Presentation dun appareil destine a faire a de jeunes embryons d

Presentation dun appareil destine a faire a de jeunes
embryons d'oiseaux de petites injections localisees
de substances chimiques
par
p.
A N C E L et j .
HOUGET1
L E S injections de substances chimiques au cours des premiers jours de l'incubation en vue d'obtenir des malformations d'embryons d'oiseaux ont ete faites
suivant les auteurs dans le blanc, le jaune ou la chambre a air de l'ceuf, tandis
que d'autres deposaient sur l'embryon une goutte de la solution a etudier. Dans
le but de faciliter l'etude de certains problemes de teratogenese, nous avons mis
au point une autre technique permettant de realiser des injections localises a
des ebauches embryonnaires determinees et fait construire un appareil dont
nous allons donner la description et le mode de fonctionnement.
DESCRIPTION DE L'APPAREIL
Cet appareil (Fig.) repose sur une planche horizontale et comporte differentes
parties:
1. Une seringue (S) de 025 cm.3 de capacite et de diametre exterieur d'environ
25 mm. (seringue a huile grise ou a insuline) peut etre solidement fixee dans
une gouttiere metallique sur la planche. Cette gouttiere comporte a une de ses
extremites une vis micrometrique au pas de 1 mm., destinee a pousser le piston
de la seringue. L'avancement de cette vis est commande par un vernier gradue
en 360 parties.
2. Un tube en cuivreflexiblede 1 mm. de diametre interieur, long de 25 cm.,
enroule en helice porte un embout soude a chacune de ses extremites. L'un peut
s'adapter a la seringue solidement grace a des ressorts de traction, l'autre est
lute sur l'aiguille de verre servant aux injections. Cette aiguille longue de 10 a 15
cm. est courbee a 120° vers son extremite libre et est etiree de maniere a debiter
300 a 400 gouttes par cm.3
3. Un support vertical (V) est muni d'une piece (C) qui peut etre deplacee
verticalement par une vis micrometrique commandee par le bouton A. La piece
C sert a fixer l'aiguille de verre dans la position voulue grace a son inclinaison
possible dans le plan horizontal.
4. Une loupe binoculaire.
1
Authors' address: Institut de Biologie physico-chimique, 13 rue Pierre Curie, Paris Ve, France.
[J. Embryol. exp. Morph. Vol. 2, Part 4, pp. 290-292, December 1954]
APPAREIL A I N J E C T I O N S LOCALISEES
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5. Une lampe dont la lumiere peut etre concentree sur l'embryon en experience.
•A
Appareil a injections localises. L6gende dans le texte.
FONCTIONNEMENT DE L'APPAREIL
II comprend la mise en charge de l'appareil et la realisation de l'injection.
(a) Mise en charge
On remplit la seringue S de la solution a utiliser et on la fixe dans la gouttiere.
On fait avancer la vis micrometrique de faeon a la mettre en contact avec le piston
de la seringue. Le tube flexible et Faiguille, restes remplis d'eau distillee depuis
le lavage de l'experience precedente, sont d'abord vides par injection d'air en
utilisant une seringue ordinaire. Celle-ci sert ensuite a remplir flexible et aiguille
avec la solution a utiliser dont les premieres portions servent au rincage. On
monte alors l'embout sur la seringue S en veillant soigneusement a ce qu'il ne
subsiste aucune bulle d'air dans tout le montage. Pour assurer Petancheite complete de l'appareil, indispensable a un fonctionnement regulier, il est necessaire
de graisser, avec de la graisse a rodages, le piston de la seringue et son extremite
se logeant dans l'embout. Les effets de capillarite qui feraient remonter le liquide
le long des parois de Paiguille eflilee sont empeches en recouvrant celles-ci d'une
tres legere couche de silicone.
Un controle de la regularite de marche de l'appareil peut etre fait de la
maniere suivante: On place un papier noir sous la pointe de Paiguille et a l'aide
de la vis A on etablit successivement le contact de Paiguille avec le papier en
differents endroits apres avoir chaque fois actionne le piston de la seringue, de
fa?on a faire sourdre une quantite de liquide egale a 1/24 mm.3, ce qui, dans
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P. ANCEL & J. H O U G E T
notre montage, correspond a un angle de 5° du vernier, limite d'un fonctionnement correct.
Les differentes gouttes obtenues doivent etre egales entre elles et l'aiguille
mise en contact avec le papier sans mouvement du piston ne doit pas laisser
apparaitre de liquide. S'il n'en est pas ainsi, l'etancheite de l'appareil doit etre
a nouveau recherchee.
(b) Realisation de Vinjection
Un orifice circulaire de 2 cm. de diametre environ a ete pratique dans la
coquille apres enlevement de 2 c.c. d'albumine. L'embryon est ensuite amene en
face de l'orifice et examine a la loupe binoculaire. L'aiguille est inclinee et fixee
de maniere que sa partie effilee soit orientee perpendiculairement a l'embryon.
Cette pointe est amenee au-dessus de l'embryon par deplacement du support V,
puis au-dessus du point exact a injecter en deplacant legerement l'oeuf, tandis
qu'elle est descendue vers ce point a l'aide de la vis A. Le moment ou la pointe
de l'aiguille touche la petite couche d'albumine qui revet l'embryon est tres facile
a observer ainsi que celui ou elle atteint la membrane vitelline qui ne doit pas
etre fortement deprimee. L'injection est faite en actionnant le piston et l'aiguille
est relevee lentement sous le controle de la loupe.
Quand la substance injectee est coloree comme par exemple avec des solutions
de 1/250 a 1/1000 de trypaflavine, on voit apparaitre une petite tache arrondie
permettant de controler pour chaque embryon la localisation de l'injection. On
peut ainsi se convaincre du bon fonctionnement de l'appareil.
Les fines aiguilles peuvent, au cours des experiences, etre bouchees par de
petites particules; aussi est-il indique de n'employer que des solutions centrifugees et parfaitement limpides; il Test aussi apres enlevement de chaque oeuf
injecte de faire tomber une goutte en actionnant le piston, puis d'en faire apparaitre une autre qui sera enlevee a l'aide d'un papier immediatement avant
l'injection a l'embryon suivant. Tout trouble de fonctionnement sera ainsi evite
ou signale.
CONCLUSION
L'appareil a injection decrit ci-dessus a ete construit a l'lnstitut de Biologie
physico-chimique par Mr. Baton. Le but vise etait de localiser avec une grande
precision et une grande regularite l'injection d'une tres faible quantite d'une
solution de substance chimique sur une region embryonnaire. Cet appareil permet cette localisation de 1/24 mm.3, aussi nous parait-il susceptible de rendre
des services dans l'etude de divers problemes de teratogenese.
SUMMARY
An apparatus is described for injecting very small quantities (minimum of
1/24 mm.3) on to a localized region of a chick embryo.
{Manuscript received 3:v: 54)