Gestion de l'infection à virus West Nile Test With Confidence™ Virus West Nile Comme son nom l’indique, la fièvre à virus West Nile est une maladie causée par le virus West Nile (WNV), un virus à ARN monocaténaire appartenant à la famille des Flaviviridae. D’autres virus de cette famille sont à l’origine de l’encéphalite japonaise, la fièvre jaune ou l’encéphalite de Saint-Louis. Le nom du virus provient de la région occidentale du Nil, en Ouganda, où la maladie a été observée pour la première fois en 1937 chez une femme qui présentait une forte fièvre. En 1957, le WNV a été reconnu comme responsable d’une épidémie de méningite et d’encéphalite grave en Israël. En 1999, la maladie s’est étendue à l’hémisphère occidental où elle a été observée pour la première fois dans la région de New York, avant de toucher le Canada, le Mexique et l’Amérique latine. Le test IDEXX IgM WNV Ab permet de détecter une exposition récente au virus West Nile Environ 70 % des chevaux affectés ne présentent aucun signe clinique, tandis que 20 % souffrent de symptômes légers. Des formes neuro-invasives de la maladie, parmi lesquelles la méningite, l’encéphalite, la parésie, une atteinte du neurone moteur et la paralysie flasque sont constatées chez environ 1 à 10 % des chevaux infectés. Chez le cheval, le taux de mortalité en cas d’infection neuro-invasive est de 20 à 60 %. Il n’existe aucun traitement spécifique de la fièvre à virus West Nile. Ouganda - Origine de la fièvre à virus West Nile Étant donné que les IgM peuvent uniquement être détectées pendant trois mois après l’infection, l’obtention d’un résultat positif indique une exposition récente au WNV et la présence du WNV circulant dans la région. Le test IDEXX IgM WNV Ab est un test ELISA de capture en deux étapes qui permet de détecter avec précision les IgM dirigées contre le virus West Nile (WNV) dans le sérum de cheval. Les autres tests ELISA de dépistage du WNV permettent de détecter les IgG qui restent présentes dans le sérum du cheval plusieurs années après l’infection. La présence d’IgG ne donne aucune information sur le moment auquel l’infection a été contractée ni sur la présence actuelle du WNV dans l’environnement. Protocole du test IDEXX IgM WNV Ab Conjugué HRP anti-WNV Il existe deux lignées du virus. La première lignée est surtout présente en Europe, en Afrique du Nord, en Afrique centrale, en Israël, en Inde, en Amérique centrale, en Amérique du Nord, en Argentine et en Colombie. La deuxième lignée est endémique en Afrique centrale, en Afrique australe et à Madagascar. Échantillon du cheval testé (IgM) Ac anti-IgM équines WNRA (ou NCA) Lavage : 3 x 300 µl Échantillon : sérum de cheval Volume : 50 µl (pré-dilution au 1/100) Incubation : 1 h à 37°C Signes cliniques Chez ce dernier, la période d’incubation est de 3 à 15 jours. Les chevaux malades présentent habituellement une ataxie ; dans certains cas, une faiblesse générale, des fasciculations musculaires et des déficits des nerfs crâniens peuvent également être observés. DO (WNRA) Épidémies de fièvre à virus West Nile Lecture de la DO à 450 nm WNRA : lignes A à D Lavage : 3 x 300 µl Conjugué : 50 µl Volume : 50 µl Lavage : 3 x 300 µl Incubation : 1 h à 37°C 1 1937 1950–1975 1994–2006 Les oiseaux sauvages sont le réservoir du virus West Nile qui est transmis par les moustiques. Les moustiques contractent l’infection lorsqu’ils piquent les oiseaux infectés. Ils transmettent ensuite le virus à d’autres oiseaux et espèces, NCA Transmission du virus West Nile 2 3 ... A – 3 B + 4 C 1 5 D 2 6 E – 3 F + 4 G 1 5 H 2 6 La figure ci-dessous illustre la méthode de capture des IgM en deux étapes utilisée dans le test IDEXX IgM WNV Ab. 1. C haque échantillon est déposé dans deux puits de la microplaque. Si l’échantillon contient des IgM, les anticorps se fixent sur les parois des puits de la microplaque recouvertes d’anticorps dirigés contre les IgM équines. 