induced by iontophoresis of
sodium nitroprusside in healthy volunteers. British Journal of Pharmacology, 160(5),
1128–1134.
Blaise, S. et al. (2013). Cathodal iontophoresis of treprostinil induces a sustained increase in
cutaneous blood flux in healthy volunteers. J Clin Pharmacol, 53(19), 58–66.
Blaise, S. et al. (2011). Cathodal iontophoresis of treprostinil and iloprost induces a sustained
increase in cutaneous flux in rats. British Journal of Pharmacology, 162(3), 557–565.
Cracowski, J.-L. et al. (2006). Methodological issues in the assessment of skin microvascular
endothelial function in humans. Trends in pharmacological sciences, 27(9), 503–508.
Roustit, M, et al. (2011). Impaired transient vasodilation and increased vasoconstriction to
digital local cooling in primary Raynaud’s phenomenon. Am J Physiol Heart Circ Physiol,
301(2), H324–30.
Roustit, M et al. (2012). Sildenafil increases digital skin blood flow during all phases of local
cooling in primary Raynaud’s phenomenon. Clin Pharmacol Ther, 91(5), 813–819.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
IRMf BOLD de la réserve cérébro-vasculaire
chez les patients porteurs d’une sténose
artérielle intracrânienne sévère
Krainik Alexandre, Bouvier Julien, Attyé Arnaud, Boudiaf Naila, Troprès Irène, Lamalle
Laurent, Boubagra Kamel, Pietras Johan, Barbier Emmanuel, Tahon Florence,
Detante Olivier, Le Bas Jean-François
Clinique Universitaire de Neuroradiologie et IRM – CHU Grenoble, France
Clinique Universitaire de Neurologie– CHU Grenoble, France
Equipe 5 - Grenoble Institut des Neurosciences, France
Intérêt et cadre de la recherche scientifique
Les sténoses artérielles intracrâniennes sévères (SAIC) s’accompagnent d’un risque de récidive
d’accident vasculaire cérébral (AVC) à 1-2 ans de 20-40%. Le traitement endovasculaire reste
controversé. Une meilleure sélection des patients permettrait de justifier les risques du traitement
endovasculaire. L’étude de la réserve vasculaire par IRM fonctionnelle (IRMf) de la vasoréactivité
cérébrale (VRC) à l'hypercapnie a été proposée pour d’identifier les patients à risque d’accident
ischémique.
Objectifs
Nous présentons 3 études visant à caractériser la réserve vasculaire par IRMf BOLD de la VRC
chez les patients porteurs d’une sténose artérielle intracrânienne serrée.
Matériels et méthodes
Etude N°1 : 100 volontaires (41 femmes ; 47,2±20,9 ans) sans SAIC ont été examinés par
IRMf BOLD lors d’un stimulus hypercapnique. Analyse par SPM8 avec un régresseur dédié.
Etude en régions d’intérêt des territoires des artères cérébrales moyennes (ACM) et calcul d’un
index de latéralité avec IL = [(VRCACMGauche–VRCACMDroite)] / [(VRCACMGauche+VRCACMDroite)] (Attyé
A et al. Hum Brain Map 2013: in press).
Etude N°2 : 20 patients (5 femmes, 60.9 ± 15.5 ans) suivis pour une SAIC (10 a. carotide
interne (ACI), 10 ACM) ont été examinés par IRMf BOLD à 3T lors d’un stimulus hypercapnique
(8%). Mesure de la perfusion basale par contraste de susceptibilité dynamique et calcul des
index de latéralité de VRC (ILACM_VRC), du débit (ILACM_DSC), du volume sanguin cérébral
(ILACM_VSC), du temps de transit moyen (ILACM_TTM) selon la même méthode que dans l’étude
n°1.
Etude N°3 : 10 patients (2 femmes, 67,2±12,6 ans) présentant une SAIC de l’ACI (n=2),
l’ACM (n=5), d’une artère vertébrales (n=3) ont été examinés en IRM (étude n°2). La
saturation en oxygène (StO2) a été calculée en combinant le VSC et le T2’. Calcul de la
consommation en oxygène (CMRO2 = DSCx(1-StO2/100) (Christen T et al. NMR in Biomedicine 2011;24:393), de ILACM de CMRO2 et des corrélations avec les autres ILACM.
Résultats
Aucun effet secondaire n’a été rapporté pendant ou après les examens.
Etude N°1 : Chez les volontaires, l’ILACM_VRC était de 0,01±0,026, IC à 99%=0,01±0,07.
Etude N°2 : Chez les patients, l’|ILACM_VRC| était pathologique [0,08-0,92] pour 4 sténoses
ACI et 4 sténoses ACM. L’ILACM_VRC était inversement corrélé à ILACM_VSC (R=-0,62; p<0,01),
l’ILACM_MTT (R=-0,81; p<0,001) mais pas à ILACM_DSC (R=0,35; p=0,16).
Etude N°3 : Les ILACM VRC étaient [-0,19 ; 0,18] et ceux de la CMRO2 [-0,12 ; 0,07]. Il
existait une corrélation positive entre ILACM_VRC et ILACM_CMRO2 (ρ=0,65 (p<0,01)).
Conclusion : Chez les sujets sains, l’intervalle de confiance à 99% de l’ILACM_VRC était ]-0,06 ;
+0,08[. Chez les patients porteurs d’une SAIC, l’autorégulation s’accompagne d’une élévation du
VSC et du TTM pour maintenir le DSC. Elle s’accompagne d’une diminution de la vasoréactivité,
qui devient pathologique chez 40% des patients. Par ailleurs, l’étude quantitative de
l’oxygénation cérébrale montre l’existence d’un lien entre les altérations de la VRC et celles du
métabolisme cérébral. Cette approche pourrait être utile pour mieux adapter la stratégie
thérapeutique.
P a g e | 78
Journée de la Recherche Médicale 2013
Comparison between Two Generic
Questionnaires to Assess Satisfaction with
Medication in Chronic Diseases
Lehmann A1,2, Delestras S1,2, Roustit M3, Minoves M1, Dobremez V1, Mazet R1,
Baudrant M1,2, Bedouch P1,2, Allenet B1,2.
1 UF Pharmacie Clinique, Pôle Pharmacie, CHU Grenoble.
2 UJF-Grenoble 1 / CNRS / TIMC-IMAG UMR 5525 / Themas, Grenoble.
3 Centre d’Investigation Clinique, Inserm CIC03, CHU Grenoble et
Université Joseph Fourier, Grenoble.
Objective
The objective of this work was to compare two generic questionnaires assessing patients’
satisfaction with medication. In addition we tested whether satisfaction can predict adherence
to medication regimens in patients with chronic diseases, and which dimensions of satisfaction
are most involved.
Methods
This prospective, observational study was conducted over one year in a heterogeneous
population of patients with various chronic diseases. Satisfaction with medication was
assessed by using the TSQM® vII and the SatMed-Q® questionnaires, and adherence to
treatment was assessed with the Morisky-Green questionnaire. Clinical pharmacists
interviewed patients to collect clinical, demographic and therapeutic data.
Results
190 patients were enrolled. patients with Cystic Fibrosis (n = 2) were excluded due to under
representation. Fourteen patients were also excluded because of missing data regarding the
primary endpoint. Therefore, 172 patients were included in the analysis. Both questionnaires
showed excellent reliability and correlation was high (R = 0.70; p = 0.001). Adherence was
correlated with satisfaction with medication whether assessed with the SatMed-Q® (R = 0.23;
p = 0.002) or the TSQMH (R = 0.17; p = 0.02). Among different dimensions of satisfaction,
convenience of use and side effects are prominent predictors of adherence. The dimensions of
the SatMed- Q® were slightly better predictors of adherence than those of the TSQM®.
Among the 150 subjects who rated both questionnaires for clarity and ease of answering, 57
favored the SatMed-Q® and 8 favored the TSQM® vII, while 85 patients did not express any
preference.
Conclusion
Adherence is related to the patient’s satisfaction with medication whether assessed with the
TSQM® vII or the SatMed-Q®. Therefore, these simple questionnaires could be used as
predictive tools to identify patients whos’ adherence needs to be improved and to personalize
patient information and education.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Evolution de la prise en charge des MICI après
les résultats de l’étude SONIC
Lombard T1,2, Baudrant M1,2, G. Bois1, Mathieu N2, Voirin D3, Faucheron JL3, Bonaz B2.
1-UF Pharmacie Clinique, 2- Clinique Universitaire d’Hépato-Gastroentérologie,3-Clinique
Universitaire de Chirurgie Digestive,
Pôles Digidune et Pharmacie, CHU Grenoble, 38043 Grenoble Cedex 9
Introduction
Avec la publication des résultats de l’étude SONIC en 2008 et les recommandations de
l’European Crohn’s and Colitis Organisation (ECCO) en 2009, les années de 2008 à 2011 ont
été une période d’évolution dans la prise en charge des maladies inflammatoires chroniques
de l’intestin (MICI). La stratégie descendante dite "Top Down" est alors devenue une réelle
alternative à la stratégie "Step Up" précédemment préconisée dans la prise en charge de la
maladie de Crohn (MC). Mais qu’en est-il en pratique ?
Patients et Méthodes
Etude rétrospective sur dossiers sur une période de 3 ans (2008-2011) dans la Clinique
Universitaire d’Hépato-Gastroentérologie du CHU de Grenoble. Objectif : analyser le profil, le
type de prise en charge de patients MICI ayant été traités par au moins une perfusion d’un
anti-TNF chimérique, l’Infliximab (IFX ; 5 ou 10 mg/kg) et évaluer l’efficacité et la tolérance
de l’IFX en pratique courante. Recueil de données à partir d’une grille de recueil construite
pour l’étude et validée par deux gastroentérologues et un pharmacien clinicien. Critères
analysés : profil, historique médicamenteux, efficacité (évaluée en date de fin d’étude chez les
patients encore traités par IFX, par indices d’activité clinique et endoscopique), tolérance et
schémas
thérapeutiques
selon
3
stratégies : i)
descendante
avec
association
Immunosuppresseur (Azathioprine)-IFX ("Top Down") en première intention, ii) ascendante
("Step Up") et iii) ascendante rapide ("Step Up rapide") avec association IS-IFX chez des
patients non naïfs en 5-aminosalycilés.
Résultats
121 patients atteints de MICI ont été retenus: 62,0% de MC, 38,0% de rectocolite
hémorragique (RCH). Age médian = 34 ans [16-82]. Stratégie : descendante 34,7% de MC,
2,20% de RCUH (n=1) ; ascendante 50,6% de MC, 89,1% de RCUH ; ascendante rapide
14,7% de MC, 8,7% de RCUH. Rémission clinique sous IFX à la fin de l’étude : 65,3% de MC
(80,8% descendante ; 55,3% ascendante, 63,6% ascendante rapide), 50% de RCUH (0/1
descendante, 51,2% ascendante, 50,0% ascendante rapide). Résection chirurgicale pour
échappement au traitement médical : 8,00% de MC (aucun en stratégie descendante, 13,1%
ascendante, 9,1% ascendante rapide), 19,6% de RCUH. Optimisation du traitement : 18,7%
de MC (15,4% descendante, 23,7% ascendante, 9,1% ascendante rapide), 52,2% de RCUH.
Intolérance : 10,0% de réactivation virale (CMV, herpès, zona), 13,2% de douleurs
articulaires, 24,0% de manifestations cutanées et 10,0% de réaction à la perfusion d’IFX dont
25% ayant motivé l’arrêt de l’IFX (n=3).
Conclusion
Cette étude, en comparaison avec la première couvrant la période 1999-2008 (pré-Sonic)
montre l’essor de la stratégie "Top Down" dans la MC (34,7% vs 1,50%). De plus la stratégie
"Top Down" semble permettre un taux de rémission supérieur à la stratégie "Step Up"
L’étude SONIC reposant uniquement sur des patients ayant une MC, la prise en charge de la
RCUH n’a pas connu le même tournant dans sa stratégie thérapeutique, pour l’instant. De
plus, le faible nombre de patients ayant bénéficié d’une stratégie descendante ou ascendante
rapide ne nous permet pas d’évaluer l’efficience de l’IFX dans la RCUH.
Etude SONIC- Colombel JF et al. N Engl J Med 2010 ;362 :1383-95.
P a g e | 80
Journée de la Recherche Médicale 2013
Prélèvement respiratoire à Aspergillus chez les
patients immunocompétents de réanimation
Maxime Lugosi,
Service de réanimation médicale, Université de Grenoble, CHU Grenoble, Pr JF Timsit
Université de Grenoble, Institut Albert Bonniot, Equipe 11 : épidémiologie clinique des cancers des voies
aériennes et des patients de réanimation. Responsable JF Timsit
Corinne Alberti,
Unité d’épidémiologie Clinique, Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, CHU Robert
Debré, Université Denis Diderot Paris 7. Responsable C Alberti
Carole Schwebel,
Service de réanimation médicale, Université de Grenoble, CHU Grenoble, Pr JF Timsit,
Aurélien Vésin,
Université de Grenoble, Institut Albert Bonniot, Equipe 11 : épidémiologie clinique des cancers des voies
aériennes et des patients de réanimation. Responsable JF Timsit
Département de biostatistique, organisation OUTCOMEREA, Paris,
Jean-François Timsit,
Service de réanimation médicale, Université de Grenoble, CHU Grenoble, Pr JF Timsit
Université de Grenoble, Institut Albert Bonniot, Equipe 11 : épidémiologie clinique des cancers des voies
aériennes et des patients de réanimation. Responsable JF Timsit,
Elie Azoulay,
Service de réanimation médicale, Groupe de Recherche Respiratoire en Réanimation oncohématologique, Hôpital Saint-Louis, Université Denis Diderot, Paris 7.
Intérêt : l’aspergillose pulmonaire est une maladie grave dont l’incidence semble en
augmentation, notamment dans les services de réanimation. Bien qu’elle soit surtout décrite
chez les sujets immunodéprimés, certains patients de réanimation ne présentant pas les
facteurs classiques d’immunodépression développent une aspergillose pulmonaire invasive,
notamment du fait d’une baisse transitoire de l’immunité faisant suite à un état critique
appelée immunodépression post agressive.
Objectif: évaluer les facteurs de risque et le pronostic associés à au moins un prélèvement
respiratoire positif à Aspergillus chez les patients immunocompétents hospitalisés en
réanimation.
Méthode : étude cas-témoins appariés à partir d’une base de données multicentrique de
réanimation: la base OUTCOMEREA. Chaque cas a été apparié avec 5 contrôles n’ayant pas de
prélèvement positif à Aspergillus sur le score de gravité IGS II, la durée d’hospitalisation égale
ou supérieure aux délais entre l’admission et le prélèvement positif chez le cas et le motif
d’admission en réanimation. Une analyse de survie a été réalisée afin de déterminer le
pronostic des cas et des témoins.
Résultats : 66 cas et 330 témoins ont été inclus. Parmi les 66 cas, 5 (8%) avaient une
aspergillose invasive certaine, 18 (27%) une aspergillose probable et 43 (65%) étaient colonisés.
Les facteurs de risque indépendants d’avoir un prélèvement aspergillaire étaient le score de
SAPSII dans les 3 jours avant le prélèvement [odds ratio (OR), 1,10 ; intervalle de confiance à
95% [IC95%], 1.00-1.21] ; le syndrome de détresse respiratoire aigue [OR, 2,36 ; IC95% 1,144,89] ; et comparé à l’absence de traitement par corticoïdes, un traitement par corticoïdes au
long cours [OR, 5,87 ; IC95% 1,76-19,57] ou une corticothérapie débutée en réanimation [OR,
10,03 ; IC95% ; 3,98-25,26]. La mortalité à 28 jours n’était pas statistiquement différente entre
les cas et les témoins [rapport de risque, 0,66 ; IC95%, 0,41-1,08 ; p=0,1) ou entre les sous
groupes des cas ou chez les cas non traités.
Conclusion : les patients immunocompétents hospitalisés en réanimation et présentant un
prélèvement positif à Aspergillus sont plus sévères avec une fréquence plus importante de
syndrome de détresse respiratoire aigue et de corticothérapie. Un prélèvement positif à
Aspergillus correspond le plus souvent à une colonisation et n’était pas associé avec une
surmortalité. Une étude prospective est nécessaire afin d’optimiser la stratégie diagnostic et
thérapeutique.
P a g e | 81
Journée de la Recherche Médicale 2013
Taux d’aneuploïdies spermatiques lors du
lymphome et au décours des traitements :
quand vaut-il mieux envisager un projet
d’enfant?
G Martinez1,2, M Le Mitouard1,2, C Lamare3, C Thomas1, J Auger4, L Bujan3, S Hennebicq1,2
1 – Laboratorie d’Aide à la Procréation-CECOS, CHU de Grenoble, 38043 GRENOBLE cedex 9
2 – Equipe GIT, Laboratoire AGIM, FRE 3405, 38700 LA TRONCHE
3 – CECOS de Toulouse, Groupe de recherché en fertilité humaine EA3694, CHU de Toulouse
4 – CECOS Paris Cochin, Maternité de Cochin, Bd Port-Royal, 75014 PARIS
Introduction : Les lymphomes sont la seconde pathologie maligne la plus fréquente chez
l'homme en âge de procréer. Les progrès des traitements antinéoplasiques permettent
aujourd'hui à une majorité de patient d'entrer en rémission ou de guérir, mais parfois au prix
d'effets secondaires impactant directement la qualité de vie post-traitement. Chimiothérapie et
radiothérapie possèdent un effet gonadotoxique qu'il est primordial de prendre en compte chez
ces hommes jeunes qui auront un désir de paternité dans les années suivants leurs traitements.
