Culture cellulaire
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Activités de l’année 2009 Maedi-visna Stephen VALAS AFSSA Site de Niort, Laboratoire d’Etudes et de Recherches Caprines 60 rue de Pied de Fond, B.P. 3081, 79000 Niort Tél.: 33 (5) 49 79 61 28, Fax: 33 (5) 49 79 42 19 e-mail : [email protected] Résumé des activités générales liées à la maladie 1. 2. Test(s) employés ou disponibles pour cette maladie dans votre laboratoire Test Pour Spécificité Total ELISA Anticorps Groupe 310 Western blot Anticorps Groupe 1100 PCR Génome Groupe 10 IDG Anticorps Groupe 0 Culture cellulaire Isolement viral Groupe 10 Heteroduplex Mobility Assay Typage moléculaire Sous-type 0 Immunohistochimie Antigène Groupe 0 Production, contrôle et distribution des réactifs diagnostiques Réactif produit pour le diagnostic spécifique de la maladie : sérum positif de référence Quantités de sérum de référence fournies à l’échelle nationale : 57 aliquots de 1 ml de sérum étalon, dont 53 adressés à des laboratoires français Quantités de sérum de référence fournies à d’autres Membres de l’OIE : 1 aliquot de 1 ml de sérum étalon Activités spécifiques découlant du mandat des Laboratoires de référence 3. Normalisation et harmonisation internationales des méthodes de diagnostic, ou de la production et de l’évaluation de vaccins Pas de contribution à des programmes d’évaluation inter-laboratoires à l’échelle internationale aboutissant à l’harmonisation des procédures et à l’élaboration de méthodes ou de réactifs standard entre les laboratoires des différents pays. Toutefois, le laboratoire a produit dans le cadre de ses activités de recherche de nouveaux antigènes candidats pour les tests ELISA et Western blot. A l’issu de la phase de développement, le laboratoire envisage de valider ces nouvelles méthodes à l’échelle européenne. Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009 1 Maedi-visna 4. Préparation et fourniture des réactifs de référence internationaux pour les tests de diagnostic et les vaccins Le laboratoire n’a pas fourni de réactifs standards de référence reconnus à l’échelle internationale. En revanche, le laboratoire souhaiterait pouvoir valider à l’échelle internationale les sérums de référence préparés et distribués à l’échelle nationale. 5. Recherche et développement de nouvelles méthodes de diagnostic et de contrôle des maladies Projet en cours : 1. Optimisation des tests sérologiques de détection Plusieurs études récentes ont clairement démontré que les outils sérologiques actuellement disponibles présentent à la fois un défaut de spécificité et de sensibilité. De nouveaux antigènes recombinants formés par la combinaison d’épitopes immunodominants dérivés à la fois des protéines virales Gag et Env, et représentatifs de trois sous-types visna-maedi distincts ont été développés. Un test Western blot établi sur l’un de ces antigènes recombinants a été évalué par analyse comparative avec un test Western blot fondé sur l’antigène total (virus produit par culture cellulaire) à l’aide d’un panel de 240 sérums (113 négatifs et 127 positifs). Cette analyse a conduit à la substitution courant 2009 du test Western blot basé sur l’antigène total par le test Western blot basé sur l’antigène recombinant pour le diagnostic de confirmation réalisé dans le cadre des analyses officielles. L’évaluation des performances d’un test ELISA basé sur les trois antigènes recombinants est en cours d’investigation. Cette phase de validation est réalisée en partenariat avec l’Institut National de Recherche Vétérinaire de Pologne. 2. Elaboration d’un test de sérotypage Il est désormais clairement établi que des transmission virales entre chèvres et moutons surviennent régulièrement dans les conditions naturelles, conduisant à des évènements de co-infection et à l’émergence de formes recombinantes entre les virus CAEV et visna-maedi. Cependant, l’importance épidémiologique de ces phénomènes n’est pas connue en raison de l’absence d’outils sérologiques permettant de discriminer ces deux virus étroitement apparentés. Des antigènes spécifiques de type ont été générés. La faisabilité d’un test de sérotypage est à l’étude. Ce travail est conduit dans le cadre d’une thèse doctorale 2009-11 intitulée " Développement et standardisation de méthodes de diagnostic des infections lentivirales chez les petits ruminants : application à l’échelle européenne". Projet terminé : Elaboration d’un test cellulaire basé sur un gène rapporteur Certaines souches virales n’induisent pas d’effets cytopathiques (syncytia) in vitro et ne peuvent donc pas être mises en évidence par simple isolement viral en culture cellulaire. Une lignée de cellules caprines a été transfectée de façon stable par un gène rapporteur dont l’expression est induite par une protéine virale de régulation. Ce test permet de détecter l’infection à l’échelle d’une cellule (mise en évidence des souches non inductrices de syncytia) et assure la détection à la fois des souches CAEV et visnamaedi. 