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Document 3 : coloration d’un frottis par la technique de Gram (Microbiologie, Prescott-Harley-
Klein, éd. de boeck)
Un mélange de bactéries (gram+ et gram-) est déposé sur
une lame
Le cristal violet colore toutes les bactéries en violet
L'iode se combine avec le cristal violet et forme un complexe
violet stable
L'alcool décolore les bactéries gram-
La safranine colore les bactéries décolorées par l'alcool
Le frottis observé au microscope à l’objectif X100 à
l’immersion montre des bactéries colorées en violet, dites
gram+ et des bactéries colorées en rose, dites gram-.
Document 4 : coloration de Ziehl Neelsen
Étapes
Mode opératoire
1 Couvrir le frottis de fuchsine phéniquée (colorant rose), chauffer progressivement
jusqu’à émission de vapeur pendant 10 minutes, rincer à l’eau
2 Recouvrir le frottis d’acide sulfurique à 25% pendant 3 minutes, rincer à l’eau
3 Couvrir d’alcool à 90° pendant 5 minutes, rincer à l’eau
4 Recouvrir le frottis de bleu de méthylène (colorant bleu) pendant 30 secondes, rincer à
l’eau