Le rôle du bouchon IpaD dans le contrôle de la virulence de

Alaeddine Meghraoui*, Lionel Schiavolin*§, and Abdelmounaaïm Allaoui
Laboratoire de Bactériologie Moléculaire, Faculté de Médecine, Université Libre de Bruxelles, 808 Route de Lennik, CP614bis, B-1070 Bruxelles, Belgique
* Financement FRIA, § CEE (FP7)
LES DOCTORIALES FRANCO-BELGES Juin 2012
Le rôle du bouchon IpaD dans le contrôle de la virulence de
Shigella flexneri
I/ Introduction - Pathogenèse de Shigella
II/ Le Système de Sécrétion de Type 3 (SST3) et IpaD
III/ But et stratégie
Caractérisation du rôle d’IpaD dans:
IV/ Résultats et conclusions
Balayage phénotypique
Les interactions de
l’extrémité de l’aiguille
(2)
(1)
GST fused proteins His tagged proteins
MxiH
MxiH
IpaD
IpaD∆N-term
IpaD∆N-term
IpaD∆N-term IpaD∆N-term
IpaD IpaD
IpaD
A.
La bactérie envahit la muqueuse intestinale et échappe au système
immunitaire en infectant les cellules épithéliales par le pôle basolatéral.
IpaD est conservée parmi
toutes les espèces de Shigella et
représente par conséquent un
candidat vaccinale
Shigella = agent causal de la « shigellose » : maladie diarrhéique responsable
d’environ 1M de morts/an. Problématique: absence de vaccin efficace.
Capacité à changer l’orientation d’un projet et à améliorer
l’approche stratégique selon les attentes et les résultats obtenus.
La rigueur et la prudence dans le choix d’une approche
expérimentale et dans l’interprétation des résultats.
IpaD est une protéine clé du SST3, sa caractérisation facilitera donc:
La compréhension de la sécrétion et la virulence de Shigella.
L’utilisation d’IpaD pour le design d’un vaccin sous unitaire.
La contribution «à long terme» dans la diminution de l’impact de la shigellose.
SST3 = Seringue moléculaire >> formation d’un pore >> injection des
effecteurs directement dans le cytoplasme de la cellule hôte
>> internalisation de la bactérie.
Le domain auto-chaperon empêche
les interactions d’IpaD in vitro
IpaD-IpaD
IpaD-MxiH
Le contrôle de
sécrétion
L’ insertion du
pore
L’entrée dans
la cellule hôte
Les interactions au
bout de l’aiguille
A. Structure cristallographique d’IpaD
montrant les résidus mutés (Johnson et
al., 2007; PDB protein workshop)
B. Alignement des séquences d’IpaD
(Shigella), SipD (Salmonella) et de BipD
(Burkholderia)
B.
Mutagenèse dirigée des
acides aminés conservés
Délétion du domaine
auto-chaperon
2 groupes de mutants
Augmentation de l’hémolyse
et de l’invasion
Perte du contrôle de
sécrétion
Les deux phénotypes sont
corrélés à une sécrétion précoce
du translocateur IpaB
Le contrôle de sécrétion est
indépendant de la mise en
place du pore de translocation
Les interactions MxiH-IpaD et IpaD-IpaD
en absence du domaine N-terminal
MxiH IpaD
×
Les anticorps α-
IpaD neutralisent
l’entrée dans la
cellule hôte
localisé au bout
de l’aiguille
Essentiel pour le
contrôle de sécrétion
IpaD = bouchon du SST3
(Sani et al., 2007)
Y153A, T161D, Q165L, Y276A V312D , V314D , V319D
V/ Perspectives VI/ Compétences développées
US Patent : US2010/0196391 A1 Shigella IpaD protein and its use as a
potential vaccine against Shigella infection” (Allaoui et al., 2010).