Hypoxie et croissance tumorale… Module Génomique tumorale M2, Pathologie Humaine, Dr JL DEVILLE, 2011 L’hypothèse… 2008 • La vascularisation conditionne le développement des tumeurs malignes. • J Folkman : “une tumeur n’est plus viable ou entre en sommeil si elle devient > 2 à 3 mm³ sans développement d’une néovascularisation à partir de la microcirculation de l’hôte ”. • Les cellules tumorales et le stroma libèrent des facteurs diffusibles angiogéniques ou anti-angiogéniques vers l’endothélium pour réguler l’état de quiescence. NEJM 1971; 285: 1182 La vascularisation tumorale Aspect Macroscopique Structures micro-vasculaires anormales Hypoxie occlusions Anses borgnes brèches Shunts AV Brown and Giaccia. Cancer Res. 1998;58:1408-1416. Tortuosité et Désorganisation Muqueuse colique normale Muqueuse péritumorale Konerding et al. In Molls and Vaupel, eds. Blood Perfusion and Microenvironment of Human Tumors, 2002. Réseau vasculaire tumoral Caractéristiques de la vascularisation tumorale : -Désorganisée -Instable -Augmentation de la perméabilité -Hétérogénéité des flux sanguins -Elévation de la pression interstitielle dans la tumeur Hypoxie tumorale persistante Nécessité d’adaptation à un milieu hypoxique pour assurer la croissance tumorale Conséquences: nécrose par hypoxie Gliomes malins • Anneau viable et proliférant • Cellules quiéscentes • Corps central nécrotique Plage de nécrose dans une PNET Le développement de la vascularisation est une nécessité pour la tumeur…. Hypoxie tumorale et HIF-1 Hypoxie-pH-distance Hypoxie majeure-adaptation Réponse à l’hypoxie tumorale stabilisation et élévation du taux intracellulaire de HIF-1 HIF-1 The oxygen and nutrients display a gradient away from the necrotic center gradient O2, glucose, growth factors Croissance exponentielle en normoxie Modèle de skipper basée sur le fait que toutes les cellules sont en division Croissance Gompertzienne en hypoxie Inhibition de l’activité kinase des cdk Cycle cellulaire et Hypoxie Apoptose P53-dép. si Hypoxie trop sévère ou prolongée X X X HIF-1 (hypoxia Inducible Factor-1) • Découverte de ce facteur de régulation de la transcription en 1992 Recherche d’éléments de réponse à l’hypoxie du gène de l’EPO Semenza GL & Wang GL. (1992). Mol. Cell. Biol. 12: 5447-5454. • HIF-1 : protéine hétérodimérique avec domaine de fixation à l’ADN : 2 sous-unités : – HIF-1α – HIF-1β. Relative HIF-1 Expression Expression de HIF-1 en fonction de [O2] La détection de HIF-1 augmente de façon exponentielle avec la diminution de concentration en O2. Point d’inflexion autour d’une concentration en de 4-5% (concentration dans les tissus normaux.) Oxygen Concentration Semenza GL. (1997) Kidney Int. 51:553-555 HIF-1α α Correlates with Tumor Vascularity Low oxygen tension is associated with increased metastasis and decreased survival of patients The expression of HIF-1α is positively correlated with tumor vascularity. Zagzag D. (2000) Cancer. 88:2606 Régulation hypoxique et non hypoxique de HIF-1 Structure de HIF1α HIF-1α et cancer • Dans les cellules tumorales, accumulation de HIF1 par plusieurs mécanismes : – Non dégradation Situation hypoxique Inactivation/ mutation du gène VHL – Augmentation de synthèse de HIF-1α Voie MAPkinase Voie Phosphatidylinositol 3-Kinase/Akt C Blancher et al. Cancer Research 2001 Protéine G Ras Nombreuses autres voies HIF-1α et cancer Facteur pronostic péjoratif Expression de HIF-1α dans les cellules cancéreuses associée à : – Une mortalité accrue – Une majoration du risque métastatique et de la progression tumorale Zagzag D et al. Cancer 2000 Yoshimura H et al. Clinical Cancer Research 2004 – Une plus grande fréquence de la