Diagnostic Update Juillet 2009

Le laboratoire de diagnostic moléculaire d’IDEXX vous propo-
se des tests de PCR (Polymerase Chain Reaction) en temps
réel pour un accès facile et abordable de la technologie PCR
en routine. Vos résultats sont disponibles en 2 à 4 jours.
Avec les tests IDEXX RealPCR™, vous pouvez compter sur :
 La dernière innovation de la technologie PCR. La
PCR en temps réel est réalisée dans un système clos
avec des temps d’analyse courts, ce qui permet ainsi
de limiter le nombre de faux positifs.
 Des réponses rapides. Vos résultats sont disponibles
en 2 à 4 jours afin d’avancer rapidement dans votre
diagnostic différentiel.
 Des prix abordables et un tarif dégressif en fonction du
nombre de tests PCR et de leur association en bilans.
Diagnostic
Update
Juillet 09
Qu’est-ce que la PCR ?
La PCR est une technique de laboratoire au cours de la-
quelle des molécules d’ADN ou d’ARN sont extraites du
spécimen d’un patient, incorporées dans un milieu réac-
tionnel et soumises à plusieurs cycles de chauffage et de
refroidissement. Si le spécimen contient de l’ARN, l’ARN est
dans un premier temps converti en ADN complémentaire
avant la PCR. A chaque cycle, la quantité d’ADN cible de
séquence connue – s’il est bien présent dans le spécimen
de départ – est doublée; au nal, on obtient de l’ADN am-
plifié avec un facteur de multiplication de l’ordre du milliard.
Un test PCR diagnostique indique la présence de virus, de
rickettsie, de bactérie, de parasite ou de champignon en
détectant l’ADN amplié de l’organisme concerné dans le
spécimen du patient.
Au cœur du diagnostic…
Les tests IDEXX RealPCR™
Des réponses définitives avec la PCR en temps réel
{
Cycles d’amplication
Leucocytes
Extraction
Ici Spécimen = sang EDTA
Amplification
ADN
PCR
Polymerase Chain Reaction
ABC
Séparation de l’ADN double hélice
en 2 monobrins complémentaires
(dénaturation)
Séquence cible
spécique
Les amorces se lient
à une séquence
cible spécique
(hybridation)
Séquences
cibles doublées

Quels sont les avantages de la PCR en temps réel ?
Au cours d’une PCR en temps réel, le produit réactionnel
contient des sondes uorescentes marquées qui vont se lier
avec l’ADN amplié, ce qui entraine une libération de ores-
cence au fur et à mesure que l’ADN amplié s’accumule.
Puisque l’ADN amplié ne quitte jamais le milieu réaction-
nel, les résultats sont disponibles rapidement et les risques
de contamination sont diminués.
La PCR en temps réel est considérée comme un outil dia-
gnostique de biologie moléculaire très sensible et très pré-
cis. IDEXX vous propose des tests PCR, individuels ou as-
sociés dans des bilans, sur un seul et même spécimen. Les
résultats des tests IDEXX RealPCR™, sont disponibles en 2
à 4 jours.
La réalisation de toutes les réactions en système clos (un
seul tube réactionnel) combinée à des contrôles rigoureux,
un équipement ultramoderne et une évaluation constante
de la qualité vous garantit des résultats ables en toute
confiance.
Quand dois-je utiliser la technique PCR comme outil
diagnostique ?
La technique PCR est un excellent outil diagnostique pour
confirmer une infection en détectant la présence d’agents
pathogènes chez des animaux malades.
Comme pour tout examen complémentaire, la PCR doit
néanmoins être associée à d’autres outils diagnostiques et
les résultats doivent toujours être interprétés à la lumière des
signes cliniques et des autres résultats de laboratoire.
Les tests PCR permettent-ils de différencier les germes vac-
cinaux et infectieux ?
Pour la plupart des vaccins inactivés, la PCR en temps
réel fait la différence entre une vaccination et une
infection.
Elle ne détecte pas la présence d’anticorps, mais directe-
ment celle de l’agent pathogène. La détection d’ADN/ARN
viral est possible durant quelques semaines après la vac-
cination avec un vaccin vivant modié pendant que le virus
vaccinal se réplique. Nous recommandons un intervalle de 3
semaines après la dernière vaccination pour éviter la détec-
tion d’ADN vaccinal. En outre dans le cas de la parvovirose
canine, nos protocoles différencient directement et spécifi-
quement les ADN des souches vaccinale et infectieuses.
Que signient un résultat positif et négatif ?
Un résultat positif conrme la présence de l’agent pathogè-
ne dans le spécimen analysé. Un résultat négatif peut avoir
plusieurs significations :
• l’agent pathogène est absent
• l’agent pathogène est présent en quantité inférieure
à la limite de détection du test
• l’agent pathogène ne peut être détecté par le
protocole PCR utilisé
• la qualité du spécimen est mauvaise.
PCR conventionelle: visualisation des produits PCR après migration élec-
trophorétique sur gel d'agarose
PCR en temps réel: mesure de la uorescence pour la détection des
produits PCR positifs
 Dénaturation
La sonde spécique de la séquence
cible contient un uorophore émetteur
et un uorophore supresseur; la sonde
n'est pas encore liée à l'ADN. Le supres-
seur (gris) à côté de l'émetteur (rouge)
empêche l'apparition d'une uorescence
mesurable.
 Hybridation
L'amorce et la sonde se lient à l'ADN; le
supresseur (gris) à côté de l'émetteur
(rouge) empêche toujours l'apparition
d'une uorescence mesurable.
+ Elongation
L'activité 5'-3' exonucléase de la Taq po-
lymérase entraîne l'hydrolyse de la son-
de; les 2 uorophores sont séparés l'un
de l'autre; la uorescence de l'émetteur
peut maintenant être mesurée.
å
ç
é
è
PCR en temps réel: les différentes étapes