Un risque d'anomalie génétique lié aux traitements peut persister au retour de la
spermatogénèse, en particulier le risque d'aneuploïdies dans les spermatozoïdes. Un désir de
procréation post-traitement fait donc émerger la question de l'utilisation des spermatozoïdes
congelés avant traitement versus ceux créés de novo après traitement. Ce poster présente les
résultats de l'analyse de la fréquence des aneuploïdies dans le génome des spermatozoïdes chez
des patients atteints de lymphomes dans les deux ans suivant la fin des traitements.
Matériel et méthodes : Entre 2003 et 2008, un total de 105 personnes venant au CECOS pour
des dons de sperme ou cryoconservation avant vasectomie (témoins, n=29) ou avant traitement
gonadotoxique pour lymphome (patients, n=76) ont été recrutés dans le cadre du PHRC
GAMATOX. Cinq recueils de sperme ont été réalisé par patient : un recueil avant traitement (T0),
puis quatre recueils respectivement trois (T3), six (T6), douze (T12) et vingt-quatre mois (T24)
après la fin des traitements. La fréquence des aneuploïdies a été analysée par la technique
d'hybridation in situ fluorescente sur spermatozoïdes (sperm-FISH) à l'aide de sondes
centromériques des chromosomes 18, X et Y. 5000 cellules sont analysées par échantillon, la
moitié de façon manuelle sur un microscope à épifluorescence et l'autre moitié de façon
automatisée sur un automate Metafer (R) de chez Metasystems (R).
Résultats : A T0, nous observons une différence significative (t=-4,76, df=77,46, p=8,73e-06, S)
entre les témoins et les patients avec une moyenne des taux d'aneuploïdies respectivement de
0,56% et de 0,78%. Cette différence persiste lorsque l'on isole les différentes anomalies (disomie
des chromosomes sexuels, disomie du chromosome 18 et diploïdie). Nous observons à T3 une
hausse significative du taux d'aneuploïdie à 1,09% (t=-4,46, df=44,20, p=5,63e-05, S) puis une
décroissance à 0,79% à T6, qui se poursuit avec 0,6% à T12, pour atteindre à T24 un taux
similaire à celui observé chez les témoins (t=1,59, df=60, p=0,12, NS). Les disomies XY sont à
elles seules responsables du profil d’évolution du taux total d'aneuploïdie (T0=0,38%, T3=0,74%,
T6=0,52%, T12=0,34%, T24=0,28%).
Conclusion : Nos observations vont permettre aux praticiens de mieux informer les patients
atteints de lymphomes des conséquences des traitements sur leur spermatogénèse. Il est
préférable pour ces patients d'attendre au moins deux ans avant d'envisager une AMP avec
sperme frais. Cette étude présente également pour la première fois des données sur les
aneuploïdies spermatiques avant traitement gonadotoxique pour une large cohorte de patients
atteints de lymphome et montre que ces taux sont significativement supérieurs à ceux de la
population témoin. Enfin, la prédominance des disomies XY mise à jour ici est le reflet d'un
dysfonctionnement lors de la méiose I qui soulève plusieurs hypothèses dont celle d'une action
délétère des traitements plus spécifique à cette phase.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Intérêt de la fluxmétrie laser Doppler pour
l’étude comparée du flux sanguin oculaire chez
l’homme et l’animal soumis à l’hyperoxie
Marielle Mentek1, Thierry Zhou1,3, Fréderic Truffer2, Mario Bernabei2, Diane Godin-Ribuot1,
Samuel Verges1, Florent Aptel1,3, Jean-Paul Romanet3, Martial Geiser2, Christophe Chiquet1,3
1 Laboratoire HP2 INSERM U1042, , Université Joseph Fourier, Grenoble
2 Clinique Universitaire d’ophtalmologie, Plateforme de fluxmétrie, Centre Hospitalier
Universitaire de Grenoble, Université Joseph Fourier, Grenoble
3 Haute Ecole de Suisse Occidentale Valais, Sion, Suisse
Objectifs
Deux prototypes de fluxmètres laser Doppler (LDF), adaptés à l’homme et au petit animal
(rat), ont été développés afin d’étudier l’autorégulation du flux sanguin rétinien et de la tête
du nerf optique chez le patient atteint du syndrome d’apnées du sommeil (SAS) et son modèle
expérimental, le rat soumis à l’hypoxie intermittente (HI). Cette stratégie de recherche
translationnelle a pour but de quantifier les altérations du flux sanguin oculaire lors du SAS et
les mécanismes impliqués. Le but de cette étude est d’évaluer la régulation du flux sanguin
oculaire lors d’une épreuve d’hyperoxie.
Méthodes
Les sujets sains (n=8) respiraient un mélange gazeux (60% O2) à l’aide de l’altitrainer, afin
d’obtenir une SaO2 de 100%. La mesure du flux oculaire est réalisée au niveau de la tête du
nerf optique avec le LDF (enregistrement continu du volume, vélocité et flux, contrôle du fond
d’oeil). Ce travail est réalisé au sein de la plateforme de fluxmétrie au sein de la clinique
universitaire d’ophtalmologie, CHU de Grenoble.
Au sein de l’unité INSERM U1042, les rats Wistar anesthésiés (n=10) étaient immobilisés sur
une table stéréotaxique modifiée permettant la rotation et le positionnement micrométrique
du LDF. Le fond d’oeil était illuminé à l’aide d’une lumière verte et l’image capturée à l’aide
d’une camera CCD. L’animal anesthésié (buprénorphine-xylazine-valium) était intubé et
ventilé mécaniquement pendant la stimulation gazeuse (air ambiant ou 100% O2).
Résultats
Chez l’homme, après 15 minutes d’inhalation d’oxygène, la vélocité, le volume et le flux de la
tête du nerf optique diminuaient respectivement de 0,5 ± 10,42 %, 18,2 ± 23,7 % et 18 %
± 21,5 (p=0,001) (Moyenne ± Ecart-type). Chez le rat, 4 minutes d’inhalation d’oxygène
aboutissait à une diminution de 12,9 ± 6 % de la vélocité, 6,4 ± 10,3 % du volume et 20,5 ±
8,5 % du flux de la tête du nerf optique (p=0,01).
Conclusion
Chez l’homme et le rat sains, la fluxmétrie laser Doppler permet d’étudier la régulation du flux
sanguin de la tête du nerf optique lors d’un stimulus gazeux, notamment l’inhalation
d’oxygène. D’autres épreuves physiologiques sont actuellement testées pour étudier les
mécanismes de vasoréactivité chez les deux espèces (hypoxie, hypercapnie, stimulation
lumineuse ou flicker). A terme, l’étude de ces mécanismes chez les patients SAS et le rat
soumis à l’HI permettra de comprendre la physiopathologie des neuropathies optiques
ischémiques chez le patient apnéique.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
De nouveaux outils théranostiques pour le
diagnostic des réarrangements ROS1 dans les
adénocarcinomes pulmonaires
MESCAM-MANCINI Lénaïg, CECCALDI Françoise, BETHIER Régine, CADET Corine,
DAVID-BOUDET Laurence, BRAMBILLA Elisabeth, LANTUEJOUL Sylvie, Mc LEER- FLORIN Anne
Département d’Anatomie et Cytologie Pathologiques
Plateforme de Génétique Moléculaire des Tumeurs
Institut de Biologie et Pathologie, CHU Grenoble BP271 38043 Grenoble Cedex 9
Institut Albert Bonniot CRI INSERM/UJF U823
Equipe 02 - Bases moléculaires de la progression des cancers du poumon, Pr Elisabeth Brambilla
Rond-point de la Chantourne 38706 La Tronche Cedex
Intérêt et cadre de la recherche : Des réarrangements du proto-oncogène ROS1, induisant
une activité tyrosine kinase constitutive, ont récemment été décrits dans des carcinomes
pulmonaires. Ces réarrangements définissent un nouveau sous-groupe moléculaire regroupant 1,2
à 1,7% des carcinomes pulmonaires non à petites cellules. Les translocations ROS1 induisent une
activité tyrosine kinase constitutive, sensible au crizotinib, un inhibiteur ciblant également les
kinases ALK et MET.
Objectif scientifique : Le but de cette étude était de proposer un algorithme diagnostique des
réarrangements ROS1, afin de faciliter leur détection à l’aide de nouveaux outils
théranostiques. Pour ce faire, nous avons testé des adénocarcinomes pulmonaires EGFR, KRAS
et ALK non mutés (« triple négatifs »), ces altérations étant mutuellement exclusives avec les
réarrangements ROS1.
Méthodes : 80 adénocarcinomes « triple négatifs » ont été testés à la fois par
immunohistochimie (IHC), à l’aide de l’anticorps D4D6 dirigé contre la protéine de fusion ROS1
issue du réarrangement génique, et par hybridation in situ en fluorescence (FISH). Ces
techniques ont été réalisées sur des coupes sériées issues de tissus fixés et inclus en paraffine.
Des sondes dites « de séparation » ont été utilisées pour la technique FISH, permettant ainsi la
détection de toutes les translocations de ROS1, indépendamment du partenaire de fusion.
Résultats : 5 (6,3%) adénocarcinomes présentant un réarrangement de ROS1 ont été
diagnostiqués. Tous étaient caractérisés à la fois par l’expression immunohistochimique
cytoplasmique et membranaire de la protéine de fusion ROS1, et par un réarrangement du
gène ROS1 mis en évidence par FISH, dans plus de la moitié des noyaux des cellules tumorales
(seuil de positivité >15%). Dans un seul de ces cas, la FISH montrait un patron de
translocation classique (deux signaux séparés) ; dans les 3 autres cas, on observait un patron
variant, avec la perte des signaux 5’ télomériques. Tous les cas étaient des stades avancés,
survenant chez des patients non ou peu fumeurs, et avec une architecture solide et acinaire à
l’examen histologique.
Conclusion : Cette étude nous a permis de valider de nouveaux outils théranostiques, ainsi
que la pertinence de l’utilisation d’un algorithme diagnostique pour la mise en évidence des
réarrangements ROS1. Une mise en évidence basée sur la co-détection de la protéine de fusion
et du réarrangement génique ROS1 est à présent proposée aux patients porteurs d’un
adénocarcinome « triple négatif » sur la plateforme de génétique moléculaire des cancers du
CHU de Grenoble. Cette stratégie est particulièrement indiquée chez des patients non ou peu
fumeurs, à un stade avancé, puisque la prévalence des ces réarrangements dans cette
population sélectionnée atteint plus de 6% dans notre série, alors que moins d’une
cinquantaine de cas ont été diagnostiqués dans le monde.
McLeer-Florin A et al. Dual IHC and FISH testing for ALK gene rearrangement in lung adenocarcinomas in a routine
practice: a French study. J Thorac Oncol. 2012 Feb;7(2):348-54.
Gout S et al Abnormal expression of the pre-mRNA splicing regulators SRSF1, SRSF2, SRPK1 and SRPK2 in non small
cell lung carcinoma. PLoS One. 2012;7(10):e46539.
Lantuejoul S et al. Telomere maintenance and DNA damage responses during lung carcinogenesis. Clin Cancer Res.
2010 Jun 1;16(11):2979-88
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Sugar-sweetened beverages and body weight in
children and adolescents : a systematic review
and meta-analysis of randomized trials
C. Minebois1, J.L. Cracowski1,2, A.L Borel2,3, M. Roustit1,2
1
Clinical Pharmacology Unit, Inserm CIC03, Grenoble University Hospital, France.
2
Inserm U1042, Université Joseph Fourier, Grenoble, France.
3
Endocrinology department, Grenoble University Hospital, France.
Introduction
Obesity can be defined as excessive accumulation of fat in adipose tissue. Obesity has been a
major global public health problem since the end of the 20th century. According to the World
Health Organization, the worldwide prevalence of childhood overweight and obesity increased
from 4.2% in 1990 to 6.7% in 2010. This trend is expected to reach 9.1% in 2020.
Obesity is caused by a complex interaction between the environment, genetic predisposition,
and human behavior. Increased consumption of sugar-sweetened beverages (SSB) coincided
with the increasing prevalence of obesity. However, whether reduced SSB consumption could
reduce body weight remains controversial. A recent meta-analysis was unable to demonstrate
that reducing SSB consumption reduced Body Mass Index (BMI). However, recent large,
randomized trials not included in this previous work brought new insights in this question.
Methods
This systematic review followed the PRISMA statement guidelines. Data sources included:
Medline (1950-2013), the Cochrane Central Register of Controlled Trials (1975-2013), Google
Scholar and Web of Science (1975-2013).
Eligibility criteria for study selection included randomized, controlled trials assessing the
impact of reduced SSB consumption on BMI or BMI z-score in children and adolescents
(aged<18). No publication date was imposed. All data were extracted by the same
investigator from the original research report using RevMan 5.2 (The Cochrane Collaboration,
2012). Patients characteristics, study design, intervention type and outcomes were extracted
for each study and the risk of bias was rated as low, unclear or high for randomization,
blinding, incomplete outcome data and selective reporting. The risk of publication bias was
assessed with funnel plots.
Analyses were performed using the generic inverse variance. As all studies did not report the
same outcome (BMI or BMI-z-score) we used the standardized mean difference as effect size
indicator. Fixed or random effect models were used according heterogeneity between studies.
Results
Seven studies were included in this meta-analysis. Some studies analyzed the impact of nocaloric beverage home delivery (N=3), whereas others assessed the impact of educational
programs to decrease SSB consumption (N=3). One study combined educational program and
delivery of milk beverages.
The standardized mean difference in BMI or BMI-z-score for all studies was 0.06 [-0.04 to
0.16] kg/m² (P=0.25). Secondary analyses showed that home delivery of no-caloric
beverages significantly decreased BMI by 0.2 [0.08-0.33] kg/m² (P=0.002) but not
educational programs (P=1). Funnel plots did not suggest any risk of publication bias.
Conclusion
This meta-analysis did not demonstrate that reducing SSB consumption was associated with a
decrease in BMI. However, subgroup analysis shows that home delivery of non-caloric
beverages significantly decreases BMI while educational programs do not.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Biological diagnosis of Thrombotic
Thrombocytopenic Purpura: nothing but eyes?
Julie Mondet1,2, Alban Deroux3, Francoise Sarrot-Reynauld3, Laurence Bouillet3,
Maxime Lugosi4, Pascal Mossuz1,2
1
Therex, TIMC-IMAG, CNRS Université Joseph Fourier; La Tronche, France; 2Institut de
Biologie et Pathologie, Laboratoire d’hématologie cellulaire ; 3 Department of Internal
Medicine, Grenoble University Hospital, Grenoble ; 4 Department of reanimation, Grenoble
University Hospital, Grenoble
Thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP) diagnosis is based on the association of
mechanical
haemolytic
regenerative
anemia
with
schistocytes,
consumptive
thrombocytopenia and typically includes neurological symptoms and end-organ damage. An
optimal treatment with plasma exchange has decreased mortality rate from 90% to less than
20%. Fragmented red cell (%FRC) measurement has been described as a revolutionary
automated laboratory method for shistocytes assay in the diagnosis of thrombotic
microangiopathies, and thereby in therapeutic decision making. The measurement of FRC%
is based on a double gating selection on the reticulocyte channel scattergram according to
forward scatter and intensity of fluorescence. It combines rapidity, capacity to analyse
numerous cells and huge reduction of inter-individual variability compared to reference
method using microscopic examination. A %FRC below a threshold at 1% had an excellent
negative predictive value especially in normocytic red blood cells and allowed biologists to
exclude the presence of shistocytes without microscopic evaluation on blood smears.
However, we urge caution for the use of %FRC since the death of a 72-year old woman from a
typical TTP with several %FRC below the significant threshold. In fact, she was brought to the
hospital for sudden neurological disorders with right arm paresis and transient aphasia. In her
clinical history, she was known to have untreated chronic hepatitis C with extrahepatic
manifestations such as fatigue, cryoglobulinemia and distal sensory neuropathy. An angio-MRI
realized in emergency to exclude stroke was normal. Admission laboratory investigation
results revealed hemoglobin of 10.2 g/dL, mean corpuscular volume 90.3 fL, reticulocyte count
of 178 × 109 cells/l, platelet count of 14 × 109 cells/l, lactate dehydrogenase of 508 (normal
range, 84-246 U /L) and haptoglobin <0.1 g/l. The combination of haemolytic anemia,
thrombocytopenia and neurological disorders evoked a TTP. From the first day to fifth day of
the hospitalization, six %FRC were done. During the first four days, %FRC results were
between 0 and 0.16. At the fifth day, % FRC reached 0.7% but never rose to 1%. The lack of
significant automated schistocytosis delayed the patient’s transfert in an intentive care unit
and the setting up of plasma exchange. Unfortunately, the patient died of hypoxic cardiac
arrest on the fifth day of evolution. Retrospective blood smears examination reveals
schistocytosis ranging from 2 to 3.5%. Moreover, diagnosis of TTP was confirmed by the
absence of ADAMTS13 activity (<3%) and the presence of anti-ADAMTS-13 antibodies to 40.5
U/ml (standard <15 U/ml). Our patient’s case gives rise to several issues on the diagnostic
value of automated %FRC. The cutoff value of %FRC for TTP of 1% must be interpreted with
caution especially in case of cryoglobulinemia. Known for erroneous white blood cells and/or
platelet counts, cryoglobulinemia could hypothetically interfer with %FRC measurements.