chimioresistance (MDR1) KM Comerford et al. Cancer Research 2002 HIF-1α α est régulé par des enzymes O2-dépendantes Les résidus proline 402 & 564 de HIF-1α α peuvent être hydroxylés par des prolylhydroxylases (1.2.3). L’hydroxylation entraîne le binding de HIF-1α α sur la protéine von Hippel-Lindau (VHL). Rôle de PHD2 surtout, avec affinité intermédiaire pour O2 (1er niveau de régulation). Ubiquitinylation et dégradation dans le protéasome suite à l’hydroxylation. Autre régulation par FIH (facteur inhibant HIF) avec grande affinité pour O2 (2e niveau de régulation) inhibition de fixation des coactivateurs p300/ CBP 2 niveaux de régulation VHL : interactions protéiques (sites α et β) Complexe E3 ubiquitine ligase William G, Nature 1999; 399: 203 - 204 Hypoxie HIF-1α α Pol II CBP/p300 complex HIF-1β β HIF-1 Séquences HRE (hypoxia response elements) HIF-1 : Activité de facteur de régulation de la transcription: - Activation des gènes JMJD1A, JMJD2B, JARID1B (histone désacétylases) -JMJD1A réduit la methylation de séquence promotrice de certains gènes inductibles par l’hypoxie Rôles de HIF-1 Conditions hypoxiques • Dégradation des prolyl hydroxylases par le protéasome K Nakayama et al. Cell 2004 • Absence d’hydroxylation des prolines 402 et 564 • Absence de liaison avec VHL et accumulation de HIF-1α • Translocation nucléaire de HIF-1α et dimérisation avec HIF-1β • Puis formation d’un complexe avec le co-activateur CBP/p300 facteur de régulation de la transcription pour de nombreux gènes possédant un domaine HRE (Éléments de réponse à l’hypoxie) GL Semenza. Nature Reviews Cancer 2003 En résumé… Localisation de HIF-1 Expression ubiquitaire mRNA : cerveau, coeur, rein, poumons, foie, pancréas, placenta, muscles, et ….. Lignée caki-1 Eugen von Hippel, 1904 VHL (3p25-26) Arvid Lindau, 1926 • Autosomique dominant à forte pénétrance mais expressivité variable. 20% de formes de novo. • 1/40000 avec Hémangioblastomes. • Sans phéochromocytome (protéine tronquée): type 1. • Avec phéochromocytome (10% malins): type 2. – 2a (codon 98): faible risque de RCC (<10% des cas, Allemagne). – 2b (> 100 mutations): fort risque de RCC (75% des cas). – 2c (codon 188 svt): que des phéochromocytomes. Critères diagnostiques du VHL • 2 lésions majeures dont un hémangioblastome. • 1 lésion majeure et un apparenté atteint. – – – – – Hémangioblastome du SNC ou de la rétine. RCC avant 45 ans/kystes rénaux multiples. Tumeur endodrine/kystes pancréatiques. Phéochromocytome. Tumeur du sac endolymphatique • cystadénome de l’épididyme. • cystadénome du ligament large. Hémangioblastomes Friedrich C, Cancer 1999; 86: 1658. Modèles murins VHL-/VHL -/- knockouts décès in utéro : 10.5–12.5 J de gestation par vasculogenèse anormale du placenta VHL +/- hétérozygotes normaux sans tumeurs jusqu’à 15 mois….. knockout conditionnel hépatique 2-copies knockout: 1-copie knockout: Steatose sévère, Cavités vasculaires pseudo-péliose, Foyers d’hypervascularisation Hémangiomes caverneux du foie Tumeurs du foie des souris +/Surexpression des gènes induits par l’hypoxie tels que : • VEGF • Glucose transporter 1 • Erythropoietin Importance du gène VHL dans la régulation des gènes inductibles par l’hypoxie Haase et al. PNAS 2001 Activation non hypoxique de HIF-1 Modèle du cancer du rein • Mutation de la protéine VHL dans 43 à 57 % des formes sporadiques de RCC selon les séries K Foster et al. Hum Mol Genet 1994 Gnarra JR et al. Nature genetics 1994 • Inactivation du gène VHL par méthylation du promoteur dans 20 % des RCC sporadiques Herman JG et al. PNAS 1994 • Rôle de la protéine VHL dans la dégradation O2 dépendante de HIF1α (hypoxia inductible factor) PH Maxwell et