Présentation PowerPoint - IJPB
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Plateforme de Cytologie et Imagerie Végétale La PCIV compte 7 permanents INRA (2 IR, 1 IE, 4 AI) et regroupe les activités et les équipements d'imagerie cellulaire nécessaires aux recherches menées par les équipes de l'IJPB : microscopie confocale, analyse d'images, histologie, immunocytochimie, hybridation in situ, cytogénétique appliquées à la recherche en biologie végétale. Le laboratoire dispose d'équipements de haute technologie permettant l'imagerie sur cellules végétales vivantes et fixées. La plateforme est organisée en 4 activités distinctes (Microscopie, Cytogénétique, Hybridation in situ et Immunolocalisation). Les prestations sont variables selon ces activités et peuvent être de différent types : Complet : réalisation complète de l’expérience par les agents de la plateforme selon les protocoles en cours. Environné : la personne vient sur la plateforme et réalise l’expérience sous la direction et avec l’aide des agents de la plateforme, les protocoles de la plateforme et tout l’environnement nécessaire. Solo (non environné) : Utilisation du matériel et des protocoles seuls. Ceci n’est possible que si une prestation environnée a déjà été réalisée dans des conditions satisfaisantes. Le Solo n’est pas applicable pour toutes les techniques. Les prix des prestations sont indiqués sur la page « tarifs » du site web de la plateforme. L'équipement disponible comprend 3 microscopes confocaux à balayage laser (dont deux microscopes spectraux), un microscope confocal à technologie spinning disk, une station de microdissection laser, 2 microscopes à épifluorescence rapides, dont un équipé en lumière structurée, 5 microscopes à épifluorescence classiques, une loupe à fluorescence, 4 microtomes, un ultramicrotome, un vibratome, et divers petits matériels et pièces optiques nécessaires aux opérations d’inclusion et de traitement des échantillons. Les images réalisées sont stockées sur un serveur dédié d’une capacité de 10 To utiles, sauvegardé de façon journalière. Au sein de la plateforme, les mises au point techniques, la maintenance, la gestion, la formation et l'encadrement des utilisateurs sont assurés par le personnel permanent. Atelier microscopie et imagerie Atelier cytogénétique L. Chelysheva, D. Vezon L. Gissot, O. Grandjean Observation de matériel fixé Observation de matériel vivant - Protéines fluorescentes : - Simple marquage Rh123 et PI GUS en réflection Méristème CFP GFP YFP RFP Arabidopsis thaliana Brassicacae . Caryotypage de nouvelles lignées. Etude cytologique de la méiose chez les polyploïdes naturels et les hybrides synthétiques de Brassica. . Etudes cytologiques de la méiose (DAPI, Immunodétection et FISH) FISH sur chromosomes - Multi marquage Etude de la méiose chez le Colza et la Navette Chromosome 1 sonde : 10 BACs Reconstruction 3D 2,5Mb 0 5, 5 8,5 - Sondes vitales : Colza 2n=38 AACC 3,5Mb 7 9,5 11 Navette 13,5 12,5 Pointe racinaire Embryon Pachytène Interactions protéine-protéine Chromosomes Immunodétection de différentes protéines au cours de la méiose Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Localisome 2n=20 AA N-YFP YFP C-YFP MRE11 DMC1 Analyse du taux de recombinaison et de l’interférence chez A. thaliana RAD51 527 nm Vacuoles Peroxysome Nucléole Memb. plasmique Anisotropie d’émission de fluorescence Noyau Golgi Cytoplasme RE + golgi Actine Endosome + PM Noyau + cytopl. Chloroplaste Tandem GFP Faible anisotropie : Interaction 0,39 MER3 ZYP1 MLH1 GFP libre Forte anisotropie : Pas d’interaction 0,01 Atelier Hybridation in situ Atelier Immunolocalisation A. Berger, H. Morin K. Belcram, A. Berger, H. Morin Hybridations in situ Histologie et cytologie Création d’une banque de colorants spécifiques sur différents organes de différentes espèces. Immuno-histochimie - En routine sur A. thaliana et sur d’autres espèces l’ancolie, la tomate, la pomme de terre, la cardamine, le pois, le melon… - Développement : plantes entières et RT-PCR in situ. Sur coupes Whole mount - En routine chez A. thaliana (marquages simples et multiples) - Développement sur plantes entières Sur coupes Simple marquage: Whole mount Marquages multiples: A. caerulea A. thaliana Lignine Amidon et Tanins Mucilage S.tuberosum Embryon Gus Amidon, callose Noyaux, réserves protéiques C. melo S. lycopersicum A. thaliana Bleu de toluidine Callose P. sativum A. thaliana http://www.versailles-grignon.inra.fr/pciv/ Institut National de la Recherche Agronomique, Centre de Versailles-Grignon, RD10, 78026 Versailles CEDEX 14