Furthermore, no quality control and standards are nowadays available for %FRC.
In conclusion, we argue for caution on management of patient with suspicion of TTP based on
automated %FRC determination. Microscopic examination of blood smears, even though it
requires high skillness, should remain the reference method to eliminate shistocytosis. Finally,
absence of schistocytosis should not overpass clinical expertise.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Absolute perfusion measurements and
associated iodinated contrast agent time course
in brain metastasis: a study for synchrotron
stereotactic radiotherapy clinical trials
Layal OBEID123, Pierre DEMAN123, Alexandre TESSIER4, Jacques Balosso1234, François
ESTEVE1234, Jean-François ADAM1234.
Contact :[email protected]
1
INSERM, U836, BP 170, Grenoble Cedex 9, F-38042, France;
Université Joseph Fourier, Institut des neurosciences, B.P. 170, Grenoble Cedex 9,
F-38042, France;
3
European Synchrotron Radiation Facility, B.P. 220, Grenoble Cedex 9, F-38043, France;
4
Grenoble University Hospital. B.P. 217. 38043 Grenoble Cedex, France
2
Purpose
Synchrotron stereotactic radiotherapy (SSRT) is an innovative treatment combining the
selective accumulation of heavy elements in tumors with stereotactic irradiations using
medium energy x-rays. Phase I/II clinical trials on brain metastasis are underway at the
European Synchrotron Radiation Facility using intra-venous infusion of iodinated contrast
agents. The radiation dose enhancement depends on the amount of iodine in the tumor and
its time course. The quantitative iodine bio-distribution in human brain metastasis was
compared for two infusion protocols. A potential correlation between the usual brain perfusion
parameters and the post-infusion mean iodine concentration in the metastasis was also
studied.
Materials and Methods
Two infusion protocols were evaluated on 17 patients: a bolus of iodinated contrast agent (40
ml, [400mg/ml]) was injected at 4ml/s, followed by a steady-state infusion (160 ml at 0.25
ml/s, 5 patients or 0.5 ml/s, 12 patients) in order to achieve a stable amount of iodine in the
metastasis during the treatment. Forty images of the pathological area were acquired on a
multi-slice CT scanner during the iodine infusion and washout time course. Absolute iodine
concentrations and quantitative perfusion maps were derived from these images.
Results
The 2nd protocol led to an increased post-infusion mean iodine concentration (over thirty
minutes) but a lower correlation between these concentrations and perfusion parameters
when compared to the 1st protocol.
Conclusions
This study shows that a suitable stable amount of contrast agent can be reached in the
metastasis for SSRT irradiations. Moreover, perfusion measurements can be helpful in the
patient recruitment process.
Adam JF et al. (2003). International Journal Of Radiation Oncology Biology Physics 57(5):
1413-1426
Adam et al. (2005), International Journal of Radiation Oncology Biology Physics 61 1173-82
Biston et al. (2005), Cancer Research 64 2317-23
Joubert et al. (2005), International Journal of Radiation Oncology Biology Physics 62 1486-96
Prezado Y et al. (2009). Medical Physics 36(3): 725-733
Edouard M et al. (2010). Medical Physics 37(6): 2445-2456
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Importance du tonus vagal et de la
vulnérabilité émotionnelle dans la maladie de
Crohn et le SII: implications thérapeutiques
Pellissier Sonia, Dantzer Cécile, Mondillon Laurie, Trocme Candice, Mathieu Nicolas, Faure
Patrice, Canini Frederic, Bonaz Bruno.
Adresse postale : Université de Savoie – Département de Psychologie – Site de Jacob
Bellecombette. BP 1104- 73011 Chambéry
Laboratoire : Grenoble Institut des Neurosciences – INSERM U836- Equipe 8 « Stress et
Interaction Neurodigestives »
Responsable : Pr Bruno BONAZ
Adresse du laboratoire : Site Santé BP 170- 38042 Grenoble cedex 9
Le stress et les affects négatifs sont des facteurs importants dans les maladies inflammatoires
cryptogénétiques de l'intestin et les troubles fonctionnels tels que le syndrome de l'intestin
irritable. Le nerf vague joue un rôle tant sur le plan de l'inflammation et de la douleur que sur
le plan de la régulation émotionnelle au cours du stress. Le but de ce travail est d'étudier le
lien fonctionnel entre le tonus vagal et les axes du stress et de l’inflammation dans la maladie
de Crohn et le SII en comparaison de sujets sains.
L'étude a été réalisée chez 76 sujets âgés de 40±12 ans (27 sujets sains; 27 Crohn en
rémission; 30 SII). Le tonus vagal a été évalué par la variabilité cardiaque issue de l'analyse
fréquentielle de l'électrocardiogramme (ECG). A leur arrivé au laboratoire (8h00), les sujets
remplissent des questionnaires psychologiques permettant d'évaluer l'anxiété (STAI), et la
symptomatologie dépressive (CESD); par la suite ils sont équipés d'électrodes et d'un cathéter
placé dans la veine du coude. Suite à une phase de repos de 60 min, l'ECG est alors
enregistré pendant 10 min en position assise. Le cortisol a été mesuré dans la salive la veille à
8h00 et à 22h00. Les catécholamines, le cortisol, les cytokines TNF-alpha, IL1 et IL6 ont été
mesurés dans les prélèvements sanguins effectués à l'issue de l'ECG de repos.
L'analyse préliminaire montre un effet significatif de la pathologie sur les variables
psychologiques. Les patients souffrant d'un Crohn ou d'un SII ont des scores d'anxiété (39±2 et
42±2 respectivement) et de symptomatologie dépressive (14±1 et 20±1 respectivement) plus
élevés que les sujets sains (anxiété: 31±2; symptomatologie dépressive:9±1). Une interaction
significative est observée entre le tonus vagal et la pathologie pour le cortisol salivaire vespéral,
l'adrénaline et le TNF alpha. Ceci se traduit par une relation inverse entre le tonus vagal et la
concentration plasmatique de TNF-alpha dans le Crohn (r= -0.45; p=0.04) où le taux de TNFalpha est d'autant plus bas que le tonus vagal est élevé. Dans le SII, le tonus vagal est en relation
avec le taux d'adrénaline plasmatique (r= -0.43; p=0.02): un tonus vagal élevé est associé à une
faible concentration plasmatique en adrénaline. De plus, la concentration d'adrénaline corrèle
positivement avec les scores d'anxiété (r=0.25; p=0.02) et de symptomatologie dépressive (r=
0.29; p=0.009). Chez les sujets sains, le taux vespéral du cortisol salivaire est inversement
corrélé (r= -0.38; p=0.06) au tonus vagal de repos. Cette corrélation n'est plus observée dans le
Crohn et dans le SII. Ceci traduit l'existence d'un découplage fonctionnel entre le système
nerveux autonome et l'axe corticotrope dans ces pathologies.
Ces résultats soulignent l'importance du tonus vagal dans la régulation du TNF-alpha dans le
Crohn et dans l'axe sympatho-adrénergique dans le SII. Ils mettent en avant l'intérêt et
l'importance d'une prise en charge centrée sur le vague et la régulation émotionnelle
(neurostimulation vagale, hypnose, mindfulness, cohérence cardiaque etc.) dans ces pathologies.
Ce projet de recherche a été financièrement soutenu par la SNFGE et l'Association François
Aupetit et la DRC (CHU de Grenoble).
Pellissier S, Dantzer C, Canini F, Mathieu N, Bonaz B. Psychological adjustment and autonomic
disturbances in inflammatory bowel diseases and irritable bowel syndrome.
Psychoneuroendocrinology. 2010 Jun;35(5):653-62.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Mécanismes de synthèse de la paroi du
pneumocoque et résistance aux β-lactamines
J. PHILIPPE, A. ZAPUN, T. VERNET
Groupe Pneumocoque, Institut de Biologie Structurale, 41 rue Jules Horowitz, Grenoble
Streptococcus pneumoniae (le pneumocoque) est une bactérie à Gram positif responsable
chaque année de la mort de 1,6 millions de personnes dans le monde. L’usage intense des β–
lactamines au début du vingtième siècle a permis de soigner de nombreuses infections à
pneumocoques. En revanche, elle a aussi engendré la sélection massive de souches
résistantes à ces antibiotiques. Une des thématiques de notre groupe est de mieux
comprendre les mécanismes de résistance dans le but de permettre la découverte de
nouveaux antibiotiques efficaces chez les souches résistantes.
Les cibles des β–lactamines sont des enzymes impliquées dans la synthèse de la paroi
bactérienne, structure essentielle au maintien de l’intégralité de la cellule face à la pression
osmotique. Il s’agit de protéines membranaires appelées PBPs (Penicillin Binding Proteins)
dont l’activité enzymatique permet l’assemblage du peptidoglycane, composant essentiel de la
paroi. Les β–lactamines miment le substrat de la réaction et se fixent au site catalytique des
PBPs, ce qui empêche ce substrat de s’y placer, et donc la synthèse de se produire.
Des travaux menés au sein du groupe ont permis de comprendre les mécanismes moléculaires
permettant à des souches cliniques de pneumocoques résistants d’échapper à l’action des β–
lactamines. Nous exposons dans ce poster les mutations qui ont été détectées sur des PBPs
issues de ces souches, responsables de la perte d’inhibition de leur fonction par les
antibiotiques.
Cependant, une question cruciale reste : comment les PBPs ne liant plus les β–lactamines
gardent leur fonction naturelle, essentielle à la bactérie ?
Pour comprendre les mécanismes enzymatiques expliquant ce phénomène, le premier test in
vitro de synthèse de peptidoglycane de Gram positif a été élaboré cette année par notre
groupe. Ce test, présenté dans ce poster, nous permet maintenant de tester l’activité
enzymatique des PBPs. Il constitue une avancée majeure dans le domaine puisqu’il nous
permettra de tester les PBPs et leur substrat issus des souches résistantes de pneumocoques.
Nous pouvons donc maintenant tenter de répondre à la problématique énoncée ci-dessus.
P a g e | 89
Journée de la Recherche Médicale 2013
Bases neurales de la verticale visuelle après
AVC hémisphérique
Céline PISCICELLI a, Julien BARRAb, Charles BENAÏMc, Olivier DETANTEd,
Christophe LOPEZe, Dominic PÉRENNOUa
a
b
Clinique MPR-CHU, Laboratoire TIMC-IMAG CNRS 5525 Equipe Santé -Plasticité-Motricité,
Université Grenoble 1, Grenoble
Laboratoire de Psychologie et Neuropsychologie Cognitive, Université Paris Descartes, FRE 3292, Paris
c
Pôle rééducation-réadaptation CHU de Dijon, Inserm, U1093 Dijon
d
Département de Neurologie-CHU, Université Joseph Fourier, Grenoble Institute of Neurosciences
Inserm UMR-S836, Grenoble
e
Laboratoire de Neurosciences Intégratives et Adaptatives, UMR 7260 CNRS Aix-Marseille Université
Correspondance : C.Piscicelli, Clinique MPR-CHU/ Hôpital Sud CS 90338,38434 ECHIROLLES CEDEX
E-mail: [email protected]
Intérêt et cadre de la recherche
Les troubles de l’équilibre constituent la séquelle la plus fréquente après un accident vasculaire
cérébral (AVC) et seraient liés en grande partie à un trouble dans la construction du référentiel de
verticalité, évalué par la perception de la verticale. Les structures cérébrales impliquées seraient
en lien avec le réseau du cortex vestibulaire. Seules deux études ont analysé les bases neurales
de la verticale visuelle (VV) après AVC hémisphérique en utilisant les techniques d’analyse
quantifiée d’imageries cérébrales. La première ne comportait que peu de patients (1) et la
deuxième testait les patients en phase aigüe, excluant les plus sévères, avec une analyse de VV
sans polarité (2).
Objectif scientifique
L’objectif de notre étude était d’analyser les bases neurales de la VV sur un large échantillon
de patients consécutifs après AVC hémisphérique en phase subaigue.
Méthodes
Les IRM de 60 patients (56.6±14 ans; 22F/38H) dont la VV avait été mesurée à 9,1 ± 6,4
semaines après un premier AVC unilatéral hémisphérique (37 droits, 23 gauches) ont été
analysées par une approche statistique de type voxel lesion behavior mapping (VLBM), puis
comparées avec une récente cartographie du cortex vestibulaire humain (3). VV était
considérée pathologique au-delà de ± 2,5°. Les analyses ne portent que sur les déviations
contralésionnelles, seuls signes d’altération du sens de verticalité (4). Seules les aires
cérébrales avec un t significatif (p < 0,05) étaient considérées.
Résultats
Vingt-sept (45%) des patients présentaient une inclinaison contralésionnelle pathologique de
VV et 3 (5%) une déviation ipsilésionnelle. Le biais contralésionnel de VV était aussi fréquent
après lésion droite que gauche (8/22; 19/35; Khi-deux: 0,19) mais sa sévérité plus
importante si lésion droite (-5,1° versus -2,2°; t (55) = -2,32; p = 0,024). L’analyse VLBM
montrait que l’insula, le gyrus frontal inférieur et l’opercule rolandique étaient impliqués dans
les biais contralésionnels de VV. Si lésion droite, les gyri pré- et post-centraux ainsi que le
gyrus temporal transverse jouaient aussi un rôle. La comparaison avec la cartographie du
cortex vestibulaire révèle 10% de structure commune entre les réseaux impliqués dans la
perception vestibulaire (stimulation calorique) et ceux impliqués dans la perception de la VV.
Conclusions
L’hémisphère droit est prédominant pour la perception de la VV qui repose, seulement en
partie, sur le réseau du cortex vestibulaire.
(1) Barra J, Marquer A, Joassin R, Reymond C, Metge L, Chauvineau V, Pérennou D. Humans use internal models to
construct and update a sense of verticality. Brain 2010; 133: 3552–3563.
(2) Baier B, Suchan J, Karnath H-O, Dieterich M. Neural correlates of disturbed perception of verticality. Neurology
2012; 78: 728–735.
(3) Lopez C, Blanke O, Mast F.W. The human vestibular cortex revealed by coordinate-based activation likelihood
estimation meta-analysis. Neuroscience 2012; 212: 159-179.
(4) Pérennou D, Mazibrada G, Chauvineau V, Greenwood R, Rothwell J, Gresty M.A, Bronstein A.M. Lateropulsion,
pushing and verticality perception in hemisphere stroke : a causal relationship ? Brain 2008; 131: 2401-2413.
P a g e | 90
Journée de la Recherche Médicale 2013
The Cancer Biomarkers problem:
surfactant soluble properties reveal promising
improvement for protein detection
in human serum
H Polena1,2,3, A Sidibé1,2,3, S Boccard1,2,3, L Pelletier3,4,5, J Creuzet1,2,3, A Deroux1,2,3,5, A-S
Gauchez5,7, M Moussus9, A Mgharbel1,2,3,9, A Nicolas9, J-L Descotes5,7, B Polack5,8, D GulinoDebrac1,2,3, T Bachelot6, A Puisieux6, F Berger3,4,5, L Bouillet1,2,3,5, I Vilgrain1,2,3
1
INSERM, U1036, Grenoble, France. 2 CEA, iRTSV, Biology of Cancer and Infection
Laboratory, Grenoble, France. 3 Joseph Fourier University, Grenoble, France. 4 U836-UJF-CEACHU Grenoble, France. 5 Grenoble University Hospital, Grenoble, France. 6 CRCL UMR 5286,
UMR-S 1052, Centre Léon Bérard - 69373 LYON CEDEX 08. 7 UMR-S INSERM 1039, Grenoble,
France. 8 TIMC-IMAG/TheREx (UMR 5525 CNRS-UJF). 9 LTM, CNRS UJF 17.
La détection de nouveaux biomarqueurs en cancérologie est une nécessité pour les cliniciens
afin d'optimiser la prise en charge des patients, le suivi thérapeutique et également le
diagnostic. Notre laboratoire (Inserm UMRS 1036) a identifié une protéine issue du réseau
vasculaire, la VE-cadhérine, comme marqueur potentiel de prédiction de réponse au
traitement chez des patients atteints de tumeurs cérébrales. Sa méthode de détection dans le
sang a été brevetée par l'Inserm et l'Université de Grenoble (WO2008062314 - CIRCULATING
VE-CADHERIN AS A PREDICTIVE MARKER OF SENSITIVITY OR RESISTANCE TO ANTITUMORAL TREATMENT, AND IMPROVED METHOD FOR THE DETECTION OF SOLUBLE
PROTEINS).
Une étude clinique promue par le centre Léon Bérard (Lyon, France) en collaboration avec
l'unité Inserm 1036 (Grenoble) est en cours et va permettre de déterminer l' intérêt de ce
biomarqueur dans un autre type de cancer (AVECC: Exploration of Circulating VE-cadherin in
Metastatic
Colorectal
Adenocarcinoma
Patients
Treated
With
Bevacizumab
(AVECC), ClinicalTrials.gov Identifier: NCT01405430).
