TP3_Test Ouchterlony

Partie 2 : Quelques aspects de la réaction immunitaire Terminale S
TP.2 - Les anticorps : des molécules spécifiques de la réponse immunitaire adaptative.
A l'approche des fêtes de fin d'année, la mère Noël est nerveuse comme tous les ans. En plus, cette année, Robert, son mari,
plus connu sous le nom de Père Noël, a choppé un gros rhume. Elle l'avait pourtant prévenu de ne pas faire du traîneau en
short avec ses potes, mais Robert est incorrigible. Bref, la mère Noël, Monique de son prénom, craint que Robert ait la
grippe. Elle contacte alors un ami vieil suédois à elle, Örjan Ouchterlony, pour avoir des conseils sur la manière de vérifier si
oui ou non Robert est atteint de la grippe.
Voici sa réponse : « Envar har rätt till undervisning. Undervisningen skall vara kostnadsfri, åtminstone på de elementära och
grundläggande stadierna. Den elementära undervisningen skall vara obligatorisk. »
En français, cela donne cela :
« Chère Monique, Pour vérifier si Robert a ou non la grippe, il faut vérifier s'il possède des anticorps « anti-grippe ». Les
anticorps sont des molécules de nature protéique qu'un organisme fabrique lorsqu'il a été en contact avec un virus par
exemple. Les anticorps sont présents dans le plasma sanguin et leur efficacité immunitaire s'explique en partie par leur
spécificité. Je te donne le détail d'un protocole que j'ai conçu dans les années 1940 et qui porte mon nom, le test
d'Ouchterlony ».
Votre mission : mettre en place le protocole d'Ouchterlony pour vérifier si le Père Noël est atteint par le virus de la grippe.
Activité 1 : Mise en évidence de la spécificité des anticorps par le test d'immunodiffusion sur gel (test d'Ouchterlony)
Les anticorps interviennent dans les réactions immunitaires en se liant à des molécules appelées antigènes, présents en
particulier sur les enveloppes externes des agents infectieux, tels que les virus. Il se forme alors un couple
antigène/anticorps appelé complexe immun. La présence de nombreux complexes immuns peut être visualisée dans une
boîte de Pétri sous la forme d'un arc de précipitation.
Le test d’Ouchterlony permet de mettre en évidence expérimentalement l'existence de complexes immuns par la
présence d'un arc de précipitation.
Protocole à suivre
Remarque : dans le protocole proposé, vous n'utiliserez pas de réels anticorps et antigènes, mais des solutions chimiques de substitutions
incolores (soude et sulfate de zinc), dont certaines peuvent réagir ensemble sous la forme d'un arc de précipitation.
1. Préparation du matériel
a. Creuser les 6 puits dans le gel avec la paille en utilisant le gabarit (modèle) fourni.
b. Enlever les disques de gélose du puits avec la paille ou l'aiguille lancéolée.
2. Réalisation des dépôts
a. Repérer par un marquage sur la boîte de Pétri la disposition des produits à déposer dans les puits.
b. Remplir complètement les différents puits : chaque produit devra être prélevé avec un compte goutte propre ou une
micropipette à embout propre, puis déposé dans les puits sans débordement ni bulle et sans endommager le gel d’agar.
Attention à bien respecter la disposition suivante :
Puits central : solution S : sérum contenant les anticorps du Père Noël
Puits périphériques : solutions B, C, E, L et O (1 solution par puits !!!)
- Solution B : antigène du virus de la grippe - Solution C : antigène du virus de la rubéole
- Solution E : antigène du virus de la rougeole - Solution L : antigène du virus de la mononucléose
- Solution O : antigène du virus de l'angine
c. Fermer la boite.
3. Observation des résultats (après 20/30 min environ) : observer les résultats fournis sur fond noir et en éclairage
rasant.
Exploitation des résultats
En exploitant les résultats obtenus, déterminer si le Père Noël est ou non atteint par le virus de la grippe.
Remarque :
Ce test est utilisé pour :
1. détecter la présence d’anticorps spécifiques dans un sérum – cela est réalisé pour vérifier la séropositivité d'un individu,
2. mettre en évidence un antigène donné dans un liquide biologique – cela est réalisé pour identifier l'antigène
responsable de la synthèse d'un anticorps, par exemple identifier une substance allergisante.

Partie 2 : Quelques aspects de la réaction immunitaire Terminale S
Activité 2 : Origine moléculaire de la spécificité des anticorps.
•Doc 1 : Structure moléculaire simplifiée d'un anticorps
•Doc 2 : Variabilité des acides aminés des chaînes d'anticorps
(d'après http://www.discip.crdp.ac-caen.fr)
L'étude des séquences d'acides aminées situés après l'acide-aminé 110 montre une variabilité extrêmement faible (< 5).
(Variabilité = nombre d'acides aminés différents à une position donnée/fréquence de l'acide aminé le plus commun à une
position donnée)
a. à partir des données ci-dessus, proposer une explication à la spécificité des anticorps.
b. en déduire la position des régions variables et des régions constantes des chaînes ; préciser la position des sites de
fixation des antigènes.
Un anticorps est une molécule protéique constituée
de 4 chaînes d'acides aminésD: 2 chaînes légères
identiques (L) et 2 chaînes lourdes identiques (H).
Ces chaînes sont reliées entre elles par des liaisons
chimiques.
Les chaînes légères sont constituées d'environ 220
acides aminés et les chaînes lourdes d'environ 450
acides aminés.
Les acides aminés (aa) sont numérotés à partir de
l'extrémité supérieure d'une chaîneD; des repères
sont indiqués sur le schéma ci-contre.
Chaîne légère L
Chaîne lourde H
aa n°1
aa n°1
aa n°110
aa n°110
aa n°220
aa n°450