Virus défectif
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Constitution d’un virus Structures génétique des virus Type de génome: ADN; ADNsb; ARN+, ARN- Structure : Trans Expression Encapsidation: PSI: Réplication Cis Génes structuraux Transgène Virus défectif Virus réplicatif Virus défectif Pas de production de nouvelles particules Les vecteurs dérivés des rétrovirus Famille des rétrovirus Oncoretrovirinae (rétrovirus simple) 5 genres Moloney Murine Leukemia virus Rous Sarcoma virus Lentiviridae (rétrovirus complexe) Virus de l’Immunodéficience Humaine (V.I.H) Spumaviridae Virus Foamy Les oncorétrovirus rétrovirus simple Structure du génome viral Intégration Transcription Protéines virales Intégration Transcription inverse Recrutement dans la particule virale Initiation de la transcription inverse Le cycle de réplication Transcription inverse Le cycle de réplication Intégrase N-terminal C-terminal Domaine catalytique L’intégration (2) Le cycle de réplication Etapes communes aux rétrovirus Entrée Transcription inverse/ intégration Mobilisation d’une information génétique dans une particule Définitions Transgène Séquences virales Les séquences cis sont les séquences associées au transgène Les séquences trans sont les séquences utiles pour la production du vecteur, mais clonées dans un autre système d’expression Elaboration d’un vecteur Séquences cis : « initiation de la transcription » encapsidation dans la particule virale transcription inverse intégration Séquences indispensables Production de particules recombinantes Transfert de l’information génétique Les vecteurs Séquences cis Dans la cellule productrice Transcription 5’m7G AAAA ARN mobilisable dans une particule rétrovirale Dans les cellules cibles 5’m7G AAAAA Transcription inverse Intégration Provirus intégré dans la cellule cible Les systèmes de transcomplémentation Les séquences trans: protéines structurales enzymes (RT, IN, PR) Structurer la particule virale Cycle de réplication Production transitoire Transfection Virus recombinants capables de transduire des cellules cibles Pseudotypage Tropisme: spécificité de reconnaissance de la cellule cible déterminant: la glycoprotéine d’enveloppe Pseudotypage: utilisation d’une glycoprotéine d’enveloppe différente de celle du virus parental modification du tropisme du vecteur enveloppes plus résistantes aux techniques de purification Exemple: rétrovirus pseudotypés par la glycoprotéine d’enveloppe du virus de la stomatite vésiculeuse (VSV-G) Rétrovirus et cycle cellulaire Interphase Rétrovirus Dépendance au cycle cellulaire HIV Prophase FIV peu SIV Métaphase ASV Télophase MoMLV trés Les vecteurs lentiviraux Famille : Retroviridæ Genre : Lentivirus Sous-espèces: -HIV 1 -HIV 2 -SIV -FIV -BIV -VISNA -CAEV -EIAV Spécificité du cycle des lentivirus MoMLV V.I.H ppT central Sites d’intégration des lentivirus Transactivation Les vecteurs SIN P P ARN mobilisé P Vecteur intégré dans les cellules transduites Les rétrovirus Spumavirus Mammalian C-type Lentivirus Premiers vecteurs D-type B-type Avian C-type BLV/ HTLV Un exemple d’application des vecteurs rétroviraux Traitement du déficit immunitaire combiné sévère lié à l’X (X-SCID): déficit: chaîne du récepteur aux interleukines 2, 4, 7, 9 et 15 déficit immuntaire majeur traitement: greffe de moelle allogénique Vecteur rétroviral: Chaîne C ILR