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Impact de la ventilation mécanique sur la
fonction ventriculaire droite.
Apport du Speckle tracking imaging
Potton L., Schwebel C, Bonadona A., Ara-Somohano C., Minet C, Cartier JC, Timsit JF et JP Baguet
Laboratoire Hypoxie : Physiopathologie cardiovasculaire et respiratoire HP2, U1042,
Faculté de Médecine de la Tronche
Pr Patrick Lévy
Introduction
La ventilation mécanique invasive est responsable d’une augmentation de la post-charge du
ventricule droit (VD) à chaque insufflation, et en continu en cas d’application d’une pression
positive expiratoire. Son retentissement sur la fonction cardiaque droite est cependant difficile
à apprécier du fait de la géométrie complexe du VD et de l’absence de modèle permettant le
calcul d’une fraction d’éjection comme c’est le cas pour le ventricule gauche. Récemment est
apparue une nouvelle technique échographique : le 2D strain ou Speckle Tracking Imaging.
Cette technique d’étude de la déformation myocardique a été évaluée dans l’hypertension
artérielle pulmonaire ou la sclérodermie et a permis la détection d’anomalies myocardiques
précoces infra-cliniques. Les valeurs normales de strain chez les patients ventilés ne sont pas
connues.
Objectif scientifique
Nous avons cherché à déterminer les valeurs moyennes de strain VD chez des patients
ventilés sans pathologie respiratoire sous-jacente et à rechercher un impact de la ventilation
sur les indices de fonctions VD utilisés en pratique courante: l’excursion maximale de l’anneau
triscupide (TAPSE) et l’onde S à l’anneau tricupide (St).
Patients et méthodes
Les patients consécutifs sans antécédent cardiaque hospitalisés en réanimation médicale et
ventilés pour une cause extra-respiratoire avec une FiO2≤30% ont été inclus. Le strain de la
paroi latérale du VD (εVD) a été mesuré en inspiration et en expiration, ainsi que l’onde St et
le TAPSE. Les valeurs inspiratoire et expiratoire de chaque paramètre ont été comparées par
un test de Wilcoxon.
Résultats
11 patients de 61±13 ans en moyenne ont été inclus. Huit patients étaient ventilés pour coma
ou état de mal épileptique, et les cinq autres pour hémorragie digestive. La comparaison entre
valeur expiratoire et inspiratoire des paramètres de fonction VD selon Wilcoxon est la
suivante : TAPSEexpi=22±5mm et TAPSEinspi=20±6mm, p=0.01, Stexpi=12.7±2.8cm/s et
Stinspi=11.4±2.4cm/s p= 0.009, εVDexpi= -25.7±5% et εVDinspi=-25.4±5.8%, p=1.
Conclusion
L’insufflation en ventilation mécanique induit une diminution statistiquement significative des
paramètres « classiques » de fonction VD que sont le TAPSE et l’onde St. Le εVD n’est quant à
lui pas modifié par la ventilation sur ce petit effectif sans pathologie cardio-respiratoire. Enfin,
la valeur moyenne mesurée de εVD en ventilation mécanique de -25% est comparable à celle
rapportée dans la littérature chez des témoins sains non ventilés. La poursuite de l’étude
permettra de vérifier ces données préliminaires, d’évaluer précisément la faisabilité de la
technique et la variabilité intra- et inter observateur.
P a g e | 92
Journée de la Recherche Médicale 2013
Ortheses plantaires et talalgie : effet sur la
distribution des pressions plantaires
Antoine Pradels, Petra Hlavačková et Nicolas Vuillerme
AGIM (AGeing Imaging Modeling) Laboratory, FRE3405, CNRS-UJF-EPHE, La Tronche, France
Centre de Podologie de l’Estacade, Grenoble, France
E-mail : [email protected]
Intérêt et cadre de la recherche
Les douleurs de talon, ou talalgies, représentent des motifs de consultations fréquemment
rencontrés au sein des cabinets de podologie. Ces douleurs sont souvent décrites comme
invalidantes et sources de boiteries, de malpositions ostéo-articulaires par les patients.
Objectif scientifique
L’objectif de cette étude de cas était d’évaluer les effets du port d’orthèses plantaires
personnalisées, d’une part sur la distribution des pressions plantaires, et d’autre part, sur la
perception douloureuse de patients âgés présentant une talalgie unilatérale.
Méthodes
Dix patients âgés présentant une talalgie unilatérale se sont portés volontaires pour participer
à cette étude. Ils devaient se tenir, debout, les yeux fermés, le plus immobile possible, pieds
à 30°, talon écartés de 3 cm sur une plate-forme de force constituée d’une matrice de
capteurs de pressions (Zébris) dans deux conditions expérimentales : semelles standards (ST)
versus orthèses plantaires (OP). Une évaluation des perceptions douloureuses a été réalisée
par le biais d’une échelle visuelle analogique. Seul les patients, soit cinq au total, présentant
une douleur (critère d’inclusion) lors de l’évaluation ont été retenus dans le cadre de cette
étude.
Résultats
Les résultats montrent que les patients déchargent le talon douloureux comparativement au
talon non douloureux. Une diminution immédiate de la perception douloureuse et une
modification des pressions plantaires dans le sens d’une remise en charge du talon douloureux
est observé dans la condition OP par rapport à la condition ST.
Conclusions
Ces premiers résultats suggérèrent que la douleur perçue par les patients induit une position
antalgique (décharge du talon douloureux). La mise place d’orthèses plantaires personnalisées
permet immédiatement de diminuer cette douleur et de modifier les pressions plantaires
(recharge du talon douloureux).
P a g e | 93
Journée de la Recherche Médicale 2013
Oculo Cerebro Renal of Lowe Exon skipping
gene therapy: Application
to the c.238+4701 A>G mutation
Rendu J1,2,3*, Coutton C2,4, Brocard J3, Martinez D1, Pietri Rouxel F5, Faure P1,2, Marty I3, Fauré J1,2,3
1) CHU de Grenoble, Département de Biochimie Toxicologie et Pharmacologie UM de Biochimie
et Génétique Moléculaire, Grenoble, F-38000, France
2) Université Joseph Fourier, Grenoble, F-38000, France
3) INSERM U836 Grenoble Institut des Neurosciences, Grenoble, France
4) CHU de Grenoble, Département de Génétique et Procréation
5) UPMC- Institut de Myologie - U974, Paris, France
*Auteur pour correspondance : [email protected]
Lowe syndrome (LS) is a devastating X-linked genetic disease caused by the presence of
mutations in the OCRL gene (OMIM: 300535) encoding the phosphatidylinositol 4,5bisphosphate 5-phosphatase OCRL . It is characterized by congenital cataracts, mental
retardation, behavioural disorders and severe renal dysfunction. The OCRL protein is part of
the network of kinases and phosphatases regulating the balance of phosphoinositides species
in subcellular compartments. Recently it has been shown in vitro that one function of OCRL is
to mediates the growth of the primary cilium.
The laboratory has conducted most of the genetic studies on French patients with LS, and we
show that 80% of the genetic variations linked to LS are missense or nonsense. Nevertheless,
15 % of the mutations have an impact on splicing of OCRL mRNA. One of the patients studied
presents with a Lowe Syndrome with congenital bilateral cataract, renal failure, and
developmental delay, associated to a deep intronic mutation in the OCRL gene. This mutation
creates a splicing donor site which unveils a cryptic acceptor site in the intron 4 of OCRL gene,
leading to the inclusion of a 66 nucleotides pseudo-exon responsible for the loss of the OCRL
protein. The goal of this project is to prove that a correction of this mutation can be achieved
by an exon-skipping strategy, able to restore the production of the normal OCRL mRNA in
primary patient’s fibroblasts. The correction of the splicing default is monitored at the mRNA
and the protein level
To induce the skipping of the pseudo-exon, we first designed antisense Oligoribonucléotides
(2’OMeAONs) targeting cis regulatory sequences for the splicing, and transfected them into
patient’s fibroblast. The efficiency of the different AONs was followed by RT-PCR and the most
efficient AONs were integrated in a U7 snRNA cassette to enhance the exon-skipping rate.
When this cassette was vectorized in a lentivirus and expressed in patient’s fibroblast, the
normal splicing pathway was partially rescued. The restoration of OCRL protein levels was
assessed, and the function of the protein tested by measuring the primary cilium length in
treated fibroblasts from the patient.
We first observed by RT MLPA that the c.238+4701 A>G mutation induced also a non sense
mediated mRNA decay. After transduction, we obtained a restoration reaching almost 40 % of
OCRL protein. This trial is the first experimental demonstration of exon skipping therapy for
the Lowe Oculo Cerebro Renal Syndrome and also for a ciliopathy.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Surveillance observationnelle des
Problèmes de Santé au Travail
Rieutort D., de Gaudemaris R., Bicout DJ.
Laboratoire TIMC-IMAG – UMR 5525
Equipe Environnement et Prédiction de la Santé des Populations (EPSP)
Faculté de Médecine, Domaine de la Merci, bâtiment Jean Roget, 38700 La Tronche
[email protected], [email protected]
Les travailleurs sont soumis dans l’exercice normal de leur activité à des expositions d’origine
et de nature physiques, chimiques ou biologiques, qui peuvent avoir un impact sur le
développement de pathologies. La surveillance de ces expositions et des maladies
professionnelles associées est un enjeu majeur dans le domaine de la Santé-Travail,
notamment pour identifier et prévenir les nouvelles menaces pour la santé des travailleurs.
Dans ce contexte, le Réseau National de Vigilance et de Prévention des Pathologies
Professionnelles (RNV3P) est un réseau de médecins experts créé en 2001 [1] qui recueillent
de manière systématique et standardisée, tous les Problèmes de Santé au Travail (PST). Un
PST est défini par l’association d’une maladie ou pathologie professionnelle et une exposition
professionnelle composite, comprenant des nuisances potentiellement responsables et un
contexte professionnel. Ce réseau a entre autre pour buts de développer des méthodes
d’analyse et une expertise sur les relations maladies-expositions professionnelles.
Afin d’améliorer notre compréhension et notre capacité d’analyse des associations pathologie
–exposition ou environnement professionnels, notre équipe a développé, lors de précédents
travaux, le concept d’exposome professionnel [2], basé sur une utilisation optimale de la base
RNV3P (environ 150 000 PST), et permettant d’investiguer les caractéristiques des PST. A
partir de cet exposome professionnel, nous sommes actuellement en train de développer la
Surveillance Observationnelle des PST [3], qui consiste en la construction et description de
spectres dynamiques d’expositions d’une ou plusieurs pathologies ; spectres composé de
motifs d’expositions (associations de nuisances). Cette surveillance a pour but de fournir des
réponses aux cliniciens en analysant et repérant les changements de tendance et en détectant
les évènements émergents dans les relations maladies-expositions professionnelles.
Comme illustration de cette méthodologie, nous avons considéré le cas du Lymphome nonhodgkinien, cancer rare du système lymphatique, classé en France comme 8ème et 11ème cause de
mortalité chez les hommes et femmes respectivement [4]. Les étiologies professionnelles de ce
cancer sont encore mal connues et controversées. Ainsi, la Surveillance Observationnelle de cette
pathologie appliquée du RNV3P a permis de mettre en évidence des motifs d’expositions
caractéristiques, tels que les solvants et diluants organiques et les produits agricoles.
Prochainement cette Surveillance Observationnelle sera étendue à la détection de
phénomènes atypiques et/ou émergents.
[1] ANSES. Le Réseau National de Vigilance et de Prévention des Pathologies
Professionnelles. Disponible au : http://www.anses.fr/fr/content/rnv3p-le-r%C3%A9seaunational-de-vigilance-et-de-pr%C3%A9vention-des-pathologies-professionnelles [dernière
consultation le 15/04/2013]
[2] Faisandier L, Bonneterre V, De Gaudemaris R, Bicout DJ. Occupational exposome: a
network-based approach for characterizing Occupational Health Problems. J Biomed Inform.
2011 Aug;44(4):545-52.
[3] Rieutort D, De Gaudemaris R, Bicout DJ. Surveillance Observationnelle : Approche par
Exposome. Epidémiol et santé anim. 2012;61:127-140.
[4] Institut National du Cancer (INCA). La situation du cancer en France en 2012: Institut
National du Cancer; 2012.
P a g e | 95
Journée de la Recherche Médicale 2013
Origine et trajet des artères systémiques
vascularisant les malformations
broncho-pulmonaires congénitales :
témoin chronologique de leur origin
embryopathogénique
Y. Robert1,2,3, P.Y. Rabattu1,3, C. Durand1,5, P.S. Jouk5, C. Piolat1,3, P. Chaffanjon2.
1. Groupe d’Etude des Malformations Pulmonaires, CHU Grenoble, UJF, France.
2. Laboratoire d’anatomie des Alpes Françaises, UJF, Grenoble, France.
3. Clinique Universitaire de Chirurgie Pédiatrique, CHU Grenoble, UJF, France.
4. Clinique de Radiologie Pédiatrique, CHU Grenoble, UJF, France.
5. Département de Génétique et Procréation, UJF, France.
Introduction : Les malformations broncho-pulmonaires (MBP) avec vascularisation artérielle
systémique sont les séquestrations pulmonaires (SP) et les syndromes du Cimeterre (SC). Les
SP sont définies par leur non connexion à l’arbre trachéo-bronchique normal. Leur origine est
discutée mais la théorie du « bourgeon accessoire » issu du proentéron semble la plus
populaire. L’origine des SC (hypoplasie pulmonaire droite, hypoplasie artérielle pulmonaire
droite et retour veineux pulmonaire anormal dans le segment vitellin de la veine cave
caudale) semble liée à une anomalie des ébauches veineuses splanchniques. Dans la
littérature, lorsqu’un retour veineux pulmonaire anormal est associé à des artères
systémiques (AS), il est considéré comme une SP atypique.
Objectif : Etudier l’origine et le trajet des AS des MBP.
Matériel et méthode : Etude anatomique rétrospective de 41 MBP avec vascularisation
artérielle systémique, des AS (origine, trajet) à partir de données radio-chirurgicales, corrélée
à l’analyse des malformations associées.
Résultats : On rapporte 27 séquestrations intra lobaires, 10 séquestrations extra lobaires, et
4 SC. L’origine des AS est statistiquement différente entre les SC et les SP (p=0.0375), avec
toutes les AS naissant de l’aorte descendante sous diaphragmatique dans les SC. Le passage
trans diaphragmatique des AS dans les SC se fait à travers le centre tendineux du
diaphragme. Dans les SP, il se fait volontiers dans le sinus costo-diaphragmatique (n=6),
voire dans le hiatus œsophagien (n=3). Le nombre de malformations associées est
statistiquement différent entre les SC et les SP (p=0.0235, 100% des SC), et leur type est
plus précoce dans les SC (cardiaques, agénésies pulmonaires, lobaires).
Discussion : L’étude des AS confirme une origine très précoce des SC, liés à une anomalie
des ébauches veineuses splanchniques (<J26) à l’origine de la persistance d’un retour veineux
primitif dans le segment vitellin de la veine cave caudale. En effet, seule une origine très
précoce peut expliquer l’origine sous-diaphragmatique de toutes les AS et leur passage dans
le centre tendineux du diaphragme issu du septum transversum (S5), en bénéficiant
largement de la croissance caudale de l’embryon qui est maximale entre la 5ème et la 7ème
semaine de développement. Les SP sont d’origine plus tardive mais restent antérieures à la
8ème semaine de développement pour expliquer la persistance d’une vascularisation artérielle
primitive splanchnique. Elles bénéficient moins de la croissance caudale de l’embryon, avec
des AS qui, lorsqu’elles sont d’origine sous-diaphragmatique, passent volontiers dans le sinus
costo-diaphragmatique issu des replis pariétaux musculaires (S9-S12) qui repoussent les
membranes pleuro-péritonéales (S5-S8), voire dans le hiatus œsophagien formé par les piliers
du diaphragme (S9-S12). Cette chronologie malformative est confortée par l’analyse des
malformations associées qui sont d’origine plus précoce et associées à tous les SC.
Conclusion : Le passage diaphragmatique des AS associées aux MBP, d’origine précoce,
permet de séparer chronologiquement les SC des SP. Les SC sont des MBP à part entière, et
ne sont pas des SP, même atypiques.
P a g e | 96
Journée de la Recherche Médicale 2013
Détermination topologique de la NADPH
oxydase Nox4 par la méthode ToDUFA
« Topological Determination by Ubiquitin Fusion
Assay »
Francis Rousset1, Leilei Zhang1, Bernard Lardy1,2, Françoise Morel1
et Minh Vu Chuong Nguyen1
Université Joseph Fourier, GREPI AGIM CNRS FRE 34051 CHU Grenoble France2
Les protéines membranaires représentent à peu près 20% à 30% des protéines totales. Elles
sont impliquées dans une large gamme de processus biologiques importants et sont la cible de
plus de 50% des médicaments. Cependant, les techniques disponibles pour caractériser leur
positionnement dans la membrane sont limitées. En l'absence de données de cristallisation,
seules des prédictions de séquence peuvent être utilisées.
