Techniques d`ionisation et analyseurs

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CHM 2971 H06
• Quelle serait la masse approx. en se basant sur le rapport isotopique?
• La masse indiquée est-elle nominale, moyenne ou exacte?
• Si la form. emp. est C64H103N23O30, combien d’atome 12C contient
l’ion a 1674.72?
Substance P(âques)
Séquence:
THREE EASTER EGGS
1673.72
1670 1672 1674 16801676 1678
1674.72
• Quelle est la resolution si la largeur de a 50% est de 0.17 m/z?
Questions – Mesure de masse
0.17 m/z
Règle de l’azote: Masse moléculaire paire pour un # pair d’atome d’azote

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CHM 2971 H06
Technique
d’ionisation Principe Analytes Limite de detection Commentaires
Impact electronique
(EI) Impact d’électron de 70eV avec
molécules
neutres gazeuse
Molecules volatiles <
1000 Da et
thermiquement
stables
Bas pg Gain significatif
d’energie interne
(> 10eV) i.e. ion
fragments
Ionisation chimique
(CI) Addition (+) ou abstraction (-)
electrophile avec
gas ionisant
Molecules volatiles <
1000 Da, depend de
l’affinite protonique
(PA)
~10-50 pg Gas ionisants (CH4,
AP:552 kJ/mol) NH3,
AP: 854 kJ/mol) – Eint.
Ionisation/
désorption par
champ élect. (FI/FD)
Cationisation
(+H, Na) avec sel Polymères jusqu’a 3.5 kDa ~50-100 pg Champ de 2V/Ǻ, analyte depose sur
emetteur de graphite
Bomb. d’atomes
rapides (FAB) ou
d’ions rapides
(LSIMS)
Echange de
proton (ou adduit
d’alkalin) avec
matrice
Biopolymeres
jusque’a 20 kDa ~ng (pmols) FAB: Xe: ~8 keV, LSIMS: Cs+: ~30 keV,
Matrice: glycérol,
thioglycérol, DTT/ET
Nébulisation
électrostatique (ESI) Nebulisation d’especes ionique
en solution sous
un champ elect.
Biopolymeres
jusque’a 1MDa ~1 fmole Peu de fragmentation. Ions multiplement
chargés
Désorption laser
avec matrice
(MALDI)
Desorption/ionisa
tion avec matrice
absorbant UV
Biopolymeres
jusque’a 300kDa ~1 fmole Peu de fragmentation, ions simplement
chargés
Spectrométrie de masse

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CHM 2971 H06
Spectrométrie de masse
Techniques d’ionisation - Désorption laser avec matrice
Impulsion laser de 4 ns (λ337 nm , N2, 106-107W/cm-2)
±30 kV
To MS
Échantillon + matrice m/z 15000
10000
[M+H]+
Caractéristiques:
Analytes: Biomolecules jusqu’à - 500 kDa
Sensibilité: 1-10 pg (-1-10 fmoles)
Précision: Avec TOF ±0.02% (ext.), ±0.005% (int.)
Résolution: Avec TOF 15,000 (<10kDa), <1000 @ >20 kDa
Purete de l’ech.: Moindre susceptibilité à la présence de sels (mM)
Matrice: Absorbe en UV, dépend de l’analyte, peut causer un
bruit de fond < 800 Da
Zone d’irradiation
de 0.05-0.2 mm

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CHM 2971 H06
Impulsion laser de 4 ns
106W/cm2(λ337 nm , N2)
Echantillon + matrice (1:5000)
Co-crystallisation
International Journal of Mass Spectrometry 200 (2000) 71–77
Mass Spectrometry Reviews, 17 (1998), 337–366
Spectrométrie de masse
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CHM 2971 H06
UV/visible regions λ
Excimer gaz rares: ArF 193 nm
KrF 248 nm
XeCl 307 nm
XeF 351 nm
Azote 337 nm
Infrarouge
Er:YAG fondamentale 2.94 µm
CO29.6 nm, 10.6 µm
Plus communs
Laser Science Inc. VSL-337ND nitrogen laser. Specifications : 250µJ/impulsion, 3 ns
temps d’impulsion. Duree de vie ~ 2-4 ans.
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