Terminale S Fiche Méthode #15 – Réaliser un test ELISA OBJECTIF La pénétration du VIH (agent pathogène présentant divers antigènes) dans l’organisme déclenche une réaction du système immunitaire qui se traduit par la production d’anticorps anti-VIH. Le test ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) consiste à repérer la présence dans le sang d’anticorps anti-VIH et de diagnostiquer la séropositivité. PROTOCOLE 1. À l’aide d’une pipette, déposer 2 gouttes (soit 80 μl) de chaque solution dans le puits correspondant Dans la procédure suivante, les anticorps détectés seront ceux de la BSA (sérum albumine de bovine) dans le sérum de lapins préalablement mis en contact ou non avec cet antigène. M ATERIEL Une barrette de 8 puits au fond desquels sont fixés des antigènes BSA (un côté des barrettes possède une encoche qui permet de repérer le puits 1 et le puits 6) Puits Solution P1 SO P2 C1 P3 C3 P4 C5 P5 C7 P6 C6 (sT1) P7 C7 (sT2) P8 C5 2. Laisser incuber 15 minutes à température ambiante sur la paillasse 3. Vider les puits par retournement d’un geste rapide et franc au-dessus de l’évier, tamponner le dessus des puits sur du papier filtre 4. Laver 2-3 fois avec du tampon PBS-tween. Le lavage s’effectue en remplissant totalement les puits puis en vidant à nouveau par retournement sec. 5. À l’aide d’une micropipette, déposer 2 gouttes de la solution Ac2 dans les puits 1 à 7 ; déposer 2 gouttes d’eau distillée (ED) dans le puits 8. Laisser incuber 15 minutes à température ambiante sur la paillasse Vider les puits par retournement et laver 2-3 fois avec du tampon PBS-tween. Des solutions d’anticorps de différentes concentrations (en µg d’Ac.mL-1 : de C1= 17 à C7 = 1,06) Eau distillée (ED) Solution sans anticorps, constituant le témoin (SO) Sérums de lapins à tester (sT1 & sT2) Solution d’anticorps de détection (anticorps conjugués Ac2) Solution de lavage, tampon PBS-tween (PBS Phosphate Buffer Saline) 6. Solution de TMB (tétraméthylbenzidine) incolore, substrat de l’enzyme peroxydase (sTMB) 7. 8. À l’aide d’une micropipette, déposer 2 gouttes de solution TMB (substrat de la péroxydase) dans tous les puits 9. Laisser incuber 5 minutes à température ambiante sur la paillasse. 10. Observer une coloration éventuelle 11. Effectuer les lectures. INTERPRETATION On peut utiliser les figurés ci-dessous pour présenter les différentes étapes du test