Parmi les 7 membres de la famille des NADPH oxydase, la topologie de la Nox phagocytaire,
Nox2, est la mieux caractérisée. En effet, plusieurs approches immunologiques ont permis
d’établir que Nox2 possède 6 passages transmembranaires et des extrémités N- et Cterminales intracytosolique. Nox4 partage 39% d’homologie de séquence avec Nox2.
Actuellement, la topologie de Nox4 demeure hypothétique et repose seulement sur des
analogies de séquences avec Nox2 et des prédictions informatiques.
La méthode de détermination topologique de protéines membranaires (ToDUFA) que nous
avons développée est basée sur les propriétés de clivage du côté C-terminal de l’ubiquitine
par les déubiquitinases exprimées dans le cytosol. En pratique, la protéine d’intérêt est
fusionnée avec une étiquette ubiquitine-GFP (ubGFP) et exprimée dans la lignée HEK293.
Deux cas de figures sont alors possibles : (i) Si la partie C-terminale de la protéine d’intérêt,
marquée ubGFP, est située dans le cytosol, il y’a alors un clivage en C-terminal de l’ubiquitine
entrainant la libération de la GFP. (ii) Si la partie C-terminale ubGFP est extracellulaire ou
située à l’intérieur du réticulum endoplasmique, l’étiquette ubGFP est protégée de l’action
protéolytique des déubiquitinases et la GFP reste donc fusionnée à la protéine d’intérêt. Le
relarguage ou non de la GFP servira d’indicateur de l’orientation topologique de la protéine
d’intérêt et sera analysé simplement par des techniques usuelles de laboratoire (Western Blot,
FACS ou microscopie à fluorescence).
La preuve du concept et la validité de cette approche ont été confirmées en utilisant deux
protéines membranaires de topologie connue : le récepteur à l’IL-1beta de type I (possédant
une partie C-terminale cytosolique) et la protéine tronquée Nox2-N131 (131 premiers acides
aminés) dont la partie C-terminale, correspondant à la 3ème boucle, est extracellulaire
(Campion et al, 2007). La méthode a été ensuite appliquée à des formes tronquées de Nox4
avec l’ubGFP fusionnée après chaque passage transmembranaire prédit (résidus 44, 98, 144,
184, 239, 341 et 578).
Cette méthode originale, utilisant les protéines de fusion ubGFP comme outils de révélation de
la topologie des protéines membranaires, apporte la première démonstration expérimentale
de la topologie de Nox4.
P a g e | 97
Journée de la Recherche Médicale 2013
Phosphodiesterase-5 inhibitors for the
treatment of secondary Raynaud’s
Phenomenon: systematic review and metaanalysis of randomized trials
Matthieu Roustit, Sophie Blaise, Yannick Allanore, Patrick Carpentier, Jean-Luc Cracowski
Inserm U1042 - Laboratoire HP2
Facultés de Médecine et de Pharmacie de Grenoble
38042 Grenoble, France
Introduction
Recent controlled trials have assessed the efficacy of PDE-5 inhibitors in secondary Raynaud’s
Phenomenon (RP). However, the conclusions are conflicting and whether these drugs are
effective remains unclear. The objective of this meta-analysis was to determine the efficacy of
PDE-5 inhibitors on the Raynaud’s Condition score (RCS), the frequency and the duration of
attacks.
Methods
A systematic review of articles was performed (sources included Medline, Embase, Web of
Science, the Cochrane Central Register of Controlled Trials). Only double-blind, randomized,
controlled trials (RCTs) were included. Study selection was done independently by 2 authors
using predefined data fields, including study quality indicators.
Results
Six RCTs were included (1 with sildenafil, 1 with modified-release sildenafil, 3 with tadalafil
and 1 with vardenafil). PDE-5 inhibitors significantly decrease mean RCS by -0.46 [-0.74;0.17] (p=0.002), the daily frequency of ischaemic attacks by -0.49 [-0.71;-0.28] (p<0.0001),
and daily duration of RP attacks by -14.62 [-20.25;-9] min (p<0.0001).
Conclusion
This systematic review and meta-analysis shows that PDE-5 inhibitors significantly improve
RCS, frequency and duration of RP attacks as compared with placebo in secondary RP.
However, this effect is moderate and seems to be comparable to that of CCBs.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Iontophoresis of treprostinil: a pharmacokinetic
and pharmacodynamic study
Matthieu ROUSTIT, Florence Gaillard-Bigot, Sophie Blaise, Françoise Stanke, Claire Cracowski,
Jean-François Jourdil, Bernard Imbert, Christophe Seinturier, Patrick Carpentier, Jean-Luc Cracowski
Inserm U1042 - Laboratoire HP2
Institut Jean Roget, Facultés de Médecine et de Pharmacie de Grenoble
38042 Grenoble, France
Introduction
Systemic sclerosis (SSc) is a rare disease affecting the skin microcirculation. Digital ulcers are
a complication of SSc-related vasculopathy associated with significant morbidity. Therapy of
SSc-related ulcerations remains challenging. Topical administration of treprostinil, a
prostacyclin analogue, through iontophoresis has been shown to induce sustained vasodilation
on the forearm of healthy subjects [1]. The objectives of the present work are 1/ to assess
intradermal vs plasma concentrations of iontophoretically-administered treprostinil, and 2/ to
assess the effect of different protocols of treprostinil iontophoresis on the finger pad of
healthy subjects.
Methods
Twenty-two healthy volunteers were recruited. In a first study twelve participants
simultaneously received cathodal iontophoresis of treprostinil and NaCl on the right forearm.
Two microdialysis fibers were inserted at the dermis-hypodermis junction under the
treprostinil site, and samples were collected every hour during 8h. Eight blood samples were
taken on the controlateral forearm. The second study included aimed at comparing the effect
of three doses on digital skin blood flux (quantified using laser speckle contrast imaging).
Blood pressure was recorded continuously during all experiments and data were expressed as
cutaneous vascular conductance (CVC).
Results
This study confirms that iontophoresis of treprostinil 250 μM induces a sustained increase in
cutaneous CVC on the forearm (p=0.02 vs NaCl). Intradermal concentration of treprostinil
was maximal at H2 and below the detection threshold in all but two participants at H8,
whereas plasma concentrations were <1.7 pg/mL at all points for all subjects. Among the
three doses tested on the finger pad, iontophoresis at 240 mC/cm² induced a significant
increase in CVC (p=0.01). There was no local or systemic adverse event.
Conclusion
Iontophoresis allows non-invasive administration of treprostinil 250 μM into the dermis,
without systemic diffusion of the drug. Digital cathodal iontophoresis at 240 mC/cm²
significantly increases skin blood flow on the finger pad. This protocol is currently being tested
in SSc patients.
[1] Blaise et al, J Clin Pharmacol 2013
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Effet différentiel de l'anticipation incertaine
versus certaine de la douleur viscérale chez le
volontaire sain - étude IRMf
Amandine Rubio1, Chantal Delon-Martin, Sonia Pellissier, Nicolas Mathieu,
Lukas VanOudenhove, Jan Tack, Bruno Bonaz
1
Clinique Universitaire de Pédiatrie – Hopital Couple Enfant. [email protected]
Grenoble Institut des Neurosciences (GIN) - Centre de Recherche Inserm U 836
Equipe 8 - Stress et Interactions Neuro-Digestives - Directeur d’équipe : Pr Bruno Bonaz
Bâtiment Edmond J. Safra des Neurosciences, Ch Fortuné Ferrini, La Tronche 38042
Intérêt et cadre scientifique : Des études de neuroimagerie chez les sujets sains et les patients
souffrant de troubles fonctionnels intestinaux ont montré que le cerveau répondait à la fois par
anticipation et pendant l'application d'un stimulus douloureux. Cependant, le rôle différentiel de
l'anticipation incertaine versus certaine de la douleur n'a jamais été étudié.
Objectif scientifique : Le but de notre travail était d'étudier, chez des sujets volontaires sains, les
structures cérébrales impliquées dans l'anticipation incertaine versus certaine d'une douleur.
Méthodes: 15 sujets volontaires sains (âge médian 24 ans, extrêmes : 21-43; répartition
homme/femme 0,4/0,6, tous droitiers) ont été inclus. Le seuil de distension rectale provoquant un
inconfort coté à 70% était préalablement déterminé chez chaque sujet, à l'aide d'un barostat. Six
séries d'images fonctionnelles IRM étaient enregistrées pendant le protocole (IRM 3 Tesla, Philips,
antenne 32 canaux, résolution spatiale 3x3x3mm3 et temporelle TR 3s). Pendant chaque série, le
sujet avait 12 essais comprenant chacun une période d'anticipation (indiquant qu'il y aurait
sûrement, peut-être ou pas de distension), une période avec ou sans distension, et une période de
cotation de l'anxiété et de l'inconfort ressentis. Les images étaient analysées à l'aide du logiciel
SPM8. Une analyse statistique de groupe a permis de mesurer la probabilité associée à la condition
d'anticipation incertaine par rapport à l'anticipation certaine.
Résultats: L'analyse différentielle de l'anticipation incertaine versus certaine de la douleur met en
évidence une double activation dans le cortex cingulaire antérieur (CCA) sous-génual correspondant
aux aires 24/32 et 25 de Brodman (p<0,005). La distension rectale est associée à une activation au
niveau du cortex insulaire droit, de l’operculum rolandique droit, du cervelet bilatéral prédominant à
gauche et du cortex pariétal gauche (p<0,0001).
Discussion: Le CCA est associé à la composante affective de la douleur. Plus précisément, la zone
sous-génuale est impliquée dans la gestion de l'humeur, de la volonté et de la motivation. Chez
l’homme, il a été montré que des lésions du CCA sous-génual induisaient des troubles dépressifs et
de l’aboulie. Par ailleurs, l’incertitude chronique est à l’origine d’anxiété et de dépression. Notre
étude chez des sujets sains, mis en condition d’incertitude, retrouve logiquement une activation de
cette zone.
Conclusion : A partir de ces données, nous poursuivons l’étude avec des patients atteints de
maladie de Crohn (MC) en rémission. En effet, le caractère imprévisible de la survenue de poussées
dans la MC est à l'origine d'une altération marquée de la qualité de vie chez les patients, induisant
un stress et une anxiété anticipatrice importants. Nous étudions donc la gestion du stress et de
l'anxiété induites par l'anticipation incertaine d'une douleur viscérale chez ces patients.
Références bibliographiques de l’équipe sur le thème
Baciu MV, Bonaz BL, Papillon E, Bost RA, Le Bas JF, Fournet J, Segebarth CM. Central processing of
rectal pain: a functional MR imaging study. Am J Neuroradiol. 1999;20:1920-4.
Mulak A, Kahane P, Hoffmann D, Minotti L, Bonaz B. Brain mapping of digestive sensations elicited
by cortical electrical stimulations. Neurogastroenterol Motil. 2008;20:588-96.
Mulak A, Bonaz B. Irritable bowel syndrome: a model of the brain-gut interactions. Med Sci Monit.
2004;10:RA55-62.
Meregnani J, Clarençon D, Vivier M, Peinnequin A, Mouret C, Sinniger V, Picq C, Job A, Canini F,
Jacquier-Sarlin M, Bonaz B. Anti-inflammatory effect of vagus nerve stimulation in a rat model of
inflammatory bowel disease. Auton Neurosci. 2011;160:82-9.
P a g e | 100
Journée de la Recherche Médicale 2013
Le risque infectieux des cathéters veineux
fémoraux est-il supérieur à celui des cathéters
jugulaires internes ? utilisation d’un modèle
longitudinal structurel marginal
Stéphane RUCKLY, Lila BOUADMA, Olivier MIMOZ, Jean-Jacques PARIENTI,
Maïté GARROUSTE-ORGEAS, Serge ALFANDARI, Gaétan PLANTEFEVE, Régis BRONCHARD,
Gilles TROCHE, Remy GAUZIT, Marion ANTONA, Emmanuel CANET, Julien BOHE,
Marie-Christine HERRAULT, Carole SCHWEBEL, Bertrand SOUWEINE,
Jean-Christophe LUCE, Jean-François TIMSIT
Institut Albert Bonniot, UJF/U823 Equipe 11 ; Rond-point de la Chantourne 38706 La Tronche
La voie sous-clavière est associée à un risque d’infection liée aux cathéters (ILC) plus faible
que la voie jugulaire interne et fémorale. En présence de défaillance respiratoire ou de
troubles de l’hémostase, les complications liées à la pose d’une voie sous-clavière deviennent
inacceptables. Dans cette situation, un doute persiste sur l’avantage de la voie jugulaire
interne sur la voie fémorale.
Méthodes : Nous proposons une cohorte prospective intégrant tous les patients inclus dans 2
études randomisées contrôlées évaluateur aveugle (Dressing et Dressing2) comparant les
pansements à la chlorhexidine avec des pansements inertes avec un cathéter veineux, inséré dans
des conditions d’asepsie chirurgicale, en veine jugulaire interne ou fémorale. Dans chacune des
études, les données individuelles concernant les patients et les cathéters correspondaient aux
mêmes définitions. Les infections systémiques (ILC) et bactériémies liées aux cathéters (BLC)
étaient définies selon les critères de la conférence de consensus française. La colonisation était
définie par une culture quantitative de cathéter supérieure au seuil. Nous comparons aussi les taux
de décollement et de colonisation de la peau.
Dans un premier temps, un modèle prédisant l’insertion par la voie jugulaire, incluant 15
variables a été construit. Un modèle longitudinal structurel marginal (MSM) pondéré sur la
probabilité d’insertion de l’une ou l’autre des voies d’abord (IPTW) a ensuite été réalisé. Il
permet de créer des « pseudo populations» de patients pour lesquels l’insertion fémorale et
jugulaire sont équiprobables, mimant ainsi une randomisation.
Résultats : Parmi les 2128 patients analysables, 1400 cathéters fémoraux et 1127 cathéters
jugulaires ont été insérés (19481 jour-cathéters) . Les densités non ajustées d’incidence des
colonisations 12,6/1000 j-cathéters, ILC 1,6/1000 j-cathéters et BLC 1/1000 j-cathéters
n’étaient pas différentes entre jugulaires et fémorales (Colonisation : 11,6 vs 12,9, ILC : 1,8
vs 1,4, BLC : 1 vs 1,1 respectivement pour jugulaire et fémoral).
L’analyse pondérée par MSM ne montre aucun bénéfice en terme de colonisation HR=0,80 (0,591,08), p=0,15, infection systémique de cathéters HR=0,91 (0,38-2,18), p=0,84, bactériémies
liées aux cathéters HR=0,63 (0,25-1,63) ; p=0,34 de la voie jugulaire interne sur la population
globale. Néanmoins la colonisation était plus importante pour la voie fémorale chez les femmes
(HR=0.39 (0.24-0.63) ; p<.0001) et après le 4ème jour (HR=0.73 (0.53-1.01), p=0.05).
L'absence de bénéfice de la jugulaire avant le 5ème jour était liée à une colonisation de la peau
plus élevée sur le site jugulaire pour les cathéters retirés avant le 5ème jour. Après le 4ème jour
le décollement devenait plus fréquent avec les cathéters fémoraux, cela peut expliquer le risque
subséquent de colonisation. Les différences de colonisation cutanée entre les jugulaires et les
fémorales ont été supprimées par l'utilisation de pansements à la chlorhexidine.
Conclusion : La voie fémorale posée en condition d’asepsie chirurgicale n’augmente pas
significativement le risque d’infection et de bactériémies liées au cathéter par rapport à la voie
jugulaire interne. La voie jugulaire devrait être favorisée pour les femmes, lorsque l'on utilise
des pansements inertes, et quand les cathéters restent en place plus de 4 jours.
Les deux sites sont acceptables aussitôt que l'approche sous-clavière est impossible.
Références : 1- Timsit et al Jama 2009 ; 2- Timsit et al Am J Respir Crit Care Med. 2012
P a g e | 101
Journée de la Recherche Médicale 2013
Cinétique de la dyspnée au cours du test de
marche de 6 minutes chez des patients porteurs
d’obésité et d’un syndrome d'apnées
obstructives du sommeil (SAOS)
R. Rusca Mestre1, M. Crouteau2, B. Wuyam1, R. Tamisier1, A. Grangier1, S. Gorain1,
P. Levy1, F. Maltais2, JL. Pépin1, I. Vivodtzev1.
1.Univ Grenoble Alps, Laboratoire HP2, Inserm U1042, CHU Grenoble, EFCR and locomotion, reeducation
and physiology, France.
2. Centre de recherche, Institut Universitaire Cardiologie et de Pneumologie du Québec, Canada.
Intérêt et cadre de la recherche
L’obésité et le syndrome d’apnées obstructives du sommeil (SAOS) sont deux pathologies
interconnectées conduisant à une intolérance à l’effort. Une dyspnée d’effort est fréquemment
retrouvée chez ces patients mais son mécanisme reste méconnu.
Objectif scientifique
Nous avons analysé la cinétique de la dyspnée au cours du test de marche de 6 minutes
(TM6) et ses corrélations avec les variables physiologiques chez des patients porteurs
d’obésité et d’un SAOS.