al. Nature 1999 • Inactivation de VHL retrouvée dans d’autres formes sporadiques de cancer (10 % des cancers coliques, certaines tumeurs endocrines du pancréas) Nature Reviews Cancer Gènes régulés par HIF1 Gènes impliqués dans : • la néoangiogénèse tumorale: VEGFR, VEGF, adrénomédulline (ADM)… • la prolifération cellulaire, Cycline G2, TGFα, TGFβ3… • La survie cellulaire : adrenomedulline, IGF2, IGFBP1 et 3, EPO… • la chimiorésistance : MDR1 • le métabolisme de la MEC (MMP type 2) • L’apoptose • Le métabolisme du glucose … Gènes cibles (1) Erythropoeitin (EPO) Nitric oxide synthase 2 (NOS2) Transferrin Transferrin receptor Vascular endothelial growth factor (VEGF) VEGF-R1 Group 1: Délivrance en O2 Gènes cibles (2) Aldolase A Aldolase C Enolase 1 (ENO1) Glut-1 (Pet-scan) Glyceraldehyde phosphate dehydrogenase Hexokinase 1 Hexokinase 2 Lactate dehydrogenase A Phosphofructokinase L Phosphoglycerate kinase 1 Pyruvate kinase M Group 2: Glucose Métabolisme Gènes cibles (3) Insulin-like growth factor 2 (IGF-2) IGF binding protein 1 IGF binding protein 3 p21 p35srj Group 3: Prolifération et survie Gènes régulés par HIF-1 • Conditions hypoxiques/ mutation VHL : – Accumulation de HIF-1 – Activation par HIF-1 de l’expression de nombreux gènes Gènes régulés par HIF–1: Survie cellulaire Prolifération Mobilité Angiogenèse… Hypoxie Croissance tumorale Métastase Nature Reviews Cancer, Vol. 3(10): 721-732. 2003 Hypoxie tumorale et néoangiogenèse tumorale Néo-angiogenèse physiologique • 0.1% des cellules endothéliales sont en prolifération. • Si besoins en O2 • Développement musculaire. • Développement graisseux. • Cicatrisation. • Maturation du corps jaune et de la muqueuse utérine. Angiogenèse Généralités Au cours de la progression tumorale : Acquisition par la tumeur d’un potentiel angiogénique (switch angiogénique). Activation anormale de l’angiogenèse suite à une modification de la balance des signaux. Cellules endothéliales proliférantes comme cibles ? • Absence d’instabilité génétique (échappement). • Sélectivité pour les néo-vaisseaux. • Les cellules endothéliales tumorales se divisent 70 x plus que les autres. • Accessibilité. • Peu d’angiogenèse physiologique. • Non spécifique d’un type de tumeur. • Couplage possible avec la chimiothérapie. La notion de « switch angiogénique » • Initiation de l’angiogenèse: acquisition des cellules tumorales au cours de leur progression d’un phénotype: - Production de VEGF - Action des métalloprotéases - +/- activation oncogénique - Perte de la régulation de p53 fréquente • Précède l’invasion du stroma +++ (stade in situ ► stade invasif) Phase de latence des vaisseaux • Inhibiteurs : – Thrombospondine – Endostatine (Fragment du Collagène XVIII inh. VEGF) – Angiostatine-1 – Vasostatine – IL10-IL12 – Platelet factor 4 – Interféron α – TIMPs….. ANGIOGENESE TUMORALE Rôle de la matrice extracellulaire (MEC) • Dégradation de la MEC nécessaire à la libération des facteurs de croissance tels que FGF ou VEGF qui, en l’absence de dégradation, restent séquestrés dans la matrice. • Dégradation de la matrice extracellulaire implique une série de métalloprotéinases (MMPs) : – – – – Collagénases Gélatinases Stromélysines MMP-7, MMP-12 • Création d’espace pour les cellules endothéliales migrantes • Interaction MEC/ intégrines membranaire nécessaire à l’angiogenèse ANGIOGENESE Généralités • Angiogenèse ≠ vasculogenèse Création de nouveaux vaisseaux à partir de vaisseaux préexistants • Phase d’activation VEGFs/récepteurs et angiopoiétines/ récepteur Tie : rôles majeurs • Phase de maturation – – Rôle de PDGF dans le recrutement des péricytes Quiescence endothéliale induite par BMP9 et TGFβ Déstabilisation vasculaire Péricytes Tumeurs et corps de weibel-Palade ANGIOGENESE Les étapes 1. 