cas image Virologie 2012, 16 (2) : 119-21 Le virus de la vaccine, un virus qui se propage plus vite qu’il ne se réplique Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 25/05/2017. Virginie Doceul1 , 2 Michael Hollinshead1 Geoffrey L. Smith1 , 3 1 doi:10.1684/vir.2012.0442 St Mary’s campus, Imperial College London, Faculty of Medicine, Section of Virology, Division of Infectious Diseases, Norfolk Place, London W2 1PG, Royaume-Uni 2 UMR 1161, virologie Anses-Inra-Enva, agence nationale de sécurité sanitaire de l’alimentation, de l’environnement et du travail (Anses), 23, avenue du Général-de-Gaulle, 94700 Maisons-Alfort, France <[email protected]> 3 University of Cambridge, Department of Pathology, Tennis Court Road, Cambridge, CB21QP, Royaume-Uni Tirés à part : V. Doceul Virologie, Vol 16, n◦ 2, mars-avril 2012 L e virus de la vaccine (VACV) a été employé avec succès dans la vaccination contre la variole, permettant l’éradication de ce fléau à la fin des années 1970 [1]. Il reste aujourd’hui largement utilisé en biotechnologie, principalement comme vecteur vivant pour des antigènes vaccinaux. C’est un virus à ADN double brin appartenant à la famille des Poxviridae, qui se réplique dans le cytoplasme. VACV est un virus enveloppé complexe, qui produit différentes formes de particules infectieuses au cours de son cycle viral. L’utilisation des techniques de microscopie a été très utile à une meilleure compréhension des mécanismes élaborés par VACV pour entrer dans la cellule hôte, se répliquer, produire de nouveaux virions et faciliter la propagation du virus vers les cellules voisines. Récemment, la propagation de plages de lyse formées par la souche Western Reserve (WR) de VACV a pu être suivie pendant 16 heures par microscopie en temps réel (film 1) [2]. Pour cela, une couche uniforme de cellules de rein de singe vert d’Afrique (BSC-1) a été infectée à faible multiplicité d’infection pour obtenir des foyers d’infection bien isolés les uns des autres et cultivé en milieu semi-solide pour limiter la diffusion du virus. Le diamètre de la plage de lyse a ensuite été mesuré toutes les heures pendant 12 heures (figure 1A-C). En utilisant ces données, nous avons pu observer une augmentation linéaire de la taille de la plage de lyse en fonction du temps. Connaissant la distance moyenne entre le noyau des cellules utilisées, il a alors été possible de déduire que VACV infecte une cellule toutes les 1,2 heures. Cependant, les nouvelles particules virales produites dans le cytoplasme de la cellule infectée ne sont relarguées dans le milieu extracellulaire que quatre à six heures après le début de l’infection [3]. VACV est donc capable de se propager d’une cellule à une autre plus vite que ne peut l’expliquer sa cinétique de réplication. L’utilisation d’un virus recombinant de VACV, vEGFPA5L, exprimant la protéine du core A5 fusionnée à la protéine fluorescente verte (GFP), a permis de mettre en évidence, par microscopie confocale, la présence de virions à l’extrémité de comètes d’actine à la surface de cellules ne produisant pas de nouvelles particules virales et situées à plusieurs cellules de distance de la périphérie de la plage de lyse (figure 1D) [2]. Nous avons ensuite montré que l’expression précoce des protéines virales A33 et A36 est indispensable pour la propagation optimale du virus [2]. Ces deux protéines virales interagissent ensemble et sont exprimées au niveau de la membrane plasmique des cellules infectées [4-7]. Des cellules exprimant A33 et A36 à leur surface sont capables de former des comètes d’actine au contact d’un virion provenant de l’extérieur [2]. Ces comètes sont des protubérances fines et transitoires de la membrane cellulaire, qui sont induites par la projection de fibres d’actine à partir du cytoplasme sur la face interne de la membrane. Au vu de ces différentes