Maladie d`Aujeszky

Activités de l’année 2009
Maladie d’Aujeszky
Vannier Philippe
Agence française de sécurité sanitaire des aliments
Laboratoire de recherches et d’études Avicoles, Porcines et Piscicoles
Tél.: (+33[0]2) 96.01.62.22, Fax: (+33[0]2) 96.01.62.23
e-mail : [email protected]
Résumé des activités générales liées à la maladie
1.
Test(s) employés ou disponibles pour cette maladie dans votre laboratoire ; Unité virologieimmunologie porcine : M.F. Le Potier, C. Deblanc
Contrôles sérologiques de la Maladie d’Aujeszky (MA):
-
ELISA gE : détection d’anticorps dirigés contre la protéine gE du virus de la MA à partir de sérums ou de
buvards
-
ELISA gB : détection d’anticorps dirigés contre la protéine gB du virus de la MA à partir de sérums ou de
buvards
-
Neutralisation virale : détection d’anticorps dirigés contre le virus de la MA dans un sérum par la
suppression du pouvoir cytophatogène du virus dans un système bien défini virus-cellules sensibles
Contrôle virologique de la MA :
Isolement viral : mise en évidence du virus en inoculant un homogénat tissulaire à des cellules sensibles puis
vérification de la spécificité de l’effet cytopathopatique par séroneutralisation Tous les échantillons soumis étaient
prélevés sur carnivores.
2.
Test
Pour
Spécificité
Total
ELISA
Anticorps
gE
49
ELISA
Anticorps
gB
18
NV
Anticorps
gE/gB
0
Culture sur cellules PK15
Isolement du virus
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Production, contrôle et distribution des réactifs diagnostiques
Nous produisons du sérum sous-étalon ainsi que différents sérums négatifs ou positifs en gE et/ou gB. Nous
pouvons également fournir du virus de la MA.
A l’échelle nationale, nous avons vendu 61 ml de sous-étalon gE/gB aux laboratoires vétérinaires, et 30 ml aux
producteurs de kits français. Nous avons également vendu 2 ml de divers sérums négatifs et positifs aux
laboratoires vétérinaires et 197ml à des producteurs de kits français.
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
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Maladie d’Aujeszky
A l’échelle internationale, nous avons fourni 13 ml de sérum sous-étalon à des pays membres de l’OIE (Espagne,
Portugal et République Tchèque), 22 ml d’autres sérums (Espagne, Pologne, Belgique, Italie, Lettonie, Pays Bas,
Angleterre et République Tchèque).
Nous contrôlons également les kits de diagnostic sérologique pour les deux méthodes ELISA (contrôles initiaux et
lot par lot) avant leur commercialisation sur le territoire français. En 2009, 10 kits ont été contrôlés.
Activités spécifiques découlant du mandat des Laboratoires de référence
3.
Normalisation et harmonisation internationales des méthodes de diagnostic, ou de la production
et de l’évaluation de vaccins
L’Unité Virologie et Immunologie Porcines de l’AFSSA a organisé en 2009 un Essai Inter Laboratoires
d’Aptitude (EILA) pour la sérologie par la méthode ELISA gE/gB pour le diagnostic de la Maladie d’Aujeszky. 86
laboratoires y participaient (62 laboratoires français + 21 laboratoires internationaux ou des T.O.M.: Afrique du
Sud, Autriche, Belgique, Danemark, Espagne, Estonie, Lettonie, Nouvelle Calédonie, Pays Bas, Pologne,
Royaume uni et Suisse + 3 producteurs de kits). Le laboratoire a également participé à 2 EILA organisés par deux
autres LNRs européens (Belgique et Suisse).
4.
Préparation et fourniture des réactifs de référence internationaux pour les tests de diagnostic et
les vaccins
Nous avons fourni gratuitement des pays membres de l’OIE en sérums internationaux ADV gIG (2ml), ADV gIQ
(5ml) et ADV I (12ml) et en sérum sous-étalon européen, calibré sur l’étalon ADV I.
5.
Recherche et développement de nouvelles méthodes de diagnostic et de contrôle des maladies
Nous avons travaillé à la validation de kits industriels de diagnostic de la MA par PCR temps réel. Deux kits
devraient être mis sur le marché courant 2010.
Inluence de la réplication du plasmide sur l’efficacité et la biosécurité d’un vaccin à ADN
plasmidique contre la maladie d’Aujeszky (chef de projet : Daniel Dory, Unité de Génétique Virale et de
Biosécurité):
Classiquement, la vaccination à ADN se réalise avec des plasmides non réplicatifs dans les cellules mammifères.
Ici, des plasmides arborant des éléments réplicatifs du circovirus porcin de type 2 (PCV2) ont été construits et
caractérisés in vitro. Ces vecteurs sont bien réplicatifs in vitro et ont été utilisés pour préparer un vaccin à ADN
contre le virus de la maladie d’Aujeszky. Le gène de la glycoprotéine C du virus de la maladie d’Aujeszky a été
inséré dans un de ces plasmides réplicatifs. Un essai a été réalisé afin de mettre en évidence la réplication des
plasmides in vivo et d’étudier la distribution du plasmide après l’injection. En raison des limites de la méthode
d’évaluation de la réplication qui a fonctionné in vitro, la réplication in vivo n’a pas pu être mise en évidence. Par
ailleurs, aucune différence significative de la distribution du plasmide réplicatif comparée à celle du plasmide non
réplicatif n’a été décelée. Enfin, l’efficacité vaccinale contre une infection expérimentale du vaccin réplicatif
comparée à celle du vaccin à ADN non réplicatif n’a pas montré de différence significative.
Biosécurité de la vaccination à ADN contre le virus de la maladie d’Aujeszky: recherche d’évènements
d’intégration du plasmide dans le génome de l’hôte (chef de projet : Daniel Dory, Unité de Génétique Virale
et de Biosécurité):
Une méthode de mise en évidence de l’intégration d’un plasmide non réplicatif codant la glycoprotéine B du virus
de la maladie d’Aujeszky a été mise au point in vitro à l’aide de lignées de cellules porcines PK15 qui ont été
stablement transformées par ce plasmide. Deux sites distincts d’intégration ont été identifiés sur deux lignées
distinctes, montrant que la technique de recherche d’évènements d’intégration fonctionne. L’étape suivante
consiste à adapter et à appliquer cette méthode pour la recherche d’évènements d’intégration dans le muscle de
porc injecté par ce même plasmide.
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Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
Maladie d’Aujeszky
6.
Recueil, analyse et diffusion des données épizootiologiques significatives pour le contrôle
zoosanitaire au niveau international
RAS
7.
Réalisation d’expertises pour l’OIE ou pour des Membres de l’OIE
RAS
8.
Formation technique et scientifique du personnel d’autres Membres de l’OIE
Visite du laboratoire du laboratoire national de référence OVI de Ondersterpoort en Afrique du Sud le 22 avril
2009 : rencontre de la scientifique responsable du diagnostic : Mme Rahana Dwarka. Discussion et conseil sur les
stratégies diagnostic et de lutte en cas d’introduction du virus.
9.
Réalisation d’analyses biologiques (test de diagnostic) pour le compte d’autres Membres de
l’OIE
RAS
10. Organisation de réunions scientifiques internationales au nom de l’OIE ou d’autres
organisations internationales
RAS
11. Participation à des études scientifiques internationales effectuées en collaboration
RAS
12. Publication et diffusion des informations relatives au travail de l’OIE (notamment liste des
publications scientifiques, activités de publication sur internet, présentations à des conférences
internationales)

