Le rôle du bouchon IpaD dans le contrôle de la virulence de

Le rôle du bouchon IpaD dans le contrôle de la virulence de
Shigella flexneri
Alaeddine Meghraoui*, Lionel Schiavolin*§, and Abdelmounaaïm Allaoui
Laboratoire de Bactériologie Moléculaire, Faculté de Médecine, Université Libre de Bruxelles, 808 Route de Lennik, CP614bis, B-1070 Bruxelles, Belgique
* Financement FRIA, § CEE (FP7)
LES DOCTORIALES FRANCO-BELGES Juin 2012
III/ But et stratégie
I/ Introduction - Pathogenèse de Shigella
Shigella = agent causal de la « shigellose » : maladie diarrhéique responsable
d’environ 1M de morts/an. Problématique: absence de vaccin efficace.
Caractérisation du rôle d’IpaD dans:
Le contrôle de
sécrétion
L’ insertion du
pore
L’entrée dans
la cellule hôte
Les interactions au
bout de l’aiguille
IpaD-IpaD
IpaD-MxiH
La bactérie envahit la muqueuse intestinale et échappe au système
immunitaire en infectant les cellules épithéliales par le pôle basolatéral.
II/ Le Système de Sécrétion de Type 3 (SST3) et IpaD
A.
Mutagenèse dirigée des
acides aminés conservés
SST3 = Seringue moléculaire >> formation d’un pore >> injection des
effecteurs directement dans le cytoplasme de la cellule hôte
>> internalisation de la bactérie.
A. Structure cristallographique d’IpaD
montrant les résidus mutés (Johnson et
al., 2007; PDB protein workshop)
Essentiel pour le
contrôle de sécrétion
IpaD = bouchon du SST3
(Sani et al., 2007)
(2)
B. Alignement des séquences d’IpaD
(Shigella), SipD (Salmonella) et de BipD
(Burkholderia)
(1)
localisé au bout
de l’aiguille
Délétion du domaine
auto-chaperon
Les anticorps αIpaD neutralisent
l’entrée dans la
cellule hôte
B.
IpaD est conservée parmi
toutes les espèces de Shigella et
représente par conséquent un
candidat vaccinale
US Patent : US2010/0196391 A1 Shigella IpaD protein and its use as a
potential vaccine against Shigella infection” (Allaoui et al., 2010).
IV/ Résultats et conclusions
GST fused proteins His tagged proteins
Balayage phénotypique
Les interactions de
l’extrémité de l’aiguille
MxiH
IpaD
2 groupes de mutants
MxiH
IpaD∆N-term
Y153A, T161D, Q165L, Y276A
Augmentation de l’hémolyse
et de l’invasion
V312D , V314D , V319D
Perte du contrôle de
sécrétion
Les deux phénotypes sont
Le contrôle de sécrétion est
corrélés à une sécrétion précoce indépendant de la mise en
du translocateur IpaB
place du pore de translocation
IpaD
IpaD
MxiH
×
IpaD
Les interactions MxiH-IpaD et IpaD-IpaD
en absence du domaine N-terminal
IpaD∆N-term
IpaD
Le domain auto-chaperon empêche
les interactions d’IpaD in vitro
IpaD∆N-term
IpaD∆N-term
V/ Perspectives
VI/ Compétences développées
IpaD est une protéine clé du SST3, sa caractérisation facilitera donc:
 La compréhension de la sécrétion et la virulence de Shigella.
 L’utilisation d’IpaD pour le design d’un vaccin sous unitaire.
 La contribution «à long terme» dans la diminution de l’impact de la shigellose.
 Capacité à changer l’orientation d’un projet et à améliorer
l’approche stratégique selon les attentes et les résultats obtenus.
 La rigueur et la prudence dans le choix d’une approche
expérimentale et dans l’interprétation des résultats.