données, nous avons proposé un modèle de propagation accélérée de VACV. Une fois infectées par le virus, les cellules expriment précocement A33 et A36. Lorsqu’un virion super-infectant entre en 119 Pour citer cet article : Doceul V, Hollinshead M, Smith GL. Le virus de la vaccine, un virus qui se propage plus vite qu’il ne se réplique. Virologie 2012; 16(2) : 119-21 doi:10.1684/vir.2012.0442 cas image A 0 200 400 600 200 400 600 800 1000 1200 1000 1200 B 133 .57 µm 0 800 564 Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 25/05/2017. C .43 µm 500 µm D 20 µm Figure 1. A) Image d’une plage de lyse formée par le virus de la vaccine Western Reserve (VACV WR) trois jours après l’infection de cellules BSC-1 à faible multiplicité d’infection. B-C) Image de l’enregistrement de la formation d’une plage de lyse par microscopie à temps réel avec un microscope Axiovert 200 M (Zeiss), un objectif 10x et un appareil photographique AxioCam (Zeiss) ; un foyer infectieux naissant considéré comme t = 0 (B) et 12 heures plus tard (C). Le logiciel AxioVision Rel. 4.6 (Zeiss) a été utilisé pour déterminer le rayon de la plage de lyse chaque heure pendant 12 heures. D) Image montrant la périphérie d’une plage de lyse formée par vEGFPA5L WR (vert) marquée par la phalloïdine (rouge) et Dapi (bleu). Des comètes d’actine porteuses de particules virales permettent de transporter ces particules (flèches blanches) à plusieurs cellules de distance des cellules contenant des usines à virus produisant de nouveaux virions (flèches jaunes). 120 Virologie, Vol 16, n◦ 2, mars-avril 2012 Copyright © 2017 John Libbey Eurotext. Téléchargé par un robot venant de 88.99.165.207 le 25/05/2017. cas image contact avec A33 et A36 exprimées à la surface de ces cellules ne produisant pas encore de nouveaux virions, une comète d’actine est générée, qui va propulser la particule virale vers des cellules voisines non infectées. VACV est alors capable d’infecter des cellules adjacentes à une cellule infectée avant qu’elle n’ait eu le temps de relarguer de nouveaux virions. La propagation du virus est ainsi accélérée, ce qui explique que VACV soit capable de se propager environ quatre fois plus rapidement que ne lui permet sa cinétique de réplication. L’utilisation de techniques de microscopie et la simple observation de plages de lyse formées par un virus a donc permis de mettre en évidence un mécanisme, qui permet une propagation accélérée des virions entres cellules, révélant ainsi une nouvelle stratégie mise en œuvre par les virus pour envahir leur hôte. Conflits d’intérêts : aucun. Virologie, Vol 16, n◦ 2, mars-avril 2012 Références 1. Fenner F, Anderson DA, Arita I, et al. Smallpox and its eradication. Geneva : World Health Organization, 1988. 2. Doceul V, Hollinshead M, van der Linden L, et al. Repulsion of superinfecting virions: a mechanism for rapid virus spread. Science 2010 ; 327 : 873-6. 3. Payne LG, Kristenson K. Mechanism of vaccinia virus release and its specific inhibition by N1-isonicotinoyl-N2-3-methyl-4chlorobenzoylhydrazine. J Virol 1979 ; 32 : 614-22. 4. Rottger S, Frischknecht F, Reckmann I, et al. Interactions between vaccinia virus IEV membrane proteins and their roles in IEV assembly and actin tail formation. J Virol 1999 ; 73 : 2863-75. 5. Roper RL, Payne LG, Moss B. Extracellular vaccinia virus envelope glycoprotein encoded by the A33R gene. J Virol 1996 ; 70 : 3753-62. 6. van Eijl H, Hollinshead M, Smith GL. The vaccinia virus A36R protein is a type Ib membrane protein present on intracellular but not extracellular enveloped virus particles. Virology 2000 ; 271 : 26-36. 7. Lorenzo MM, Galindo I, Griffiths G, et al. Intracellular localization of vaccinia virus extracellular enveloped virus envelope proteins individually expressed using a Semliki Forest virus replicon. J Virol 2000 ; 74 : 1053550. 121