Méthode
Vingt patients obèses traités par pression positive continue (PPC) (âge = 56 ± 9 ans; IMC =
38 ± 4 kg/m²) successivement inclus ont réalisé un TM6 au cours duquel la dyspnée et
l’inconfort des jambes ont été évalués toutes les deux minutes en utilisant l'échelle de Borg
modifiée. La médiane du delta de dyspnée à la 2ème minute du test a été utilisée pour
distinguer les patients présentant une dyspnée précoce (score de Borg > 2, n = 8), de ceux
présentant une dyspnée tardive (score de Borg ≤ 2, n = 12).
Parallèlement, des mesures de la fonction pulmonaire, de la composition corporelle, de la
force du quadriceps et des muscles respiratoires ont été réalisées chez ces patients. De plus,
ils ont été soumis à une épreuve d’effort maximale sur cyclo ergomètre, et nous avons évalué
l'activité physique (actimétrie sur 5 jours) et le stade de dyspnée au cours des tâches
quotidiennes par l'échelle Sadoul.
Résultats
Nous avons observé deux profils significativement distincts de cinétique de la dyspnée au
cours du TM6 (ANOVA: p < 0,001) avec un score de dyspnée à 2 minutes de 4,3 ± 0,9 points
dans le groupe précoce contre 1,5 ± 1,3 points dans le groupe tardif (p < 0,001). L’inconfort
des jambes perçu à 2 minutes (4,4 ± 2,3 vs. 1,4 ± 1,2, p = 0,003) et le score de Sadoul (3,2
± 1,3 vs. 1,7 ± 1,2, p = 0,026) étaient significativement plus élevés chez les patients atteints
de dyspnée précoce vs. dyspnée tardive, respectivement. Ces 2 variables étaient corrélées
avec le delta de dyspnée à 2 minutes mais aucune variable physiologique ne l’était.
Conclusion
Deux profils différents de perception de la dyspnée au cours de la marche ont été mis en
évidence chez les patients obèses atteints du SAOS. Les patients présentant une perception
importante de dyspnée à la marche présentaient également une perception augmentée
d’inconfort des jambes et de la dyspnée au cours des tâches quotidiennes. Par contre, chez
ces patients, cette sensation accrue de dyspnée n’était corrélée à aucun paramètres
physiologiques tels que la composition corporelle, la force musculaire, la capacité maximale
aérobie ou encore le niveau d'activité physique.
P a g e | 102
Journée de la Recherche Médicale 2013
Pratique de la FIV-ICSI avec et
sans cryoconservation de spermatozoïdes
chez les patients oligozoospermiques sévères et
cryptozoospermiques au
CHU de Grenoble de 2004 à 2011
S Sintzel1,4, P Gillois2,3, S Brouillet1,3,4, C Thomas1, U Bergues1, S Hennebicq1,3,4
1 – Laboratoire d’Aide à la procréation-CECOS, CHU de Grenoble, CS10217,
38043 GRENOBLE cedex 9
33(0)476765360, [email protected]
2 – DIIM, CHU de Grenoble, CS10217, 38043 GRENOBLE cedex 9
3 – Université Joseph Fourier, Grenoble Université
4 – Equipe "Génétique, Infertilité et Thérapeutiques", Laboratoire AGIM, CNRS FRE3405,
Université Joseph Fourier GRENOBLE
Introduction-Objectif
L’objectif principal de cette étude était de visualiser l’évolution de 2004 à 2011, de la
réalisation de cryoconservation de spermatozoïdes dans la prise en charge des patients
cryptozoospermiques ou oligozoospermiques sévères et la fréquence d’utilisation de ces
paillettes au centre d’AMP du CHU de Grenoble. Les objectifs secondaires étaient de comparer
les caractéristiques des ICSI des patients avec et sans autoconservations et de comparer les
résultats des ICSI avec spermatozoïdes frais et congelés.
Méthode
Nous avons réalisé une étude épidémiologique rétrospective monocentrique au CHU de
Grenoble couvrant la période de 2004 à 2011. Nous avons sélectionné l’ensemble des patients
ayant une concentration spermatique inférieure à 1 Million/ml et ayant réalisé une ICSI de
rang 1 dans le centre d’AMP. Les données ont été recueillies à partir du dossier médical papier
et informatisé.
Résultats
169 patients correspondaient aux critères dont 84 ont eu une ICSI sécurisée et 85 une ICSI
non sécurisée. On trouve une augmentation significative de la réalisation des ICSI avec
autoconservation avec une moyenne de 74 % de 2008 à 2011 et de 29 % de 2004 à 2007 (p
< 2,94.10-9) et une fréquence de l’utilisation des spermes congelés de 6%. Il existe une
différence significative pour l’âge des couples avec ICSI sécurisée et non sécurisée (33,57
pour le premier groupe versus 35,52 avec p <0,05 pour les hommes et 30,45 versus 32,26
ans avec p <0,05 pour les femmes). Il n’y a pas de différence significative dans les résultats
des tentatives entre les ICSI avec spermatozoïdes frais et congelés.
Conclusion
L’autoconservation de spermatozoïdes chez ces patients est de plus en plus fréquemment
réalisée avec des taux de réussites similaires entre ICSI avec spermatozoïdes frais et
décongelés. Mais la fréquence réelle d’utilisation des paillettes demeure faible, il faudrait donc
réussir à définir des critères pour savoir pour quel patient la cryoconservation représente un
véritable gain de chance.
P a g e | 103
Journée de la Recherche Médicale 2013
Structure-activity studies on the microtubule
based motor protein Eg5 mutants associated
with drug resistance
Dimitrios A. SKOUFIAS, ([email protected])
Isabel Garcia-Saez, Salvatore DeBonis, Rose-Laure Indorato, Francoise Lacroix
Institut de Biologie Structurale, UMR5075 38027 (CEA-CNRS-UJF)
The microtubule based kinesin Eg5, also known as KIF11, has been recognized as a valid
target for the development of new class of anti-mitotic inhibitors targeting components of the
mitotic spindle with a potential cancer chemotherapeutic value (1). To date, a number of
chemically distinct small molecules targeting the same binding pocket of Eg5 protein are
under evaluation in clinical trials with better responses achieved when hematological
malignancies were targeted. We have been addressing the issue of specificity and resistance
to Eg5 inhibitors. Based on the structure of the STLC-Eg5 complex, we have been successful
in developing drug resistant cell lines as tools to classify chemically divergent Eg5 targeting
agents according to their mode of action and target specificity (2,3). We have also identified
Eg5 mutants encountered in a number of selected drug resistant clones of colon carcinoma
tumor cells and we are carrying out structure activity studies in one of such mutant.
Interestingly, the mutation, instead of being localized in the known allosteric drug-binding
pocket of Eg5, is in the nucleotide binding site. Our current biochemical data coupled with cell
based assays support the hypothesis that the mutant, in the absence of the inhibitor, is in a
rigor state (high friction mode) and free of nucleotide. When the mutant is expressed in cells,
heavily crosslinked MTs are formed. Strikingly, the MT bundles are released in the presence of
the inhibitor.
The drug resistant cell lines can therefore be used as a filter to distinguish Eg5 loop L5 binding
drugs without prior structural information. Additionally, the cells can be used to analyze
whether inhibitors of Eg5 are specific to this potential drug target or whether they bind to
additional protein targets in dividing cells. One additional outcome of our results is the
proposal of a double hit strategy for the same target protein, e.g. an exposure of tumor cells
to a combination of ATP competitive and an ATP uncompetitive Eg5 targeting drugs as a
possible treatment strategy to minimize or slow the development of drug resistance due to
mutations in one of the drug binding sites.
1) Good JA, Skoufias DA, Kozielski F. Elucidating the functionality of kinesins with small molecule probes. 2011
Seminars in Cell and Developmental Biology 22(9): 935-945.
2) Tcherniuk S, R van Lis, F Kozielski, DA Skoufias. 2010 Mutations in the human kinesin Eg5 that confer resistance
to monastrol and S-Trityl-L-Cysteine in tumor derived cell lines. Biochemical Pharmacology 79(6):864-72.
3) Indorato RL, DeBonis S, Kozielski F, Garcia-Saez I, Skoufias DA. STLC-resistant cell lines as tools to classify
chemically divergent Eg5 targeting agents according to their mode of action and target specificity. (Under
Submission)
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Plasma proteome of Acute Myeloid Leukemia
SOCORO YUSTE Nuria1, COURT Magali2, POLACK Benoit1,4, CAHN Jean Yves1,3, MOSSUZ Pascal1,4
1
Equipe TheREx-Laboratoire TIMC-IMAG, Techniques de l’Ingénierie Médicale et de la Complexité Informatique, Mathématiques et Applications de Grenoble, UMR UJF CNRS 5525
2
Plateforme d’Analyses Protéomiques EDyP-Service – CEA Grenoble
3
Clinique Universitaire d’Hématologie – CHU Grenoble
4
Laboratoire d’Hématologie cellulaire et moléculaire - Institut de Biologie et Pathologie – CHU Grenoble
[email protected]
Tél : 06.52.40.12.13-04.76.76.63.77
Acute Myeloid Leukemia (AML) is a heterogeneous clonal disorder in which hematopoietic
stem cells are proliferated in an uncontrolled way. Depending on the grade of maturing of
these clonal cells, we can distinguish the different subtypes of AML. Some of them have such
a short average of survival that they have become a critical therapeutic challenge. Nowadays,
genetic studies are the most developed in this area. For instance, researchers have discovered
chromosomal disorders such as point mutations in the genes of tyrosine kinase receptors or in
myeloid transcription factors; but also inversions, (inv(16)) or chromosomal translocations
(t(8;21)). Nevertheless, little is known about proteomic characterization of AML. In this
context, we have carried out two parallel studies with plasma samples from AML patients
included in prospective clinical trials of the GOELAMS (Groupe d’Etude Ouest-Est des
Leucémies aiguës). In both experiments we have used a new and effective technique to purify
samples: magnetic nanoparticles. They join low-abundant proteins to their surface and,
thanks to their magnetic core; we can separate them from the rest of the sample that
contains high-abundant proteins. Afterwards, the proteins of the nanoparticles were analyzed
by SELDI-TOF MS/MS. Basing ourselves on the resulted proteomic profiles, we selected 12
plasmas belonging to two subgroups of patients: six from alive patients and six from dead
ones. Next, these plasmas were analyzed by LC MS/MS in two different ways. In the first one,
we quantitatively compared plasma proteomes of alive patients and dead ones. We arrived to
quantify 445 proteins of which we selected 28 as possible biomarkers with a prognosis value:
either alive patient plasma=good prognosis; or dead patient plasma=bad prognosis. The other
study consisted of a large analysis comparing the 12 AML plasma proteomes by LC MS/MS
with 27 plasma proteomes of healthy subjects (control). A considerable list of 1305 proteins
was obtained from AML plasmas of which, just 284 proteins have appeared to be only
expressed in AML patients among which we can highlight a huge list of ribosomal proteins.
Once finished both experiments, we have put them together so as to obtain a quantitative
prognosis value of the proteins only found in the plasmas of AML patients. Results stand out a
list of fourteen proteins well expressed in AML patients but not in healthy ones with a
prognosis value-added. On the one hand, the most significant proteins as biomarkers of bad
prognosis are: cytochrome b5, ribosomal protein L11, ribosomal protein LP2 and ribosomal
protein S7. On the other hand, as good prognosis biomarkers we have peroxiredoxin 3,
ribosomal protein SA and S100A7 protein. Furthermore, experimental techniques such as
western-blot will be carried out in order to prove if these potential biomarkers are really
expressed in AML plasmas.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Transcriptional leukotriene pathway activation
in Apolipoprotein-E deficient mice exposed to
intermittent hypoxia : role in atherosclerosis
E Gautier1,2,Bäck M3, C Arnaud1, M Petri3, P Levy1,2, F Stanke-Labesque1,2
1
Laboratoire HP2 INSERM U1042, Grenoble-France.
Université Grenoble 1, Faculté de Médecine, IFR1, Grenoble, F-38042 France
3
Department of medecine, Karolinska Intitutet and university Hospital, Stockholm-Sweden
2
Background
5-lipoxygenase (LOX)-pathway is activated in obstructive sleep apnea syndrome (OSA) and
seems to be involved in the early vascular remodelling asociated to OSA1. Exposure of
Apolipoprotein-E deficient (ApoE-/-) mice to intermittent hypoxia (IH) accelerated
atherosclerosis progression2, but the link between IH, atherosclerosis and LOX-pathway
remains to be further explored.
Aim
The aim of this study was to investigate the transcriptional profile of the LOX-pathway and its
link with atherogenesis in ApoE-/- mice exposed to IH.
Methods
40 ApoE-/- mice were exposed to IH (21%-5% FiO2, 60s cycle, 8h/day) or normoxia (N) for 8
weeks.
Atherosclerosis on aortic roots was quantified by Oil-Red-O and genomic expression of LOXpathway and cytokines were evaluated in aortas by real time quantitative reverse
transcriptase-PCR.
Results
IH aggravates atherosclerosis (p = 0.008) without change of plasma lipid levels. Genomic
expression of several enzymes and receptors of the LOX-pathway were increased (P<0.05) in
aorta of IH mice (5-lipoxygenase (5-LOX), 5-lipoxygenase activating protein (FLAP), leukotriene
A4 hydrolase (LTA4H), cysteinyl-leukotriene receptor type 1 (cysLT1R1)). Atherosclerosis lesion
sizes significantly correlated to mRNA levels of LOX-pathway genes (5-LOX: r=0.552, P=0.05;
FLAP: r=0.714; P=0.01; LTA4H: r=0.582; P=0.04; cysLT1R1/ r=0.543, P=0.05) in IH mice,
whereas lesion sizes of N mice only correlated to cholesterol level (r=0.571; P=0.02).
Furthermore, RT-PCR data showed greater mRNA levels of pro-inflammatory cytokines
(interleukin 6 (P=0.04), chemokine ligand 3 (P =0.05) and cytokine receptors (tumor necrosis
factor receptor (TNFr) 1 and 2 (p = 0.02 for both genes) in IH mice than N.
Conclusion
Exposure of ApoE-/- mice to IH accelerated the atherogenesis and activated the transcription
of the LOX-pathway, both being highly correlated. Since the LOX-pathway also activates the
pro-inflammatory cytokine pathway, these data collectively highlight the interest of
investigating the effect of leukotriene pathway inhibitor in atherosclerosis progression in ApoE/mice exposed to IH.
References
1: Stanke-Labesque et al, J Lipid Res 2012; 1944-51
2 : Gautier et al, Eur Resp J 2012 PMID: 23060635
P a g e | 106
Journée de la Recherche Médicale 2013
Medico-economic assessment of multiplex realtime PCR assays for emergency diagnosis and
prophylaxis of selected infectious diseases
V. Sutera1, C. Recule1, M.R. Mallaret2, P. Pavese3 J.P. Brion3, F. Sergent4, V. Equy4,
K. Bourde Vacher5, J. Fauconnier6, I. Pelloux1, J. Croize1, S. Boisset1, M. Maurin1
Laboratoire de Bactériologie, 2Unité d’Hygiène Hospitalière et Gestion des Risques
(UMAGRIS), 3Service des Maladies Infectieuses, 4Service de Gynéco-Obstétrique, 5Service
Biomédical, 6Département de l’information médicale; CHU de Grenoble, Grenoble, France
1
Early detection of bacteria in infected patients and chronic carriers is critical for their optimum
therapeutic and prophylactic management, and to prevent human-to-human transmission of
infectious diseases. Real-time PCR technology meets these needs, producing results in 2-3
hours where traditional culture techniques require several days to weeks. The GeneXpert
(Cepheid) is a semi-automatic device allowing rapid and easy detection of specific pathogens
by a multiplex real-time PCR approach. This study describes an evaluation of the medical and
economic impacts generated by the use of this diagnosis system in Grenoble University
Hospital (Grenoble, France) for four bacterial pathogens: Mycobacterium tuberculosis (MTB),
Clostridium difficile (Cdif), Streptococcus agalactiae (GBS), Glycopeptide-resistant
Enterococcus (GRE). These tests were chosen according to preliminary bibliographic and local
epidemiological studies, and with the help of medical staffs involved in this project.
The medical interests of the GeneXpert platform included: 1/ an earlier diagnosis and
antibiotic treatment adaptation (MTB, Cdif); 2/ a rapid screening for acquired antibiotic
resistances (GRE and MDR strains of M. tuberculosis), and 3/ rapid detection of chronic
carriage allowing earlier and more reliable decision for patients' isolation (Cdif) and
prophylactic treatment optimization (GBS).
The economic assessment of the project showed a significant increase in laboratory expenses
compared to previous techniques. However, this over-cost was globally counterbalanced by:
1/ higher hospital income (T2A) owing to more sensitive detection of nosocomial infections
(Cdif); 2/ a drastic reduction in the prescription of diagnostic tests because of early diagnosis
and easier management of patients (21% reduction for Cdif); 3/ reduction in the rate of
patients' isolation because of increased specificity of the diagnosis (Cdif) ; and 4/ reduction in
the prescription of antibiotics (Cdif).
Our experience with the implementation of a molecular biology platform allowing early and
rapid diagnosis of selected infectious diseases shows overall favourable medico-economic
impacts, together with an optimization of laboratory organization. Additionally, this new
diagnostic strategy facilitates the implementation of current recommendations for the control
of infectious diseases and dissemination of multidrug resistant pathogens.