2. 3. 4. 5. Destabilisation des parois vasculaires existantes (Ang 2/ Tie2) Prolifération (VEGF/ VEGF-R2 - FGF) Migration (VEGF/ VEGF-R1 FGF) Tubulogenèse (VEGF/ VEGFR1 – TGFβ) Stabilisation du néovaisseaux (Ang 1/ Tie 2; PDGF, TGF-β) Paracrinie Différentes étapes Les voies du recrutement des cellules murales (péricytes) • PDGF-β β et son récepteur. • La sphingosine-1- phosphate A (SIP-1) et l’endothelial différentiation sphingolipid Gcoupled receptor-1 (EFG-1). • Ang-1 et Tie-2 (maintien). • TGF-β1 β1 via les récepteurs auxiliaires endogline et ACVRL1.. Thrombospondine • Glycoprotéine de matrice contenue entre autres dans les granules α des plaquettes. • Inhibe l’activité MMP-9 et stocke le FGF-2. • K/O: mauvaise régression vasc. à l’arrêt de la lactation. Migration assay des cellules endothéliales: exemple du rôle du FGF-2 dans la migration + DMEM A + Suramine (inh FGF-2) B 6 heures après une détersion mécanique Facteurs de « réveil » des cellules endothéliales • • • • • • • VEGF bFGF PDGF TGF-alpha et beta TNF alpha IL3-IL-8 Angiogénine (RNAse) • • • • • Leptine HGF G-CSF Follistatine Adrénomédulline... Produite par cellules murales, tumorales et endothéliales. Katona T, 2005 Phénotypes endothéliaux Normal Angiogénique Attention les récepteurs pour le VEGF sont parfois aussi exprimés sur la population tumorale (Ovaire, prostate, LMNH, mélanomes,…). Hypothèse des pseudo vaisseaux • Phénomène de « mimétisme vasculaire » • Formation de pseudo-vaisseaux, bordés de cellules tumorales, et non pas de cellules endothéliales • Associé à un mauvais pronostic • Moindre sensibilité des pseudo vaisseaux aux thérapies antiangiogeniques Van der Schaft DW. JNCI. 2004 Intégrines endothéliales • L’adhésion des intégrines à la matrice favorise l’angiogenèse (fibronectine, collagene IV, et laminine ). • 8 intégrines sont exprimées lors de l’angiogenèse: Fibronectine-R: α5β β1 Vitronectine-R: αvβ β3, αvβ β5 Collagene R: α1β β1, α2β β1 Laminine-R: α3β β1, α6β β4 Thrombospondine-R: α4β β1 α5β1 • • • α1β β1, α2β β1 récepteur de la Fibronectine, via RGD séquences . αvβ β3 , αvβ β5 α5 knock-out : mort à E10.5 par défaut d’angiogenèse. • Récepteurs pour la Vitronectine, via des séquences RGD. • Anti-α αvβ β3 et αvβ β5, ou les peptides (RGD) inhibent l’angiogenèse. • Actuellement, anti-α αvβ β3 mAb sont testés chez des patients avec mélanomes métastatiques. Fibronectine knockout: phénotype proche. • Recepteurs du Collagène fibrillaire et non-fibrillaire . • VEGF upregulate α1β β1 et α2β β1 endothéliales. • α1 et α2 knockout : pas d’anomalies. Mais diminution des tumeurs implantables Quel est le lien entre l’hypoxie et le VEGF ? Le complexe multiprotéique VHL et le facteur de transcription HIF1 (hypoxia inductible factor) Les VEGF • Facteur angiogénique clé : – Premier facteur angiogénique décrit – Rôles dans : • • • • L’induction de la perméabilité vasculaire La stimulation de la prolifération, de la migration des cellules endothéliales Facteur trophique pour les cellules endothéliales Rôle dans la mobilisation des cellules souches hématopoiétiques • Action du VEGF complémentaire d’autres facteurs dont l’angiopoiétine 1 et son récepteur Tie 2, et TGF-β Stabilisation des vaisseaux VEGF-multiplicité d’actions….. + Et VEGF-B, C, D, …… Angiogenèse ANGIOGENESE TUMORALE VEGF/VEGF-R PlGF VEGF-A VEGF-B VEGFR-2 (Flk-1/KDR) VEGFR-1 VEGF-C VEGF-D VEGFR-3 (Flt-4) (Flt-1) Angiogenesis Angiogenesis Lymphangiogenesis Lymphangiogenesis VEGF -/- et +/létalité à E11-12 par défaut de vasculogenèse Vaisseaux primaires Hémangioblastes mésodermiques instable Facteurs