POTENTIEL METASTATIQUE DES CELLULES CIRCULANTES

UNIVERSITE PARIS XII - VAL-DE-MARNE
THESE
Pour l’obtention du titre de
DOCTEUR DE L’UNIVERSITE PARIS XII - VAL-DE-MARNE
Discipline : Biochimie - Biologie cellulaire et moléculaire
Présentée et soutenue publiquement
par Richard Douard
Le 1er décembre 2006
Titre
POTENTIEL METASTATIQUE DES CELLULES
CIRCULANTES DANS LE CANCER
COLORECTAL
JURY
Monsieur le Professeur Gérard Benoît Rapporteur
Monsieur le Professeur Paul-Henri Cugnenc Examinateur
Monsieur le Professeur Jean-Luc Gala Rapporteur
Monsieur le Professeur François Gayral Examinateur
Monsieur le Professeur Sylvain Loric Examinateur
Monsieur le Professeur Jacques Roland Examinateur

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Ce travail a été réalisé dans le Service de Biochimie-Génétique et dans l’unité U468 de
l’INSERM du Pr. Michel Goossens, Hôpital Henri-Mondor, Créteil.

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Je tiens tout d’abord à remercier le Professeur Sylvain LORIC qui m’a fait découvrir cette
thématique de recherche et m’a permis d’y participer depuis 1998. Ses qualités d’inventivité,
la pertinence de ses analyses et sa ténacité nous ont permis de rester au cœur du débat
scientifique malgré les difficultés liées aux migrations successives de son équipe de
recherche de Necker à Saint-Antoine puis Henri Mondor. Qu’il trouve ici l’expression de
ma reconnaissance, de ma profonde admiration et de ma fidèle amitié.
Je remercie chaleureusement le Docteur Stéphane MOUTEREAU qui m’a soutenu et aidé
tout au long de la réalisation de ce travail. Son efficacité à comprendre et canaliser l’énergie
créatrice de notre Maître commun (Glue thérapie) a été tout à fait déterminante.
Je remercie le Professeur Paul-Henri CUGNENC, mon Maître, qui a guidé ma carrière
chirurgicale depuis le premier jour. Qu’il soit assuré de mon dévouement et de ma fidélité.
Je remercie le Professeur Philippe WIND de m’avoir permis de découvrir cette thématique
et pour son aide depuis tant d’années. Qu’il trouve ici l’expression de toute mon amitié.
Je remercie le Professeur Gérard BENOIT d’avoir accepté d’être rapporteur de ce travail.
Après m’avoir accueilli dans son laboratoire lors de la réalisation de mon DEA, il a
toujours suivi la progression de nos travaux. Qu’il trouve ici l’expression de mes
remerciements.
Je remercie le Professer Jean-Luc GALA d’avoir accepté d’être rapporteur de ce travail et
pour sa contribution scientifique dans la critique des articles de cette thèse.
Je remercie le Doyen Jacques ROLAND et le Professeur François GAYRAL de me faire
l’honneur de participer à ce jury.
Je tiens à remercier Monsieur Pierre RATIER, mon compagnon fidèle sur les chemins de
l’écriture. Qu’il trouve ici l’expression de mes remerciements les plus amicaux pour son
indéfectible soutien depuis la rédaction de mon premier article il y a plus de dix ans jusqu’à
aujourd’hui.

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A ceux de l’UCBM
A Bobby et Raoul
A Jérôme
A mes parents
A Caroline

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TABLE DES MATIERES
I. Abréviations-lexique 8
II. Résumé 9
III. Introduction 10
1. Le cancer colorectal : Incidence, facteurs pronostics, évolutions thérapeutiques 10
2. Bases scientifiques de la dissémination cellulaire métastatique 11
a. L’invasion 11
b. Circulation des cellules tumorales 12
c. Développement des métastases à distance 12
d. Etude du phénomène métastatique 13
3. But du travail 14
IV. Mise au point sur l’étude des cellules circulantes dans le cancer
colorectal 15
1. Introduction 15
2. Evolution des techniques moléculaires dans la recherche de cellules circulantes 17
a. RT-PCR qualitative avec des gènes spécifiques du tissu colorectal 17
b. RT-PCR qualitative avec des gènes spécifiques des tissus épithéliaux 18
c. RT-PCR qualitative utilisant des gènes spécifiques de cancer 19
d. Utilisation concomitante de plusieurs marqueurs : techniques multiplex 20
e. Les techniques de RT-PCR quantitatives 20
3. Quelle est la valeur pronostique de la détection de cellules circulantes ? 21
a. Dans les ganglions 21
b. Dans la moelle 22
c. Dans le sang périphérique 23
d. Dans le sang portal 24
e. Dans la cavité péritonéale 25
4. Conclusion 25
V. Valeur pronostique de la détection des cellules circulantes par RT-
PCR à l’aide d’un seul marqueur spécifique de tissus : CGM2
(CEACAM7) 27
1. Introduction : Choix d’un marqueur tissu-spécifique 27
2. Détection des cellules malignes circulantes par RT-PCR CGM2 (CEACAM7) 30