P a g e | 107
Journée de la Recherche Médicale 2013
Evaluation de la sensibilité aux antibiotiques de
31 souches de Francisella tularensis
isolées en France
V. Sutera1,2, M. Levert2,J-N Del Bano1, F. Bernet1, S. Boisset1,2, D. Schneider2, M. Maurin,1,2
1
Laboratoire de bactériologie-Centre Hospitalier Universitaire de Grenoble-38043 Grenoble
2
LAPM, UMR 5163, CNRS/UJF, Campus Santé, 38700 LA TRONCHE
Two subspecies of F. tularensis, a Gram-negative bacterium, are responsible for human
tularaemia: F. tularensis subsp. tularensis in North America and F. tularensis subsp. holarctica
in the entire Northern hemisphere. Tularaemia patients usually present with a localized
lymphadenopathy, with or without infection at the inoculation site of bacteria. More severe
diseases include the pneumonic and typhoidal forms of tularaemia. Fluoroquinolones and
tetracyclines (mainly doxycycline) are used as first-line treatment for cases with mild to
moderate severity, whereas the aminoglycoside gentamicin is advocated for severe cases.
The aim of this study was to determine the antibiotic susceptibilities of 31 isolates (4 from
hares, 27 from tularaemia patients) of F. tularensis subsp. holarctica obtained in France
between 2004 and 2010. Species and subspecies identifications were obtained by sequencing
of the 16S rRNA-23S rRNA intergenic region. Minimal Inhibitory Concentrations (MICs) were
determined using a microdilution method in liquid medium for levofloxacin, ciprofloxacin,
moxifloxacin, doxycycline and gentamicin. Erythromycin was also tested to differentiate biovar
I from biovar II strains. We also investigated the presence in the 31 natural strains of F.
tularensis of antibiotic resistance mutations previously characterized in in vitro selected
resistant mutants (Gestin et al., 2010; and unpublished data). Especially, we PCR amplified
and sequenced the genes encoding the 23SrRNA (rrl) or its associated ribosomal proteins L22
and L4 (rplD, rplV) for macrolides resistance, and the gene encoding subunit A of DNA gyrase
(gyrA) for fluoroquinolones resistance.
All 31 French isolates of F. tularensis subsp. holarctica displayed low MICs to antibiotics of
clinical use in tularaemia patients (cf. Table). Results for fluoroquinolones correlated with the
absence of gyrA gene mutation. We found a low level of resistance to erythromycin (MICs, 416 µg/mL) which correlated with the presence in all tested strains of a mutation (A534G) in
the rplD gene and in the rrl gene (T2155 deletion and A2059C) as compared to the OSU18
and LVS strains. Such genetic variations may explain the various MICs to macrolides observed
between F. tularensis subsp. holarctica strains found in Eastern Europe, Western Europe and
North America.
Key words: Tularaemia, antibiotherapy, France.
P a g e | 108
Journée de la Recherche Médicale 2013
Targeted therapy improves overall survival in
metastatic renal clear cell carcinoma:
Monocentric review since 2000
Mélanie TADJ a; Valentin ARNOUX b; Mireille MOUSSEAU a; Jean-Luc DESCOTES b; JeanLouis QUESADA c; Lamia BENSAADI d ; Mathieu LARAMAS a
a
Medical Oncology, Michallon University Hospital, Grenoble
Department of urology, Michallon University Hospital, Grenoble
c
Clinical Research Center, clinical epidemiologic unit, Michallon University Hospital, Grenoble
d
Department of pathology, Michallon University Hospital, Grenoble
Correspondence: [email protected]; Medical Oncology, University Hospital, CS
10217,38043 Grenoble cedex 9, France.
b
Introduction
Anti-angiogenic treatment had radically modified therapeutic strategy in metastatic renal cell
carcinoma (mRCC). This study is aimed to determine the overall survival (OS) improvement in
clinical practice.
Patients and methods
Retrospective, monocentric and non-interventional study in mRCC diagnosed since 2000 with
2 cohorts of patients determined according to the first line treatment (targeted therapy or
others treatment).
Results
Between 1 January 2000 and 31 December 2010, 98 patients were included. The 2 cohorts
were balanced with regard to baseline disease and demographic characteristics in particular
for prognosis profiles distribution. As first line, 58 patients received targeted therapy whose
71% were treated by sunitinib, 21% by bevacizumab and 8% by temsirolimus. In nontargeted therapy cohort (n=40), 37.5% were treated by cytokines, 15% by cytotoxic
chemotherapy or hormonal therapy. Patients treated with targeted therapy had a significantly
longer median OS (30 months vs 13 months; p<.003, log-rank test). The Hazard Ratio (HR)
of death at 3 years was 0.53 (95% Confidence Interval, 0.33-0.85; p=.008, log-rank test).
When adjusted to the prognosis profile, the HR of death was 0.43 (95%CI, 0.27-0.71).
Conclusions
This retrospective study demonstrated the improvement of OS due to targeted treatments, for
all prognostic risk groups. This result supported the complete change of care of mRCC patients
with extension of therapeutic indications and efficient therapeutic lines.
P a g e | 109
Journée de la Recherche Médicale 2013
Evaluation prospective des éléments
décisionnels conduisant à admettre en
réanimation des patients porteurs
d’un cancer bronchique (étude CBP-DO)
Timsit Jean-François, Toffart Anne-Claire, Vesin Aurélien, Sakhri Linda, Moro-Sibilot Denis
Timsit Jean-François. [email protected]
Equipe 11 Institut Albert Bonniot. Rond-point de la Chantourne. 38706 La Tronche
Université Grenoble 1 U 823-Institut A Bonniot-Université J Fourier
Rond-point de la Chantourne. 38706 La Tronche Cedex
Responsable du laboratoire : Pr Christian Brambilla
Intérêt et cadre de la recherche : Le pronostic des patients porteurs d’un cancer bronchopulmonaire (CBP) a changé et leur admission en réanimation n’est plus synonyme de
mortalité. Nos critères de sélection basés sur l’intuition et les recommandations des sociétés
savantes ne sont pas performants pour prédire quel patient bénéficiera d’une prise en charge
en réanimation si nécessaire. Aucune étude n’a défini les éléments amenant à proposer ces
patients au réanimateur.
Objectif scientifique : L’étude « Prise en charge des patients porteurs d’un cancer bronchopulmonaire présentant une dysfonction d’organe » (CBP-DO) a pour objectif de décrire de
façon prospective les filières de prise en charge des patients porteurs d’un CBP avec une
défaillance d’organe (DO).
Méthodes : Ce travail a été mené au sein du CHU de Grenoble entre décembre 2010 et
décembre 2012. Tout patient porteur d’un CBP présentant au moins une DO a été inclus. Les
informations concernant les motivations du médecin prenant en charge initialement ces
patients à les proposer au réanimateur ont été recueillies de façon prospective, de même que
les raisons d’un éventuel refus d’admission. Les patients pouvaient alors bénéficier d’une prise
en charge en réanimation, médicale optimale ou palliative. Les critères amenant à proposer le
patient au réanimateur ou à ne pas l’admettre en réanimation ont été évalués à l’aide d’un
test du chi-2.
Résultats : Cent quarante patients ont été inclus : 87 (62%) par la pneumologie, 37 (26%)
par les urgences et 16 (11%) par un autre service du CHU. Un quart (n=33) des patients a
présenté cette DO la nuit ou le week-end. L’avis du réanimateur a été demandé pour 49
(35%) patients (le plus souvent par les urgentistes, p=0.0017) et celui de l’oncologue pour
121 (86%) patients et 36 soit 73% des patients proposés ont été admis en réanimation. Les
facteurs corrélés à la proposition du patient au réanimateur concernent le patient (état
général satisfaisant (p<10-4)), la pathologie tumorale (absence de métastases (p=0.0014),
patients non encore traités ou répondeurs à la chimiothérapie (p<10-4)) et la gravité de la
situation aiguë (logistic organ dysfunction (LOD) (p<10-4)). Par contre, lorsque l’avis du
réanimateur est pris, seul le statut métastatique est important dans sa décision (p=4.10-4).
Conclusion : Au CHU de Grenoble, il apparait donc que la principale limitation à l’admission
en réanimation des patients porteurs d’un CBP avec au moins une DO est liée à une autocensure des médecins prenant initialement en charge le patient. Les patients avec un état
général altéré ou une maladie métastatique ne répondant pas à la chimiothérapie ne sont le
plus souvent pas proposés au réanimateur. La généralisation de ces résultats ne sera possible
qu’avec une étude multicentrique.
P a g e | 110
Journée de la Recherche Médicale 2013
Neuroprotection induite par l’érythropoïétine
carbamylée : Effets sur la perméabilité
mitochondriale et l’apoptose
Thibaut Trouvé Buisson, Pierre Bouzat, Anne Millet, Yvonnick Boué, Cécile Batandier, Emmanuel Barbier,
Jean François Payen
INSERM U836, Grenoble Institut des Neurosciences, Grenoble
Introduction
L’œdème cérébral secondaire au traumatisme crânien peut être responsable d’une hypoxie
cellulaire. Ces phénomènes associés à l’augmentation du calcium intracellulaire et à la
dysfonction mitochondriale1 entraînent une apoptose qui aggrave les lésions initiales2.
L’érythropoïétine carbamylée (CEPO), dérivé de l’EPO sans propriété hématopoïétique, a
démontré un effet neuroprotecteur dans des modèles expérimentaux de traumatismes
crâniens focaux et diffus3. Les mécanismes de cette protection cellulaire restent à investiguer.
Matériel et Méthodes
Des rats Wistar mâles, de 350 à 500 grammes, sous anesthésie générale, ont été séparé en
deux groupes : un groupe TC selon le modèle d’impact accélération et un groupe témoin. Les
animaux étaient traités à 30 mn, soit par solution saline isotonique (TC-Placebo) soit par 50
μg/kg de CEPO. Des séquences d’IRM de perfusion ont permis d’obtenir une cartographie de la
saturation locale en oxygène (lSO2) à 2 heures du traumatisme. Après euthanasie, l’ouverture
du pore de transition de perméabilité mitochondriale a été mesurée par spectrofluorimétrie ex
vivo sur mitochondries isolées. La capacité de rétention calcique (CRC), correspondant à la
dose de calcium nécessaire à l’ouverture du pore, a été mesurée en présence des différents
substrats de la chaîne respiratoire (Succinate et Glutamate Malate) et du principal inhibiteur
du mPTP (Ciclosporine A). Une deuxième série expérimentale réalisée selon les mêmes
conditions avec euthanasie à 24h du traumatisme a concerné l’étude de l’expression de la
caspase 3 en immunofluorescence. Un test de Kruskal Wallis a été réalisé avec test de Mann
Whitney et correction de Bonferoni pour connaître le sens des différences.
Résultats
La lSO2 moyenne était inférieure dans le groupe TC Placebo par rapport au groupe Témoin
(71±11% vs 83±5%; p=0,005). Le groupe TC CEPO (78±6%) ne présentait pas de différence
significative par rapport aux autres groupes. La capacité de rétention calcique était inférieure
dans le groupe TC-CEPO par rapport au groupe TC-Placebo en présence de Succinate (56±8
μM vs 40±6,7 μM; p<0,05) et de Glutamate-Malate (93±16 μM vs 72±13 μM; p<0,05). Il
n’existait pas de différence significative en présence de ciclosporine A. L’expression de la
caspase 3 était augmentée dans le groupe TC-Placebo par rapport au groupe Témoin
(10,9±1,1% vs 5,3±1,6%; p<0,05). Le groupe TC-CEPO (6,8±4,1%) ne présentait pas de
différence significative par rapport aux autres groupes.
Discussion
Cette étude confirme l’existence d’une hypoxie cérébrale précoce associée à une baisse de la
capacité de rétention calcique après un TC diffus. Cette tendance mitochondriale vers la
transition de perméabilité est corrélée avec une hyperexpression de la caspase 3.
Ces phénomènes sont partiellement corrigés par l’administration de CEPO 30 minutes après le
traumatisme, ce qui confirme le potentiel anti apoptotique et par conséquent neuroprotecteur
de cette molécule.
Références
Front Pharmacol 2012; 3: 60.
2099-105.
1
2
Crit Care 2005; 9(1): 66-75.
P a g e | 111
3
Crit Care Med 2011; 39(9):
Journée de la Recherche Médicale 2013
Gestion et communication des données
manquantes dans les études cliniques
en réanimation
Aurélien VESIN,
Institut Albert Bonniot, Université Joseph Fourier, Rond point de la chantourne, 38706 LA TRONCHE
[email protected]
Jean François TIMSIT, Institut Albert Bonniot, Université Joseph Fourier ;
Réanimation médicale, CHU Grenoble
Introduction
Malgré l'effort des investigateurs d'études cliniques, les données manquantes sont un problème
récurrent qui engendre fréquemment des biais. Nos objectifs sont (1) d'évaluer la gestion et la
communication concernant les données manquantes dans la littérature de Réanimation (2) de
décrire à partir d'un exemple l'impacte de l'utilisation de différentes méthodes de gestion de
données manquantes sur les résultats (3) De proposer une méthodologie pour aborder le
problème de données manquantes dans l'analyse d'une étude clinique.
Méthode
Nous avons revus 44 articles publiés dans 3 journaux importants de recherche en soins
intensifs. Nous nous sommes basés sur les données de l'étude Conflicus (prévalence des
conflits interpersonnels, de l’épuisement professionnel dans les services de réanimation,
enquête de prévalence multicentrique mondiale, 26 pays, 306 centres, 7209 questionnaires)
pour illustrer l'utilisation de 3 techniques différentes de gestion des données manquantes et
leur effet respectif sur les résultats.
Résultats
Parmi les 44 articles publiés, 16 (36.4%) ne donnaient aucune information sur la présence de
données manquantes, 6 (13.6%) déclaraient n'avoir aucune donnée manquante, 20 (45.5%)
présentaient la fréquence des données manquantes mais n'en tenaient pas compte et seulement
2 (4.5%) utilisaient des méthodes avancées pour imputer les données manquantes.
Dans notre exemple issu de l'étude Conflicus, nous avons mis en évidence une relation entre
l'intensité du stress au travail et le nombre de réponses manquantes au questionnaire. La
fréquence de données manquantes par question pouvait atteindre 8%; cependant, une
analyse multivariée sur les 18 items du questionnaire excluant ceux qui sont incomplets
(méthode par défaut des logiciels d'analyse statistique) entrainerait une suppression de 24%
des observations. Aussi, nous avons remarqué pour plusieurs questions que les non-réponses
étaient associées à un niveau de stress plus élevé des sondés, mais aussi que le nombre de
questions non répondues était associé à plus de stress.
Les 3 méthodes d'analyse (cas complets, imputation multiple et imputation à la médiane) ne
montraient pas de différences majeures sur l'analyse multivariée. Malgré tout, nous avons
observé des variations des estimateurs obtenus jusqu'à 60% et jusqu'à 18% pour les erreurs
standards entre l'analyse des cas complets et les 2 méthodes d'imputation. L'imputation à la
médiane réduisait artificiellement les erreurs standards tandis que l'analyse des cas complets, par
la perte de puissance, montrait les erreurs standards les plus élevées. L'imputation multiple
semble un bon compromis entre les deux autres méthodes car elle utilise 100% des données mais
retranscris dans les résultats l'incertitude des imputations réalisées. Finalement, nous avons
rédigé un guide méthodologique sur la conduite à tenir face aux données manquantes.
Conclusion
Les données manquantes sont omniprésentes dans les études cliniques. Il est important de les
signaler et d'en tenir compte dans les analyses.
P a g e | 112
Journée de la Recherche Médicale 2013
Le polymorphisme de l’IL28B n’affecte pas
l’activité lymphocytaire des cellules
immunitaires intra-hépatiques en cas d’hépatite
chronique virale B
J.-P. Zarski (1), M.-A. Thélu (1), A. Marlu (1), H. Marche (1),
E. Fugier (1), V. Leroy (1), P. Marche (1), E. Jouvin-Marche (1)
(1) Grenoble.
Introduction
Le polymorphisme de l'IL28B CC est associé à une meilleure réponse virologique chez les
malades ayant une hépatite virale chronique C traités par Peg interféron + Ribavirine.
Cependant, les mécanismes cellulaires de cette association sont mal documentés. Le rôle de
l’IL28B sur la réponse virologique de l’hépatite chronique B est par contre mal connu. Le but
du travail était d'étudier et de comparer l'activité de dégranulation des cellules immunitaires
du foie ayant une hépatite virale chronique C ou B histologiquement prouvée.
Patients et Méthodes
72 patients ayant une hépatite virale chronique C et 28 une hépatite virale chronique B ont
été inclus dans l’étude. Les examens biologiques, virologiques et le polymorphisme de l'IL28B
étaient effectués en parallèle. L'activité de dégranulation des lymphocytes T, NKT et des
cellules NK était réalisée sur biopsie fraiche par cytométrie de flux, grâce à l'expression du
marqueur CD107a.
