Présentation
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Institut des cellules Souches pour le Traitement et l'Etude des maladies Monogéniques Comment réparer le cerveaux et ses annexes avec les cellules souches pluripotentes humaines L’équipe De l’équipe s’occupant des Rétinopathies Christelle MONVILLE Jérôme POLENTES Brigitte ONTENIENTE Sébastien DUPRAT Marion BRENOT De l’équipe s’occupant des Lésion Neurovasculaire Sommaire 1_ Culture hESC, hiPS Pourquoi utiliser des cellules souches ? Cellules hES et IPS Mefs 1 2_ Différenciation Cellules RPE ( Retinal pigmented epithelium) Cellules souches neurales ( NSC ) → Immunohistochimie 2 3_ Les applications Les greffes La thérapie cellulaire 3 I. Culture des cellules pluripotentes Auto-renouvellement illimité Pluripotence i.e potentiel de différenciation maximum I. Culture des cellules pluripotentes Fécondation in vitro 5 Diagnostic Génétique (D.P.I*) Biopsie, fibroblastes Embryon surnuméraire Reprogrammation Blastocyste Cellules souches pluripotentes induites (iPS) Cellules souches embryonnaires humaines (hES) I. Culture des cellules pluripotentes Les mef (mouse embryonic fibroblast) Cellules nourricières provenant de la souris Culture de mefs II. Différenciation Cellules embryonnaires humaines Production in vitro de RPE humains Injection In vitro X40 II. Différenciation RPE confluentes RPE décollées Trypsine 5min, 37°C comptage Remise en culture des RPE (500000c/cm2) Immunocytochimie 10j de culture Bleu= noyaux Vert= membrane cellulaire II. Différenciation TUj1 GFAPDAPI Tuj1: Neurones et GFAP: astrocytes Ki67 Nest ine DAPI Cellule souche neurale Principe de l'immunofluorescence L'immunofluorescence sert a vérifier le type de cellule présente dans une culture ou une greffe.Il faut préparer des anticorps primaires qui vont venir se fixer sur les cellules spécifiques aux anticorps dans la culture ou sur la coupe de cerveau ayant subi une greffe.L'anticorps secondaire,contrairement au primaire, est fluorescent.Il va se fixer au anticorps primaires. Il faut ensuite rincer la coupe de cerveau ou la culture dans du PBS ( phosphate Buffer Salt ) pour enlever le surplus d'anticorps.Il ne reste plus qu'à observer au microscope. Anticorps Primaires Cellule Anticorps secondaires III. Applications Les Greffes Coupes de cerveau de rat ayant subi une greffe Colorées au Cresyl Violet Début de la greffe Greffe Fin de la greffe Avant du cerveau Arrière du cerveau Remerciements Mme Cassini Mme Bonafin Mme Rivière Mr Deroin Mme Henez