3. A près lavage de la microplaque, le conjugué HRP dirigé contre le virus West Nile est ajouté dans tous les puits. Le conjugué se lie à n’importe quel WNRA fixé aux IgM. • ISR entre 2,00 et 3,00 (2,00 < ISR < 3,00) = échantillon douteux (un test de confirmation est nécessaire). • ISR ≥ 3,00 = échantillon positif (il contient des IgM dirigées contre le virus West Nile, signe d’une exposition récente au virus). 4. Après lavage de la microplaque, le substrat enzymatique TMB est ajouté dans les puits. En présence d’une liaison conjugué-WNRA (lors de l’étape 3), le substrat enzymatique TMB forme un composé bleu virant au jaune après l’ajout de la solution d’arrêt. 5. La lecture de la microplaque se fait à 450 nm. L’intensité de la couleur est proportionnelle à la quantité d’anticorps présente dans l’échantillon. Substrat : 75 µl Solution d’arrêt : 50 µl 4 5 6 7 8 9 10 11 Exemple d'interprétation du résultat du test IDEXX IgM WNV Ab 12 Critères de validation (Les quatre critères doivent être remplis. Toutes les lectures se font à 450 nm.) 1 2 3 A – 3 ... B + 4 C 1 5 D 2 6 E – 3 F + 4 DO du contrôle positif > 0,40 G 1 5 Substrat : 75 µl ISR du contrôle positif > 3 H 2 6 Incubation : 10 min à 21°C (ISR du contrôle positif = DO (B1)/DO450 (F1)) DO du contrôle négatif < 0,15 ... ISR du contrôle négatif < 2 (ISR du contrôle négatif = DO (A1)/DO450 (E1)) pour qu’ils puissent transmettre le virus. DO (NCA) Lecture de la DO à 450 nm Vecteurs (moustiques) L’interprétation des résultats est la suivante : • ISR ≤ 2,00 = échantillon négatif (il ne contient pas d’IgM dirigées contre le virus West Nile). hôtes finaux car la réplication du WNV dans leur organisme est insuffisante Hôtes occasionnels (homme, cheval et autres animaux) Les résultats du test ELISA sont exprimés sous forme d’une valeur ISR (Immune Status Ratio), qui correspond au rapport entre la densité optique du puits WNRA et celle du puits NCA pour chaque échantillon. 2. A près lavage de la microplaque, l’antigène recombinant du virus West Nile (WNRA) est ajouté dans le premier puits de chaque échantillon et l’antigène normal (NCA) dans le second puits. Si l’échantillon contient des IgM anti-WNV, le WNRA se fixe aux IgM dans les puits. dont l’homme et le cheval. L’homme et le cheval sont considérés comme les Hôtes amplificateurs (oiseaux) L’ISR (Immune Status Ratio) permet une interprétation claire des résultats Incubation : 10 min à 21°C Incubation : 1 h à 37°C ou durant toute la nuit à 5°C WNRA La fièvre à virus West Nile touche essentiellement les oiseaux, l’homme et les chevaux. La maladie est généralement asymptomatique mais des symptômes pseudo-grippaux comme la fièvre, les maux de tête, l’anorexie et les myalgies sont rapportés dans environ 20 % des cas. La maladie peut également entraîner une encéphalomyélite chez l’homme et le cheval. Méthode ELISA de capture en deux étapes NCA : lignes E à H Volume : 50 µl Incubation : 1 h à 37°C ou durant toute la nuit à 5°C Lavage : 3 x 300 µl Conjugué : 50 µl Incubation : 1 h à 37°C Lavage : 3 x 300 µl Solution d’arrêt : 50 µl 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ... DO (WNRA) ISR (Immune Status Ratio) : ISR = --------------DO (NCA) Détection des IgM et de l’infection à virus West Nile Virémie IgM Ac Infection IgG Ac Apparition des signes cliniques (seulement 20 à 30 % des chevaux présentent des signes cliniques) Diagnostic de la fièvre à virus West Nile grâce à la détection des IgM Les signes cliniques de la fièvre à virus West Nile évoquent une infection par le WNV, mais étant donné que certains cas d’infection par le WNV peuvent être asymptomatiques, une évaluation clinique et des analyses de laboratoire sont nécessaires pour pouvoir poser le diagnostic. La fièvre à virus West Nile peut être diagnostiquée en détectant le virus par virologie ou par PCR. La méthode la plus utile consiste cependant à détecter les IgM anti-WNV. Ce type d’anticorps