Virus à ADN

SARS Coronavirus
Filovirus Ebola
Picornavirus Poliovirus
Adenovirus 5
Orthomyxovirus (Influenza)
Quelques particules virales vues au microscope électronique
Adénovirus humain 5

I. GENETIQUE CLASSIQUE
applicable aux virus qui se multiplient en culture cellulaire et peuvent être clonés biologiquement
. organisation des génomes (nombre de gènes, séquence, localisation)
. fonction des gènes (rôle dans le cycle viral et la pathogénie)
. manipulation des génomes
II. GENETIQUE INVERSE
applicable à tous les génomes que l’on peut cloner (clonage moléculaire) et à des gènes viraux isolés
Plages du virus de la vaccine
sur cellules de hamster
GENETIQUE DES VIRUS
ETUDE DES GENOMES VIRAUX, LEUR VARIABILITE, LEUR EVOLUTION
Plages du virus de la vaccine sur la
membrane chorioallontoique de l’œuf

I. GENETIQUE CLASSIQUE (Variabilité nécessaire)
Mutants spontanés
virus à ARN (10-3 à 10-4/nucléotide),
virus à ADN (10-8 à 10-11/nucléotide)
Mutants induits
agents chimiques : acide nitreux, hydroxylamine, nitrosoguanidine
analogues de bases : bromodésoxyuridine, 2 amino purine
agents intercalants : acridines
agents physiques : UV
Isolat primaire
Souche de laboratoire Vaccins vivants atténués
poliovirus sérotypes 1/2/3
rubéole
oreillons
rougeole
varicelle
cytomégalovirus humain
adaptation à la culture cellulaire (atténuation)

Phénotypes utiles pour l’isolement de mutants
1. Morphologie de plages : grande, petite, fusion cellulaire
Plage du virus de la vaccine
Cellules HeLa Cellules CV1 Cellules CV1 Cellules CV1
Non infecté Infection virus sauvage Infection virus fusionnant

Bromodésoxyuridine (nécessite l’expression d’une thymidine kinase virus tk-)
Acycloguanosine/Gancyclovir : nécessite l’expression de la thymidine kinase du virus herpès simplex
Azathymidine/didioxynucléotides : la réverse transcriptase des rétrovirus
Hydroxyurée : la ribonucléotide réductase
3. Résistance à des inhibiteurs de la multiplication virale
5. Mutants conditionnels thermosensibles ou cryosensibles
(mutations faux sens : régions génomiques codant des protéines)
2. Spectre d’Hôte (gain ou perte)
virus de la rougeole adapté à la multiplication sur cellules de poulet (mutation protéine d’attachement)
poliovirus adapté à la multiplication chez la souris (mutation protéine de capside qui permet l’attachement)
virus du polyôme qui se multiplie sur cellules embryonnaires (mutations dans région promotrice)
virus de la vaccine défectif pour la multiplication sur cellules humaines (mutations de protéines non structurales)
4. Résistance à des anticorps monoclonaux ou à des cellules T cytotoxiques
virus de la grippe, virus de la rage, VIH
Virus 33° C 40° C
Souche normale (sauvage) + +
Mutant thermosensible + -
Mutant cryosensible - +
Phénotypes utiles pour l’isolement de mutants (suite)