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FUSION
DES
CELLULES
SELECTION
DES
HYBRIDOMES
ISOLEMENT
DES
HYBRIDOMES
TEST
DES
HYBRIDOMES
PRODUCTION
DES
HYBRIDOMES
DÉROULEMENT DE LA PRODUCTION DES HYBRIDOMES
OBTENTION
DES
CELLULES

+
FUSION
UTILISATION DE
CELLULES MYELOMATEUSES HGPRT-
OBTENTION DES LYMPHOCYTES
SPECIFIQUES
OBTENTION DES CELLULES IMMORTELLES
O
B
T
E
N
T
I
O
N
D
E
S
C
E
L
L
U
L
E
S
IMMUNISATION DE LA SOURIS
AVEC L’ANTIGÈNE ÉTUDIÉ

Par méthode chimique
Par méthode physique
SELECTION
+
FUSION DES MEMBRANES
CELLULAIRES AVEC DU PEG (poly éthylène glycol)
FUSION DES MEMBRANES CELLULAIRES
PAR ELECTROPORATION
F
U
S
I
O
N
D
E
S
C
E
L
L
U
L
E
S

Culture sur milieu HAT
Hypoxanthine Aminoptérine Thymidine
Cellule myélomateuse HGPRT-Lymphocyte B
MORT CELLULAIRE
Impossibilité de se diviser MORT CELLULAIRE disparition aprés
quelques divisions
HYBRIDOME
SELECTIONNE
+
ISOLEMENT
S
E
L
E
C
T
I
O
N
D
E
S
H
Y
B
R
I
D
O
M
E
S

Sur milieu gélosé Par dilution limite
Une colonie = une cellule initiale Une ou zéro cellules par puit
+
TEST
Dès que la croissance est suffisante, il faut propager les
cultures d'hybridomes productrices de l'anticorps désiré
(transferts des puits de 0,3 à 2 ml, puis à des bouteilles de
25 ml), les conserver et les cloner. Deux méthodes sont
utilisées pour obtenir un clone à partir d'une cellule :
I
S
O
L
E
M
E
N
T
D
E
S
H
Y
B
R
I
D
O
M
E
S