Résultats
L’activité de dégranulation des lymphocytes T (4.5% vs 2.7%, p = 0,007), NKT (7.3% vs
4.1%, p = 0,009) et des cellules NK (5.7% vs 4.4%, p = 0,031) était significativement plus
élevée chez les patients ayant une hépatite chronique virale C et un IL28B CC (n= 21) par
rapport aux patients CT+ TT (n= 51). La différence restait statistiquement significative dans
les lymphocytes T et NKT des malades de génotype viral 1 (4.1 vs 3.0, p=0.053,7.1 vs 4.5,
p=0.028 réciproquement), pour les lymphocytes NKT des patients porteurs du génotype viral
1a (9.0% vs 4.0%-p=0.031) et pour les lymphocytes T du génotype 1b (6.2% vs 2.7%,
p=0.042). Par contre, chez les malades ayant une hépatite virale chronique B, aucune
différence n'était constatée quelle que soit la population lymphocytaire étudiée selon l'IL28B.
La comparaison des fréquences de dégranulation des cellules immunitaires des patients
infectés par le VHC ou le VHB, révélait une différence significative de dégranulation des
lymphocytes NKT (5.2% vs 3.0%, p=0.042). Chez les patients porteurs du polymorphisme de
l’IL28B CC, le taux de dégranulation des lymphocytes T et NKT était significativement plus
élevé chez les patients VHC+ que chez les patients VHB+ (4.5% vs 2.1%, p=0.012 et 7.3% vs
3.1%, p=0.003 réciproquement), alors que ces différences n’étaient pas retrouvées chez les
patients porteurs du génotype IL28B CT.
Conclusion
Ces résultats suggèrent que l'activité cytolytique des cellules immunitaires avant traitement
est plus élevée chez les patients ayant une hépatite virale chronique C porteurs d’un
polymorphisme IL28B CC, que chez les patients VHB pour lesquels l'IL28B n'intervient pas
dans la réponse immunitaire.
P a g e | 113
Journée de la Recherche Médicale 2013
Les résumés EDISCE & EDCSV sélect ionnés pour communicat ions orales P a g e | 115
Journée de la Recherche Médicale 2013
Isolation of several scFv of non-human primate
origin, neutralizing type E botulinum toxin by
targeting its light chain
Arnaud AVRIL1, Siham CHAHBOUN1, Thibaut PELAT1, Michael HUST2,
Stefan DÜBEL2, Philippe THULLIER1.
1
Unité de Biotechnologie des Anticorps et des Toxines, département de microbiologie, Institut
de Recherche Biomédicale Armées (IRBA), La Tronche, France.
2
Institut für Biochemie und Biotechnologie, Technische Universität Braunschweig,
Braunschweig, Germany.
Presenting author: [email protected]
Botulinum neurotoxins (BoNTs) are classified into 7 serotypes (A to G), among which A, B and E
subtypes are responsible of the majority of human cases. BoNTs are the most toxic substance for
humans (LD50 estimated up to 1 ng.kg-1in human), and are among the major potential biological
warfare agents (CDC class A agent). Each BoNT is composed of a 100 kDa heavy chain and a
50 kDa light chain. BoNTs act preferentially on peripheral cholinergic nerves ending, where they
block the acetylcholine release, thus causing a flaccid paralysis, leading to a respiratory distress.
Patient care requires admission in an intensive care unit for several months, generally with
mechanical ventilation. Currently, in absence of synthetic inhibitors approved, the botulism-specific
treatment is based on the utilization of polyclonal antibodies (F(ab')2) from animal origin (as antibotulismus Behring, Novartis, Basel, Switzerland), often badly tolerated. BoNTs are used as drug
for the relief of muscular spasticity, such as cervical dystonia or strabismus, and this utilization is
increasing. Because vaccination against botulism would prevent such therapeutic use, it is ethically
disputable at a global scale.
In the context of the European project "AntiBotABE" (www.antibotabe.com), recombinant
antibodies neutralizing BoNT/A, B and E by targeting their heavy and light chains, are researched. 1
These six antibodies will be isolated by an original strategy based on macaque immunizations,
antibody isolations by the phage-display technology, and germline-humanization of the most
neutralizing antibody of each library. 2–4
Here, a hyper-immune library was generated in the pHAL35 phagemidic vector, starting from a
macaque immunized with BoNT/E3 light chain (BoNT/E-LC). Contrary to other BoNT serotypes,
BoNT/E is secreted by the bacteria as an unique inactive chain, that requires to be nicked by host
proteases for toxicity, and this nicking is associated with a 100-fold increase in toxicity. Because
only limited quantity of toxin was digested each day, it was impossible to purify the toxin from the
3-component activation mixture (activated BoNT/E, trypsin and trypsin inhibitor), and this whole
mixture was used for the library panning. Specificity of eluted phages for activated BoNT/E3 was
confirmed in ELISA. After sequencing of 100 clones from the last round of panning, 85 different
sequences were identified. Thirty-eight of them were selected according to sequences diversity,
then expressed and purified. Three scFv inhibited BoNT/E3 catalytic activity in the SNAP25
endopepdidasic test and neutralized BoNT/E3 in the ex vivo hemidiaphragmatic neutralization
assay. The best inhibitor, ELC76 inhibited 50 % of the toxin activity at molar ratio (scFv ELC76 /
holotoxin) of 51,724 / 1, and its affinity was measured at 1 nM. This scFv also neutralized BoNT/E3
in the ex vivo phrenic nerve-hemidiaphragm assay. It is the first time that a scFv neutralizing
BoNT/E by targeting its light chain was reported.
References
1. Chahboun S, Hust M, Liu Y, et al. Isolation of a nanomolar scfv inhibiting the endopeptidase
activity of botulinum toxin a, by single-round panning of an immune phage-displayed library of
macaque origin. BMC biotechnology. 2011;11:113.
2. Thullier P, Chahboun S, Pelat T. A comparison of human and macaque (macaca mulatta)
immunoglobulin germline v regions and its implications for antibody engineering. mAbs.
2010;2(5):528–38.
3. Pelat T, Bedouelle H, Rees AR, et al. Germline humanization of a non-human primate antibody
that neutralizes the anthrax toxin, by in vitro and in silico engineering. Journal of molecular
biology. 2008;384(5):1400–7.
4. Avril A, Froude JW, Mathieu J, Pelat T, Thullier P. Isolation of antibodies from non-human
primates for clinical use. Current drug discovery technologies. 2013;
P a g e | 117
Journée de la Recherche Médicale 2013
BMP9 et BMP10,
Deux nouvelles protéines impliquées dans
la fermeture du canal artériel
S. Levet1,2,3, D. Ciais1,2,3, E. Tillet1,2,3, M. Bidart3,6,7, C. Coutton3,4,5, C. Mallet1,2,3, M.
Subileau1,2,3, T. Debillon8, J-J. Feige1,2,3 et S. Bailly1,2,3
1
Inserm, U1036, Grenoble, F-38054 France
CEA, DSV, iRTSV, Laboratoire Biologie du Cancer et de l'Infection, Grenoble, F-38054 France
3
Université Joseph Fourier, Grenoble, F-38054 France
4
Laboratoire de Génétique Chromosomique, Département de Génétique et Procréation, Hôpital
Couple Enfant, CHU Grenoble, Grenoble, France
5
Equipe “Génétique, Infertilité et Thérapeutique”, Laboratoire AGIM, CNRS FRE3405,
Grenoble, France
6
INSERM, U836, Equipe 7 Nanomédecine et Cerveau, BP 170, Grenoble, France
7
Institut de Biologie et Pathologie, Centre Hospitalo-Universitaire, Grenoble, France
8
Service de Médecine et de Réanimation Néonatale, Hôpital Couple Enfant, Grenoble, France.
2
Le canal artériel est un shunt artériel reliant l’artère pulmonaire et l’aorte qui permet de dévier le
flux sanguin hors des poumons non-fonctionnels durant la vie embryonnaire. Il se ferme très
rapidement à la naissance, et un défaut lors de cette fermeture constitue une situation
pathologique rencontrée chez 0,05% des enfants nés à terme. Cette persistance du canal artériel
est une complication majeure de la prématurité, avec une incidence de 50% pour les enfants nés à
27 semaines d’aménorrhée. La prise en charge thérapeutique repose sur l’administration
d’indométacine ou d’ibuprofène. En absence de réponse au traitement, la ligature chirurgicale est
proposée.
Notre laboratoire s’intéresse depuis plusieurs années aux Bone Morphogenetic Proteins (BMPs) et
plus particulièrement à BMP9 et BMP10, 2 facteurs de croissance appartenant à la famille TGF-β,
qui se lient au récepteur ALK1 (Activin receptor-Like Kinase 1) spécifiquement exprimé à la surface
des cellules endothéliales. Nous avons montré que ces deux facteurs circulent à des concentrations
élevées au cours de la période périnatale et qu’ils jouent un rôle clé dans l’angiogenèse et la
lymphangiogenèse périnatale.
L’objectif de notre travail est d’étudier le rôle de BMP9 et BMP10 dans la fermeture du canal
artériel. Cette fermeture s’effectue en 2 phases : 1) fermeture fonctionnelle, par vasoconstriction,
dans les heures qui suivent la naissance; 2) fermeture anatomique, qui résulte de la
transformation du canal artériel en ligament. Pour aborder cette problématique, nous avons utilisé
des souris invalidées pour BMP9.
Nos résultats montrent que l’invalidation de BMP9 n’affecte pas la fermeture fonctionnelle. On note
cependant que l’épaisseur de la paroi du canal est significativement diminuée chez ces souriceaux.
Cependant, si nous injectons à ces souriceaux un anticorps neutralisant anti-BMP10 aux jours 1 et
3 après la naissance, nous observons une réouverture du canal artériel le quatrième jour. Nous
avons identifié, in vitro, deux cibles de BMP9 et BMP10 susceptibles de jouer un rôle dans ce
processus : la cyclooxygénase 2 et la hyaluronane synthase 2. Ces deux cibles pourraient expliquer
le défaut d’épaississement de la paroi du canal artériel qui, bien que permettant la fermeture
fonctionnelle, empêcherait la fermeture anatomique de s’effectuer correctement. Nous testons
actuellement cette hypothèse par une approche de microscopie électronique, afin d’analyser la
transformation de ce canal en un ligament.
Parallèlement, l’étude des variations génomiques dans les bases de données de patients
(AchroPuce, DECIPHER, ISCA) et de témoins sains (DGV) analysées par CGH-array ont permis de
définir une région minimale critique (RMC) corrélée avec la présence d’un canal artériel persistant
chez plusieurs patients. Ainsi, une région de 1Mb, située en 2p13.3, et comprenant 19 gènes dont
BMP10 est retenue comme étant associée à une persistance du canal artériel chez l’homme.
Ces résultats mettent en évidence pour la première fois un rôle de BMP9 et BMP10 dans la
fermeture du canal artériel. Ils pourraient permettre d’envisager de nouvelles approches
thérapeutiques chez ces nouveau-nés souffrant d’une persistance du canal artériel.
P a g e | 118
Journée de la Recherche Médicale 2013
Pharmacoepidemiological approach
to assess long-term benefits
of inhaled corticosteroids in asthma
Sébastien Chanoine, Raphaëlle Varraso, Meriem Benmerad, Christophe Pison, Frédéric
Gormand, Jocelyne Just, Nicole Le Moual, Pierrick Bedouch, Jean Bousquet, Francine
Kauffmann, Isabelle Pin, Valérie Siroux
[email protected]
Institut Albert Bonniot, Centre de Recherche Interdisciplinaire
Inserm/Université Joseph Fourier U823 (responsable : Professeur Christian Brambilla)
Rond-point de la Chantourne, 38706 La Tronche cedex
Background
Asthma is a major public health problem given its high prevalence and associated economic burden.
Inhaled corticosteroids (ICS) are the cornerstone of asthma maintenance therapy. The short-term
efficacy of ICS in preventing asthma morbidity and mortality has been clearly reported in clinical
and epidemiological studies but their long-term benefits on health outcomes are poorly studied.
Objective
The aim of this study was to apply a propensity score approach, in order to adjust for indication bias
related to observational studies, for assessing the long-term benefits of ICS on respiratory health
(lung function evolution, asthma control) and health related quality of life (HRQL) in adults with
asthma.
Population and methods
This analysis was performed among adults with persistent asthma from the longitudinal EGEA
(Epidemiological study on the Genetics and Environment of Asthma, bronchial hyperresponsiveness
and atopy) study. On the basis of the distribution, two levels of ICS exposure were identified
(threshold: 6 months/year). Lung function evolution, asthma control and HRQL were assessed by
standardized and validated methods. The propensity score was integrated in the regression models
as the inverse probability of exposure weighting to assess the long-term benefits of ICS.
Results
This analysis was conducted among 245 adults with persistent asthma, among which 78 were
regularly/continuously exposed to ICS (ICS++) while 167 were never/irregularly exposed to ICS
(ICS+/-) over the entire follow-up period (11.5 years on average). A comparable lung function
decline was observed between ICS+/- and ICS++ (β [95%CI] = -0.31 [-0.67; 0.06]. The ICS++
subjects had more often partly controlled/uncontrolled asthma (OR [95%CI] = 2.74 [1.73; 4.39])
and a lower total AQLQ score (β [95%CI] = -0.36 [-0.62; -0.10]) compared to ICS+/- subjects. The
results obtained with the propensity score method were similar to those obtained by adjustment.
Discussion and conclusion
To our knowledge, this is one of the first observational studies applying a propensity score approach
to try to take into account the confounding by indication bias in the assessment of the long-term
benefits of ICS in asthma. This analysis did not allow concluding to any long-term benefit of ICS on
respiratory health and HRQL, and therefore suggests the presence of residual confounding, and
possibly the presence of corticoresistance in few subjects. Despite its theoretical performance and
benefits, this study highlights that the propensity score approach does not systematically provide
better estimates than conventional multiple regression methods.
References:
Siroux V, Boudier A, Bousquet J, Vignoud L, Gormand F, Just J, et al. Asthma control assessed in the EGEA
epidemiological survey and health-related quality of life. Respir Med. 2012;106(6):820-8.
Siroux V, Basagaña X, Boudier A, Pin I, Garcia-Aymerich J, Vesin A, et al. Identifying adult asthma phenotypes
using a clustering approach. Eur Respir J. 2011;38(2):310-7.
Siroux V, Boudier A, Bousquet J, Bresson JL, Cracowski JL, Ferran J, et al. Phenotypic determinants of
uncontrolled asthma. J Allergy Clin Immunol. 2009;124(4):681-7.
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Journée de la Recherche Médicale 2013
Cellular iron homeostasis in leukemia:
experimental and modeling approaches
Emmanuel Pourcelot
1,3
, Nicolas Mobilia 3, Alexandre Donzé 4,5, Fiona Louis 2, Oded Maler 5,
Pascal Mossuz 1,3, Eric Fanchon 3, Jean-Marc Moulis 2.
21, chemin des sources- 38240 Meylan – [email protected]
Laboratoire Techniques de l’Ingénierie Médicale et de la Complexité, Equipe TheREx, UMR
5525, CNRS-UJF. Faculté de Médecine, 38706 La Tronche cedex – France
Responsable :Pr Philippe Cinquin
Use of iron resources and variations of the redox balance are processes involved in cell
proliferation and differentiation. They participate to normal hematopoiesis and their
disturbance may have an oncogenic role. Hematological neoplasia, such as acute myeloid
leukemia (AML), provide clinical evidence of the link between iron regulation, handling of
redox active components, and malignancy. Yet, the properties favoring proliferation of
leukemic clones detrimental to differentiation remain unclear. Iron and redox homeostasis are
grounded in a series of molecular events belonging to several metabolic and regulatory
networks. Our project aims at describing the functional differences between normal and
pathological hematopoiesis by analyzing experimental data from leukemic cells with
innovative modeling tools.
The core network of cellular iron regulation in mammals, organized around the Iron
Regulatory Proteins (IRP), has been represented in a simplified generic theoretical model with
five species (IRP, transferrin receptor, ferritin, ferroportin, and available ‘labile’ iron). The
evolution over time of these species has been described by ordinary differential equations and
the behavior of the biological system in hematopoietic precursors has been formalized in the
Signal Temporal Logic using the software Breach [1]. Sets of consistent parameters were first
estimated for the iron-replete situation corresponding to proliferating cells. The dynamic
response to iron deprivation, which was previously shown to contribute to differentiation in
some types of AML, was then monitored, and the relevant parameter region was determined.
The salient features and new properties of hematopoietic precursors were evidenced, as well
as identification of critical parameters [2]. Some of these important parameters, such as the
iron threshold above which the IRP regulators loose function, have been experimentally
measured in leukemic cell lines (KG1 and K562).
These data bear clinical relevance for patients supplemented with iron, or those under
chelation therapy. They are also used to further implement the theoretical model of cellular
iron homeostasis in order to improve its explicative and predictive power, and to unravel the
details of its dynamic interactions with other redox-dependent regulatory networks.
[1] Donzé, A., Fanchon, E., Gattepaille, L. M., Maler, O. and Tracqui, P. (2011) PLoS One 6,
e24246.
[2] Mobilia, N., Donzé, A., Moulis, J.-M. and Fanchon, E. (2012) Electronic Proceedings in
Theoretical Computer Science 92, 42-57.
http://rvg.web.cse.unsw.edu.au/eptcs/paper.cgi?HSB2012.4
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