peut être détecté jusqu’à trois mois après l’infection. Par conséquent, la présence d’IgM indique une infection récente par le WNV, faisant de cette méthode de détection une méthode utile pour les études épidémiologiques ainsi que pour diagnostiquer la maladie. Le manuel terrestre de l’OIE décrit le test ELISA de capture des IgM comme « particulièrement utile pour détecter les expositions naturelles et récentes au virus West Nile ainsi que les infections par ce virus. »1 L’obtention d’un résultat positif pour un échantillon équin analysé avec un test ELISA de capture des IgM indique que le cheval a été en contact avec le virus au cours des trois derniers mois. Cela révèle également la présence récente de moustiques propageant le virus West Nile dans la région et la possibilité que ces moustiques subsistent toujours dans l’environnement. 3 mois > 1 an Mesures de protection Le contrôle de la population de moustiques et la réduction de l’exposition aux moustiques constituent les éléments clés de protection contre le virus West Nile. Les moustiquaires et les répulsifs s’avèrent utiles. Parmi les autres recommandations, citons le fait d’isoler les chevaux des moustiques, l’utilisation de ventilateurs pour éloigner ces insectes et l’extinction des lumières pendant la nuit. Virus West Nile Le fait de pouvoir déterminer avec précision le moment de l’infection permet une réponse appropriée Étant donné qu’il est possible de détecter les IgM à partir du 7ème jour et jusqu’à trois mois après l’exposition au WNV, l’obtention d’un résultat positif au test ELISA de capture des IgM signifie que le cheval a été exposé au virus West Nile au cours des trois derniers mois. Une infection aussi récente indique que les moustiques sont probablement en train de propager le WNV dans la région. Grâce à ces éléments, il vous est possible de prendre les mesures adéquates en matière de protection des animaux et de lutte contre les moustiques. Études de sensibilité et de spécificité Le test IDEXX IgM WNV Ab a montré une sensibilité de 99 % et une spécificité de 100 % dans les populations testées. Même s’il n’existe aucun sérum de référence à utiliser avec les tests ELISA de détection du virus West Nile, le test IDEXX IgM WNV Ab a été testé à l’aide d’un sérum positif provenant du Laboratoire National de Référence. Le test IDEXX a détecté ce sérum positif à une dilution au 1/102400. Caractéristiques du test IDEXX IgM WNV Ab Kit de 2 plaques : réf. P00730-2 Kit de 5 plaques : réf. P00730-5 • Les IgM dirigées contre le virus West Nile sont détectables à partir du 7ème jour et jusqu’à 3 mois après l’infection. • La présence d’IgM anti-WNV indique une infection récente par le WNV. Référence 1. World Organization for Animal Health. West Nile fever. In: Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2008. Paris, France : World Organization for Animal Health; 2008. Disponible à l'adresse : www.oie.int/Eng/Normes/Mmanual/2008/pdf/2.01.20_WEST_NILE.pdf. Consulté le 31 juillet 2009. Pour plus d'informations sur le virus West Nile, veuillez contacter votre représentant IDEXX ou consulter le site idexx.fr/wnv. Siège social Groupe IDEXX Laboratories, Inc. One IDEXX Drive Westbrook, Maine 04092 États-Unis Siège social en Europe IDEXX Europe B.V. Scorpius 60 Building F 2132 LR Hoofddorp Pays-Bas Siège social en Asie Groupe IDEXX Laboratories, Inc. 3F-5 No. 88, Rei Hu Street Nei Hu District 11494 Taipei, Taiwan Tél. : Fax : Tél. : +31 23 558 70 00 ou +800 727 43399 Fax : +31 23 558 72 33 Tél. : +886 2 6603 9728 Fax : +886 2 2658 8242 +1 207 556 4890 ou +1 800 548 9997 +1 207 556 4826 ou +1 800 328 5461 © 2011 IDEXX Laboratories, Inc. Tous droits réservés. • 09-71275-00 IDEXX et Test With Confidence sont des marques commerciales ou des marques déposées d'IDEXX Laboratories, Inc. ou de ses filiales aux États-Unis et/ou dans d'autres pays. 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