Extraction ARN L'isolement de l'ARN total a été réalisé à l'aide de solutions préalablement traitées avec du pyrocarbonate de diéthyle (DEPC) pour inhiber les ARNases. Environ 1 à 2 g de tissus d'olive congelés ont été broyés dans un mortier pré-refroidi avec de l'azote liquide. Après homogénéisation, 5 ml de tampon d'extraction (100 mM Tris–HCl, pH 9,0 ; 100 mM NaCl ; 10 mM Na2EDTA, pH 8,0 et 2 % SDS), 50 ul de 2mercaptoéthanol et 2,5 ml de phénol ont été ajoutés. Après une légère agitation pendant 5 min, le mélange a été complété avec 2,5 ml de chloroforme, agité doucement pendant 5 min supplémentaires et centrifugé à 2500 g pendant 10 min. La phase supérieure a été extraite deux fois avec du phénol et du chloroforme de manière similaire. Les acides nucléiques ont été précipités en ajoutant 0,1 volume de 3 M NaAc, pH 5,2, et 3 volumes d'éthanol absolu pendant 30 min à 80 °C. Après centrifugation à 2500 g pendant 30 min à 4 °C, le culot a été remis en suspension dans 2,5 ml d'eau DEPC et 2,5 ml de LiCl 5 M ont été ajoutés pour précipiter l'ARN pendant la nuit à 4 °C. La préparation a été centrifugée à 2500 g pendant 30 min à 4 °C et le culot a été remis en suspension dans 1 ml d'eau DEPC. L'ARN a été précipité comme décrit ci-dessus pour les acides nucléiques et le culot a été lavé deux fois avec de l'éthanol à 70 % et remis en suspension dans 25 ml d'eau DEPC