Quelle est la limite de détection des tests PCR?
La limite de détection d’une méthode varie en fonction du
protocole utilisé. La définition la plus communément ac-
ceptée est une concentration d’acide nucléique cible ou un
nombre de molécules qui peut encore être amplié dans
95% des expériences.
Que signient la sensibilité et la spécicité diagnostiques?
La sensibilité diagnostique est la probabilité d’obtenir un ré-
sultat positif au sein d’une population infectée. En d’autres
termes, plus la sensibilité est élevée, plus la probabilité
d’identifier correctement tous les spécimens positifs et de
ne pas manquer le diagnostic est élevée. La spécicité dia-
gnostique est la probabilité d’un vrai résultat négatif quand
le tests PCR sont réalisés dans une population non infectée.
Une spécicité élevée indique que le test ne détecte vrai-
ment que ce que l’on recherche. Ainsi une forte spécicité
augmente la probabilité qu’un résultat positif soit bien dû à
l’agent pathogène recherché.
Si le test revient négatif, mais que l’infection est toujours
suspectée, quand dois-je tester à nouveau ?
Cela dépend de la présence ou de l’absence de signes cli-
niques, de la nature de l’agent pathogène suspecté et du
test utilisé. Il est généralement recommandé d’attendre une
période entre 2 et 4 semaines.
Dois-je lancer d'autres tests de laboratoire en dehors du test
PCR ?
Généralement, oui. Car la PCR est un examen complémen-
taire qui s’inscrit dans la démarche diagnostique comme
tout autre examen complémentaire ; il doit donc être lancé
en parallèle avec d’autres tests diagnostiques : en fonction
de l’infection recherchée, il peut s’agir d’une NFS, d’une sé-
rologie, d’un examen urinaire, etc.
Comment et combien de temps les spécimens doivent-ils
être conservés ?
Les liquides biologiques (péritonéaux, pleuraux, sang EDTA,
fèces) et les écouvillons peuvent être conservés 3 jours au
réfrigérateur (4°C).
Si aucun examen histologique n’est prévu, les tissus frais
peuvent être conservés au congélateur à – 20 °C jusqu'à
une semaine et envoyés congelés. Les tissus inclus dans la
paraffine sont acceptés.
Comment doit-on envoyer les prélèvements ?
Il est préférable d’utiliser le service coursier en respectant
les conditions d’envoi. Envoyer les prélèvements dans un
deuxième emballage à l’intérieur du colis en cas de dom-
mage durant le transport. Du matériel absorbant doit être
inclus dans l’emballage secondaire en cas de fuites ou de
bris dans l’emballage primaire.
Quel prélèvement dois-je envoyer ?
La nature du prélèvement varie en fonction de l’agent pa-
thogène et des symptômes observés. En cas de doute, il
est préférable de contacter le conseil médical du Labora-
toire IDEXX Alfort au 0 810 433 99 (01 43 53 83 00).
Qui dois-je contacter pour toutes mes questions ?
Contacter le conseil médical du Laboratoire IDEXX Alfort au
0 810 433 99 (01 43 53 83 00).
Est-il possible d’effectuer d’autres tests PCR sur le prélève-
ment déjà envoyé ?
Les spécimens originaux sont conservés une dizaine de
jours, mais l’ADN extrait est conservé plus longtemps.
D’autres tests additionnels peuvent ainsi être requis sur de-
mande à partir de l’ADN conservé.
La transition entre les tests PCR conventionnels et en
temps réel, ainsi que la création de nouveaux bilans va
optimiser votre démarche diagnostique avec :
1/ Un niveau élevé
d’information
La recherche simultanée de
plusieurs agents pathogènes
augmente la probabilité de
détecter les infections.
2/ Des résultats plus rapides
Grâce à des délais techniques
plus courts.
3/ Des économies réalisées
La technologie PCR en temps
réel nous permet de vous
proposer des bilans
plus économiques.

FR-090-0609
Diagnostic
Update
Laboratoire IDEXX Alfort
Parc d‘activité du Val de Seine
17 Allée Jean-Baptiste Preux
94 140 Alfortville
Tél : [phone] (01 43 53 83 00)
Fax: [phone]
[e-mail] · www.idexx.fr
Franck Guetta, DVM
Directeur de la publication
Laboratoire IDEXX Alfort
Bilans PCR
Bilan Diarrhées Chiots
• Parvovirus canin PCR
• Paramyxovirus canin PCR (Maladie de Carré)
• Coronavirus canin PCR
• Bilan Diarrhée C (Giardia ELISA + bactériologie)
Bilan Coryza Chats
• Chlamydophila felis PCR
• Herpesvirus félin 1 PCR
• Calicivirus félin PCR
• Mycoplasma felis PCR
Bilan " Maladies à tiques "
• Babesia canis PCR
• Ehrlichia/Anaplasma PCR
• Ehrlichia canis sérologie (IF)
• Borrelia (C6 qualitatif)