localisationdusignalenIHC - JA
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Un gage de spécificité en immunohistochimie : la localisation cellulaire du signal Un gage de spécificité en immunohistochimie : la localisation cellulaire du signal Immunohistochimie : méthode immunologique approche morphologique des cellules positives et des cellules négatives répartition des cellules positives et des cellules négatives dans le tissu localisation du signal dans les différents compartiments cellulaires Caractéristiques propres à l’immunohistochimie Analyse du signal D indissociable de l’analyse morphologique D avantage des techniques sur tissu fixé et inclus en paraffine Evaluation du signal en immunohistochimie Niveau d’expression d’une protéine dépend : Degré de différenciation de la cellule, concentration de la protéine, rapidité à l’exportation … Dérégulation génétique des cellules tumorales : ¾ Dérégulation des protéines synthétisées : perte d’expression, expression aberrante, hyperexpression d’un oncogène, … ¾ Modifications de la membrane cellulaire : capacités d’endocytose des molécules extracellulaires Localisation cellulaire de l’antigène Structure de l’antigène et possibilité de le détecter par un anticorps Préparation des tissus Localisation cellulaire du signal D souvent irrégulier, granulaire, localisé dans 1 ou 2 compartiments cellulaire D rarement uniforme et diffus D reflète la biologie de la protéine détectée Site où la protéine est présente : synthèse, concentration, stockage site fonctionnel : membrane cellulaire, noyau, cytoplasme [endocytose de la protéine par la cellule] Membrane cellulaire Localisation cellulaire du signal Synthèse des protéines Ribosomes : traduction des ARNm Î Ex. : Réticulum endoplasmique granuleux + citerne périnucléaire (ségrégation des protéines synthétisées) Immunoglobulines (Ig) dans les cellules lymphoïdes B à différenciation plasmocytaire Î exportation d’Ig SIGNAL granulaire cytoplasmique liseré périnucléaire boule intranucléaire (VIN) Ig dans les cellules lymphoïdes B SIGNAL granulaire cytoplasmique liseré périnucléaire Ex. hyperplasie immunoblastique Kappa Lambda Kappa Lambda Ig dans les cellules lymphoïdes B LLC SIGNAL liseré périnucléaire boule intranucléaire (VIN) Ex. LLC, L. lymphoplasmocytique L. lymphoplasmocytique IgM IgM Localisation cellulaire du signal Stockage des protéines Granules (vésicules) de sécrétion Concentration des protéines destinées à l’exportation SIGNAL : granulaire cytoplasmique Dcellules glandulaires Dcellules neuro-endocrines : chromogranine … Dlymphocytes cytotoxiques : TiA-1, granzyme perforine … Chromogranine A : Carcinome neuroendocrine TIA-1 : L. ALC Localisation cellulaire du signal Concentration , conditionnement, modifications et orientation des protéines Æ excrétion Æ lysosomes Æ membrane cellulaire Appareil de Golgi : Centre principal du trafic des protéines dans la cellule SIGNAL : tache réniforme juxtanucléaire Kappa Ex. : Ig, CD15, LMP-1 Un signal golgien suggère que la protéine est synthétisée par la cellule et transite par le Golgi : protéines glycosylées Lymphome de Hodgkin CD15 LMP-1 Localisation cellulaire du signal Site d’activité de la protéine + + + D Localisation majeure des signaux dans la cellule D Lié à la fonction de la protéine 1. membrane cellulaire : récepteurs, transport transmembranaire, enzymes … 2. cytoplasme : cytosquelette, lysosomes … 3. noyau : enzymes, protéines de structure, de régulation de l’expression transcriptionnelle Site d’activité de la protéine Ex. L. de Hodgkin nodulaire à prédominance lymphocytaire 1. membrane cellulaire : récepteurs, transport transmembranaire, enzymes, … Ex. : EMA antigènes leucocytaires EMA, CEA, … molécules d’adhérence protéines virales : LMP-1 d’EBV CD20 Site d’activité de la protéine 2. cytoplasme : D cytosquelette : ex. filaments intermédiaires + + + kératines Æ SIGNAL dense +/- fibrillaire boule paranucléaire D lysosomes : ex. lysozyme, myélopéroxydase Æ SIGNAL granulaire D membranes des organites intracellulaires (BCL2), cytosol (hémoglobine) Carcinome 2. cytoplasme : D cytosquelette : ex. filaments intermédiaires Kératines Æ SIGNAL dense +/- fibrillaire boules paranucléaires KL1 Paragangliome KL1 Tumeur de Merkel cutanée KL1 Sarcome myéloïde 2. cytoplasme : D lysosomes : ex. lysozyme, myélopéroxydase SIGNAL granulaire MPO Lysozyme 2. cytoplasme : lysosomes : ex. lysozyme, myélopéroxydase SIGNAL granulaire LA : Lysozyme BOM : MPO Lymphome de Burkitt Site d’activité de la protéine 3. noyau : enzymes, protéines de structure, de régulation de l’expression transcriptionnelle … Ex. : Ki-67, p53, cycline D1, c-myc … récepteurs stéroïdiens … protéines virales (EBNAs, …) MIB-1 Carcinome mammaire Ganglion : centre gerrminatif RO RP BCL6 Localisation cellulaire du signal Endocytose de la protéine par la cellule D histiocytes-macrophages + + + D cellules tumorales + + + D lymphocytes … SIGNAL : grains intracytoplasmiques CD20 : cellules lymphoïdes B CD20 : histiocytes Endocytose Localisation cellulaire du signal Association de plusieurs signaux dans la cellule D Immunoglobulines : Leur localisation varie selon le stade de différenciation de la cellule B Ig de membrane : site fonctionnel tissu congelé Ig intracytoplasmique : différenciation plasmocytaire synthèse pour l’exportation tissu fixé et inclus en paraffine D CD15, CD30, LMP-1 … membrane cellulaire granulaire intracytoplasmique zone du Golgi Lymphome de Hodgkin CD15 Hyperplasie immunoblastique Kappa Localisation cellulaire du signal membrane cellulaire Î site fonctionnel cytoplasme Î synthèse concentration et stockage site fonctionnel noyau Î site fonctionnel Localisation cellulaire du signal Le signal immunohistochimique D n’est pas dû au hasard D est le reflet d’une réalité biologique La localisation morphologique du signal D permet d’affirmer la spécificité de la réaction et d’interpréter les signaux faibles D rend l’interprétation reproductible entre pathologistes D permet de ne pas tenir compte des artéfacts Î implique d’avoir des informations sur la biologie de l’antigène recherché Lymphome de Hodgkin classique : CD15 + Signal d’intensité vive Signal golgien d’intensité faible Lymphome de la zone marginale splénique Immunoglobulines Artéfacts ? IgM IgM Kappa Lambda Myélome : monotypie Kappa Myélome : bruit de fond Kappa ? κ λ κ Myélome : bruit de fond Kappa ? NON monotypie IgG-K et Ig interstitielles κ λ IgG IgA BOM : Myélome lambda et plasmocytes réactionnels kappa κ λ