6. Recueil, analyse et diffusion des données épizootiologiques significatives pour le contrôle zoosanitaire au niveau international Une nette augmentation de cas nouveaux de positivité ELISA dans des élevages certifiés indemnes a été reportée en France au cours des deux dernières campagnes, malgré une bonne adhésion des éleveurs aux directives du programme national de lutte et d’éradication. Cependant, ces réactivités ELISA ont été très rarement confirmées en Western blot. La synthèse d’enquêtes d’épidémiologie analytique a suggéré une interférence de la récente vaccination contre les sérotypes 1 et 8 du virus de la Fièvre Catarrhale Ovine (BTV) avec le diagnostic de première intention des infections à CAEV et visna-maedi. Cette hypothèse a été confirmée par une étude expérimentale conduite au laboratoire sur 23 chèvres, démontrant que la vaccination de caprins avec les sérotypes BTV 1 et 8 génère de façon transitoire (< 7 mois) des réponses faussement positives avec les trousses ELISA du commerce pour le diagnostic de l’infection CAEV. Ces trousses ELISA étant également utilisées pour le diagnostic de première intention de l’infection à visna-maedi, il est vraisemblable que la vaccination BTV soit également à l’origine des nombreuses positivités sérologiques récemment constatées dans les élevages ovins qualifiés indemnes de longue date et soumis à une vaccination BTV rendue obligatoire en France dès 2009. 2 Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009 Maedi-visna 7. Réalisation d’expertises pour l’OIE ou pour des Membres de l’OIE Pas de contribution en 2009. 8. Formation technique et scientifique du personnel d’autres Membres de l’OIE Pas de formation en 2009. 9. Réalisation d’analyses biologiques (test de diagnostic) pour le compte d’autres Membres de l’OIE Pas d’analyse en 2009 10. Organisation de réunions scientifiques internationales au nom de l’OIE ou d’autres organisations internationales Sans objet 11. Participation à des études scientifiques internationales effectuées en collaboration Pas de collaboration formelle en 2009. Collaborations informelles : 1. Objectif : Etablissement d’une lignée de cellules indicatrices pour la détection des virus CAEV et visna-maedi (publication en cours de préparation). Partenaire : Norwegian School of Veterinary Science, Dept. of Food Safety & Infection Biology, Oslo, Norway 2. Objectif: Développement de nouveaux tests sérologiques de détection et de typage des virus CAEV et visnamaedi. Partenaire : Department of Biochemistry, National Veterinary Research Institute, Pulawy, Poland. 3. Objectif: Caractérisation des interactions virus-hôte lors de transmissions inter-espèces : implication en diagnostic (publication en cours de préparation). Partenaire : Scuala Normale Superiore, Pisa, Italy, Dipartimento di Patologia Animale, Facoltà di Medicina Veterinaria, Pisa, Italy, and Dipartimento di Produzioni Animale, Facoltà di Medicina Veterinaria, Torino, Italy 12. Publication et diffusion des informations relatives au travail de l’OIE (notamment liste des publications scientifiques, activités de publication sur internet, présentations à des conférences internationales) Publications scientifiques Olech M., Croise B., Kuzmak J., et S. Valas. 2009. Evidence for interspecies transmission of small ruminant lentiviruses in sheep and goats in Poland. Bull Vet Inst Pulawy 53: 165-168. Valas S. 2009. Les infections à lentivirus chez la chèvre et le mouton. Bulletin des GTV 48: 73-80. 13. Inscription de kits de diagnostics au registre de l’OIE i) Avez-vous participé à des panels d’experts visant à valider des kits de diagnostic candidats au registre de l’OIE ? Si oui, lesquels ? Non ii) Avez-vous soumis à l’OIE la candidature de kits pour leur inscription au registre de l’OIE ? Si oui, lesquels ? Non _______________ Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009 3