diffusibles stable PDGF-β β -/Hémorragies multiples à la naissance par défaut des péricytes J18 Vaisseaux remodelés Survie: Corrélation entre densité vasculaire et taux de VEGF Adénocarcinomes coliques N- (sans ganglions) Takahashi Y et al. Arch Surg. 1997;132:541 Cancers du colon Cancers du rein VEGF “le retour” Production vitale pour un tissu hypoxique Transcription HIF1- dépendante Stabilisation du mRNA traduction 5’ UTR du VEGF mRNA IRES (internal ribosomal entry site) mRNA-binding protéine HuR Se fixe spécifiquement à une région en 3’ UTR ( et transfert cytoplasmique) “double regulation” régulation de VEGF-R également Le VEGF n’est pas seul: Adrénomédulline • Peptide de 52 AA isolé en 1993 à partir de phéochromocytome Kitamura et al. Biochem Biophys Res Commun vol. 192(2), 553–560, 1993 • Peptide vasodilatateur apparenté au CGRP (Famille calcitonin/CGRP/amylin) • Expression ADM et récepteur dans de nombreuses lignées tumorales humaines : – – – • Glioblastome Tumeurs bronchiques (CPC et CBNPC) Peu de données dans la littérature sur l’expression de l’adrénomédulline dans les RCC Peu de données dans la littérature sur l’expression de l’ADM dans les RCC Fujita Y and al. International Journal of Urology. Vol. 9(6): 285-295.2002 Adrénomédulline Régulation de l’expression • HRE dans la région promotrice du gène de l’ADM • Augmentation de l’expression de l’ADM par HIF1 Mercedes Garayoa and al. Molecular Endocrinology. Vol. 14(6), 848–862, 2000 Son V. Nguyen and al. Biochemical and Biophysical Research Communications. Vol. 265, 382–386, September 28, 1999 • Action de l’ADM sur un mode paracrine/ autocrine Miller MJ and al. Journal of Biological Chemistry, Vol. 271(38): 23345–23351. 1996 Adrénomédulline Récepteurs Adrénomédulline Fonctions • ADM impliquée : – Néoangiogénèse tumorale Ishikawa T and al. Oncogene. Vol. 22, 1238–1242, November 4, 2003 – Croissance tumorale in vitro Miller MJ and al. The Journal of Biological Chemistry. Vol. 271, 23345–23351, September 20, 1996 Augmentation de l’expression de BCL2 ? Oehler MK and al. Oncogene. Vol. 20, 2937-2945, February 26, 2001 – Survie cellulaire in vitro Martinez A and al. Journal of the National Cancer Institute, Vol. 94, No. 16, August 21, 2002 • Echappement des cellules tumorales au système immunitaire Echappement à la lyse cellulaire induite par le complément via une dégradation du C3b par le complexe facteur H-ADM Régulation de l’expression et rôle de l’adrénomédulline Expression de l’adrénomédulline dans les RCCs CC-RCC de grade II CC-RCC de grade I Etudes fonctionnelles in vitro AM et prolifération tumorale 1. Expression et sécrétion d’AM par les cellules tumorales BIZ et 786-O 2. Effets positifs de l’AM sur la prolifération cellulaire AM, chimiotactisme et invasion tumorale 1. Effets positifs de l’AM sur le recrutement des cellules tumorales et l’invasion de celles-ci 2. Effets inhibés par Ac anti-AM ou anti-AMR 3. Effets inhibés par Ac polyclonaux anti-AM ou anti-AMR P<10-2 P<0.05 P<10-3 DEVILLE JL et al. Int. J. Cancer. 2009 Hypoxie tumorale et résistance acquise aux thérapies antiangiogéniques Mécanismes de résistances aux antiangiogéniques Hypothèses Bergers et al. Nature Reviews cancer 2008 Mécanismes de résistance aux antiangiogéniques Trois mécanismes principaux : • 1) Sélection de mutants cellulaires tumoraux résistants à l’hypoxie, moins dépendants de l’angiogenèse tumorale • 2) Enrichissement tumoral progressif en vaisseaux matures, couverts de péricytes, moins sensibles aux anti-angiogéniques • 3) Redondance aux stades avancés des facteurs de croissance proangiogéniques: – – – – – – Fibroblast growth factor (FGF) Angiopoïétine-1 et -2, IL-6, IL-8 