Présentations à l’occasion du conférences ou de réunions internationales
Communications orales
Pol, Françoise; Deblanc, Céline and Le Potier, Marie-Frédérique. How to interpret the results of an international
proficiency test when no common validation procedure exists for diagnosis kits ?3rd ESVV Veterinary
Herpesvirus Symposium, Friedrich-Loeffler-Institut Greifswald-Insel Riems, Germany, April 22 -24 2009.
Faurez, Florence; Dory, Daniel and Jestin André. In vitro and in vivo studies of a Porcine Circovirus (PCV) 2derived replicative plasmid. 4th EPIZONE Theme 5 Meeting, Maisons-Alfort, France, 18th-20th November 2009
Communications affichées
Faurez, Florence; Dory, Daniel and Jestin André. In vitro characterization of a replicating DNA vaccine against
Pseudorabies virus infection in swine. 3rd ESVV Veterinary Herpesvirus Symposium, Riems, Germany, 22-24 April
2009
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009
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Maladie d’Aujeszky

Publications scientifiques
D. Dory, M. Rémond, V. Béven, R. Cariolet, M. Backovic, S. Zientara and A. Jestin. Pseudorabies virus
glycoprotein B can be used to carry Foot and Mouth Disease antigens in DNA vaccination of pigs. Antiviral
Research 2009, 81, 217-25
13. Inscription de kits de diagnostics au registre de l’OIE
i)
Avez-vous participé à des panels d’experts visant à valider des kits de diagnostic candidats
au registre de l’OIE ? Si oui, lesquels ?
non
ii)
Avez-vous soumis à l’OIE la candidature de kits pour leur inscription au registre de l’OIE ?
Si oui, lesquels ?
non
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Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2009