Placental growth factor (PLGF), platelet-derived growth Factor (PDGF), Ephrines A1 et A2 Restauration péricytaire Recrutement de précurseurs médullaires Résistance acquise Activation de voies de signalisation de substitution Activation de nouvelles voies proangiogéniques liée à l’hypoxie tumorale crée par le traitement antiangiogénique Voies mises en jeu : bFGF, angiopoïétine, adrénomédulline, Bergers et al. Nature Reviews cancer 2008 éphrines… Rôle de l’hypoxie induite par le traitement antiangiogénique et résistance Résistance acquise Rôle possible de la voie de l’adrénomédulline • Expression de l’AM induite par HIF1 • Recrutement des cellules musculaires vasculaires • Action synergique avec VEGF dans la morphogenèse vasculaire mais : – – Tubulogenèse induite par l’AM non inhibé par des anticorps anti-VEGF in vitro. VEGF inutile dans la morphogenèse vasculaire induite par l’AM Nikitenko LL et al. British Journal of Cancer. 2006 Ouafik L et al. Am. J. Pathol. 2002 Résistance acquise La voie du bFGF : Modèle in vitro dans le cancer du pancréas Casanovas O. Cancer Cell. 2005 Transactivation du récepteur VEGF-R2 • Activation du récepteur CLR/RAMP2 de l’AM • Activation du récepteur VEGF-R2 indépendante de la présence du ligand VEGFR2 Guidolin D et al Peptides 2008 • Voie activée malgré anticorps anti-VEGF Résistance acquise Résistances aux thérapeutiques anti-VEGF par recrutement de précurseurs hématopoïétiques d’origine médullaire Recrutement de ces précurseurs lié à l’hypoxie Cellules CD45+ médullaires : Localisations périvasculaires Cellules CD45 - : différenciation endothéliale Cellules myeloïdes neutrophiles : Activation de l’angiogenèse Okazaki T et al. Int Immunol 2006 Kerbel RS et al. NEJM 2008 Résistance acquise Remodelage vasculaire sous anti-VEGF • Vaisseaux matures recouverts de péricytes • Moins sensibles aux antiangiogéniques Inai T. et al. Am J Pathol 2004 Résistance tumorale intrinsèque Hypothèses • Patients ne présentant aucune réponse aux traitements antiangiogéniques. • Hypothèses : – Préexistence d’une multitude de facteurs angiogéniques redondants – Préexistence d’une protection vasculaire médiée par les cellules inflammatoires – Hypovascularisation et indifférence aux AA – Utilisation invasive de vaisseaux normaux sans angiogenèse (astrocytomes) – Statut p53 Résistance tumorale intrinsèque Résistance à l’hypoxie par mutation de p53 • Diminution de l’apoptose liée à l’hypoxie • Nécessité moindre de néovaisseaux • Réponse thérapeutique moindre aux antiVEGF YU JL. Science. 2002 Intégrines endothéliales • L’adhésion des intégrines à la matrice favorise l’angiogenèse (fibronectine, collagene IV, et laminine ). • 8 intégrines sont exprimées lors de l’angiogenèse: Fibronectine-R: α5β β1 Vitronectine-R: αvβ β3, αvβ β5 Collagene R: α1β β1, α2β β1 Laminine-R: α3β β1, α6β β4 Thrombospondine-R: α4β β1 α5β1 • • • α1β β1, α2β β1 récepteur de la Fibronectine, via RGD séquences . αvβ β3 , αvβ β5 α5 knock-out : mort à E10.5 par défaut d’angiogenèse. • Récepteurs pour la Vitronectine, via des séquences RGD. • Anti-α αvβ β3 et αvβ β5, ou les peptides (RGD) inhibent l’angiogenèse. • Actuellement, anti-α αvβ β3 mAb sont utilisés chez des patients avec mélanomes métastatiques. Fibronectine knockout: phénotype proche. • Recepteurs du Collagène fibrillaire et non-fibrillaire . • VEGF upregulate α1β β1 et α2β β1 endothéliales. • α1 et α2 knockout : pas d’anomalies. Mais diminution des tumeurs implantables Conclusions • Bases physiopathologiques complexes • Lien fort entre hypoxie et angiogenèse • Hypoxie/ progression tumorale • Efficacité chez les patients métastatiques des traitements anti-angiogéniques.